景德镇专业回收废钼哪家好啊
序号
类别
项目
实施依据
执行单位
1
农林业
限制类:
1、天然草场超载放牧
2、单线 5 万立方米/年以下的普通刨花板、高中密度纤维板生
产装置
3、单线 3 万立方米/年以下的木质刨花板生产装置
4、1000 吨/年以下的松香生产项目
5、兽用粉剂/散剂/预混剂生产线项目（持有新兽书的品种
和自动化密闭式率混合生产工艺除外）
6、转瓶培养生产方式的兽用细胞苗生产线项目（持有新兽
书的品种和采用新技术的除外）
7、松脂初加工项目
8、以林木为原料的一次性木制品与木制包装的生产和使
用以及木竹加工综合利用率偏低的木竹加工项目
9、1 万立方米/年以下的胶合板和细木工板生产线
10、珍稀植物和古树的根雕制造业
11、以野外资源为原料的珍贵濒危野生动植物加工
12、不符合生态养殖要求的湖泊、水库投饵网箱养殖
13、不利于生态环境保护的开荒性农业开发项目
14、缺水地区、国家生态脆弱区纸浆原料林基地建设
15、不符合国家规划及产业的粮食转化乙醇、食用植物油
料转化生物燃料项目
16、破坏林地、湿地、草地的开发项目
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
淘汰类:
1、湿法纤维板生产工艺2、滴水法松香生产工艺
3、农村传统老式炉灶炕
4、以木材、伐根为主要原料的土法活性炭生产
5、超过生态承载力的旅游活动和材等林产品采集
6、严重缺水地区建设灌溉型造纸原料林基地
7、种植前溴甲烷土壤熏蒸工艺
2
煤炭
限制类:
1、低于 30 万吨/年的煤矿（其中山西、内蒙古、陕西低于 120
万吨/年，宁夏低于 60 万吨/年），低于 90 万吨/年的煤与瓦斯突出矿井
2、采用非机械化开采工艺的煤矿项目
3、煤炭资源回收率达不到国家规定要求的煤矿项目
4、未按国家规定程序报批矿区总体规划的煤矿项目
5、井下回采工作面超过 2 个的煤矿项目
6、开采深度超过《煤矿规程》规定的煤矿、产品质量达
不到《商品煤质量管理暂行办法》要求的煤矿、开采技术和装备列
入《煤炭生产技术与装备导向（2014 年版）》限制目录且无法实施技术改造的煤矿
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
淘汰类:
1、与大型煤矿井田平面投影重叠的小煤矿
2、山西、内蒙古、陕西、宁夏 30 万吨/年以下（不含 30 万吨/年），河北、辽宁、吉林、黑龙江、江苏、安徽、山东、河南、甘肃、青海、新疆 15
万吨/年以下（不含 15 万吨/年），其他地区 9 万吨/年及以下（含 9 万吨/年）的煤矿；长期停产停建的 30 万吨/年以下（不含 30
万吨/年）“僵尸企业”煤矿；30 万吨/年以下（不含 30万吨/年）冲击地压、煤与瓦斯突出等灾害严重煤矿。属于满足林区、
边远山区居民生活用煤需要或承担供应任务且符合资源、、、技术、能耗等标准的煤矿，经省级人民政府批准，可以暂时保留或推迟退出
3、既无降硫措施又无达标排放用户的高硫煤炭（含硫高于 3%）
生产矿井，不能就地使用的高灰煤炭（灰分高于 40%）生产矿井以及高砷煤炭（动力用煤中砷含量超过 80μg/g，炼焦用煤中砷含量超过
35μg/g）生产煤矿
4、6AM、φM-2.5、PA-3 型煤用浮选机
5、PB2、PB3、PB4 型矿用隔爆高压开关
6、PG-27 型真空过滤机
7、X-1 型箱式压滤机
8、ZYZ、ZY3 型液压支架
9、不能实现洗煤废水闭路循环的选煤工艺、不能实现粉尘达
标排放的干法选煤设备
10、开采范围与自然保护区、风景名胜区、饮用水水源保护区
重叠的煤矿（根据法律法规及国家有关文件要求进行淘汰）
3
电力
限制类:
1、大电网覆盖范围内，发电煤耗高于 300 克标准煤/千瓦时的
湿冷发电机组，发电煤耗高于 305 克标准煤/千瓦时的空冷发电机组
2、无下泄生态流量的引水式水力发电
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
淘汰类:
1、不达标的单机容量 30 万千瓦级及以下的常规燃煤火电机组
（综合利用机组除外）、以发电为主的燃油锅炉及发电机组
4
石化化工
限制类:
1、新建 1000 万吨/年以下常减压、150 万吨/年以下催化裂化、
100 万吨/年以下连续重整（含芳烃抽提）、150 万吨/年以下加氢裂化生产装置
2、新建 80 万吨/年以下石脑油裂解制乙烯、13 万吨/年以下丙
烯腈、100 万吨/年以下精对苯二甲酸、20 万吨/年以下乙二醇、20万吨/年以下苯乙烯（干气制乙苯工艺除外）、10
万吨/年以下己内酰胺、乙烯法醋酸、30 万吨/年以下羰基合成法醋酸、天然气制甲醇（CO2 含量 20%以上的天然气除外），100
万吨/年以下煤制甲醇生产装置，丙酮氰醇法甲基丙烯酸甲酯、粮食法丙酮/丁醇、氯醇法环氧丙烷和皂化法环氧氯丙烷生产装置，300
吨/年以下皂素（含水解物）生产装置
3、新建 7 万吨/年以下聚丙烯、20 万吨/年以下聚乙烯、乙炔法
聚氯乙烯、起始规模小于 30 万吨/年的乙烯氧氯化法聚氯乙烯、10万吨/年以下聚苯乙烯、20 万吨/年以下丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物（ABS）、3
万吨/年以下普通合成胶乳-羧基丁苯胶（含丁苯胶乳）生产装置，新建、改扩建氯丁橡胶类、丁苯热塑性橡胶类、聚氨酯类和聚丙烯酸酯类中溶剂型通用胶粘剂生产装置
4、新建纯碱（井下循环制碱、天然碱除外）、烧碱（废盐综合
利用的离子膜烧碱装置除外）、30 万吨/年以下硫磺制酸（单项金属离子≤100ppb 的电子级硫酸除外）、20
万吨/年以下硫铁矿制酸、常压法及综合法硝酸、电石（以大型工艺设备进行等量替换的除外）、单线产能 5 万吨/年以下氢氧化钾生产装置
5、新建三聚磷酸钠、六偏磷酸钠、三氯化磷、五硫化二磷、磷酸氢钙、氯酸钠、少钙焙烧工艺重铬酸钠、电解二氧化锰、碳酸
钙、无水硫酸钠（盐业联产及副产除外）、碳酸钡、硫酸钡、氢氧化钡、氯化钡、硝酸钡、碳酸锶、白炭黑（气相法除外）、氯化胆碱生产装置
6、新建黄磷，起始规模小于 3 万吨/年、单线产能小于 1 万吨/ 年氰化钠（折 100%），单线产能 5
千吨/年以下碳酸锂、氢氧化锂，干法氟化铝及单线产能 2 万吨/年以下无水氟化铝或中低分子比冰晶石生产装置
7、新建以石油、天然气为原料的氮肥，采用固定层间歇气化
技术合成氨，磷铵生产装置，铜洗法氨合成原料气净化工艺
8、新建高毒、高残留以及对环境影响大的农原（包括氧
乐果、水胺硫磷、甲基异柳磷、甲拌磷、特丁磷、杀扑磷、溴甲烷、灭多威、涕灭威、克百威、敌鼠钠、敌、杀、杀鼠醚、溴敌隆、溴、肉毒素、杀虫双、灭线磷、磷化铝，有机氯类、有机锡类杀虫剂，福美类杀菌剂，复硝酚钠（钾）、氯磺隆、胺苯磺隆、甲磺隆等）生产装置
9、新建草甘膦、毒死蜱（水相法工艺除外）、三唑磷、百草枯、
百菌清、阿维菌素、吡虫啉、乙草胺（甲叉法工艺除外）、氯化苦生产装置
10、新建硫酸法钛白粉、铅铬黄、1 万吨/年以下氧化铁系颜料、
溶剂型涂料（鼓励类的涂料品种和生产工艺除外）、含异氰脲酸三缩水甘油酯（TGIC）的粉末涂料生产装置
11、新建染料、染料中间体、有机颜料、印染助剂生产装置（鼓
励类及采用鼓励类技术的除外）
12、新建氟化氢（HF，企业下游深加工产品配套自用、电子级
及湿法磷酸配套除外），新建初始规模小于 20 万吨/年、单套规模小于10 万吨/年的甲基氯硅烷单体生产装置，10 万吨/年以下（有机硅配套除外）和
10
万吨/年及以上、没有副产四氯化碳配套处置设施的甲烷氯化物生产装置，没有副产三氟甲烷配套处置设施的二氟一氯甲烷生产装置，可接受用途的全氟辛基磺酸及其盐类和全氟辛基磺酰氟（其余为淘汰类）、全氟辛酸（PFOA），六氟化硫（SF6，高纯级除外），特定豁免用途的六溴环十二烷（其余为淘汰类）生产装置
13、新建斜交轮胎和力车胎（含手推车胎）、锦纶帘线、3 万吨
/年以下钢丝帘线、再生胶（常压连续脱硫工艺除外）、橡胶塑解剂五氯硫酚、橡胶促进剂二硫化四甲基秋兰姆（TMTD）生产装置
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
淘汰类:
1、200 万吨/年及以下常减压装置（青海格尔木、新疆泽普装
置除外），采用明火高温加热方式生产油品的釜式蒸馏装置，废旧橡胶和塑料土法炼油工艺，焦油间歇法生产沥青，2.5
万吨/年及以下的单套粗（轻）苯精制装置，5 万吨/年及以下的单套煤焦油加工装置
2、10 万吨/年以下的硫铁矿制酸和硫磺制酸（边远地区除外），
平炉氧化法高锰酸钾，隔膜法烧碱生产装置（作为废盐综合利用的可以保留），平炉法和大锅蒸发法硫化碱生产工艺，芒硝法硅酸钠（泡花碱）生产工艺，间歇焦炭法二硫化碳工艺
3、单台产能 5000 吨/年以下和不符合准入条件的黄磷生产装置，有钙焙烧铬化合物生产装置，单线产能 3000
吨/年以下普通级硫酸钡、氢氧化钡、氯化钡、硝酸钡生产装置，产能 1 万吨/年以下氯酸钠生产装置，单台炉容量小于 12500
千伏安的电石炉及开放式电石炉，高汞催化剂（氯化汞含量
6.5%以上）和使用高汞催化剂的乙炔法聚氯乙烯生产装置，使用汞或汞化合物的甲醇钠、甲醇钾、乙醇钠、乙醇钾、聚氨酯、乙醛、烧碱、生物杀虫剂和部抗菌剂生产装置，氨钠法及氰熔体氰化钠生产工艺
4、单线产能 1 万吨/年以下三聚磷酸钠、0.5 万吨/年以下六偏
磷酸钠、0.5 万吨/年以下三氯化磷、3 万吨/年以下饲料磷酸氢钙、5000 吨/年以下工艺技术落后和污染严重的氢氟酸、5000
吨/年以下湿法氟化铝及敞开式结晶氟盐生产装置
5、单线产能 0.3 万吨/年以下氰化钠（100%氰化钠）、1 万吨/
年以下氢氧化钾、1.5 万吨/年以下普通级白炭黑、2 万吨/年以下普通级碳酸钙、10 万吨/年以下普通级无水硫酸钠（盐业联产及副产除外）、0.3
万吨/年以下碳酸锂和氢氧化锂、2 万吨/年以下普通级碳酸钡、1.5 万吨/年以下普通级碳酸锶生产装置
6、半水煤气氨水液相脱硫、天然气常压间歇转化工艺制合成
氨、一氧化碳常压变化及全中温变换（高温变换）工艺、没有配套硫磺回收装置的湿法脱硫工艺，没有配套建设吹风气余热回收、造气炉渣综合利用装置的固定层间歇式煤气化装置，没有配套工艺冷
凝液水解解析装置的尿素生产设施
7、钠法百草枯生产工艺，敌百虫碱法敌敌畏生产工艺，小包
装（1 公斤及以下）农产品手工包（灌）装工艺及设备，雷蒙机法生产农粉剂，以六氯苯为原料生产五氯酚（钠）装置
8、用火直接加热的涂料用树脂、四氯化碳溶剂法制取氯化橡
胶生产工艺，100
吨/年以下皂素（含水解物）生产装置，盐酸酸解法皂素生产工艺及污染物排放不能达标的皂素生产装置，铁粉还原法工艺（4,4-二氨基二苯乙烯-二磺酸[DSD
酸]、2-氨基-4-甲基-5-氯苯磺酸[CLT 酸]、1-氨基-8-萘酚-3,6-二磺酸[H 酸]三种产品暂缓执行）
9、50 万条/年及以下的斜交轮胎和以天然棉帘子布为骨架的轮
胎、1.5 万吨/年及以下的干法造粒炭黑（特种炭黑和半补强炭黑除外）、3 亿只/年以下的天然胶乳套，橡胶硫化促进剂 N-氧联二
（1,2-亚乙基）-2-苯并噻唑次磺酰胺（NOBS）和橡胶防老剂 D 生产装置
10、氯氟烃（CFCs）、含氢氯氟烃（HCFCs，作为自身下游化
工产品的原料且不对外销售的除外），用于清洗的 1,1,1-三氯乙烷（甲基氯仿），主产四氯化碳（CTC）、以四氯化碳（CTC）为加工助剂的产品，以
PFOA
为加工助剂的含氟聚合物生产工艺，含滴滴涕的涂料、采用滴滴涕为原料非封闭生产三氯杀螨醇生产装置（根据国家履行公约总体计划要求进行淘汰）
1、改性淀粉、改性纤维、多彩内墙（树脂以硝化纤维素为主，
溶剂以二甲苯为主的 O/W 型涂料）、氯乙烯-偏氯乙烯共聚乳液外墙、
焦油型聚氨酯防水、水性聚氯乙烯焦油防水、聚乙烯醇及其缩醛类
内外墙（106、107 涂料等）、聚醋酸乙烯乳液类（含乙烯/醋酸乙烯
酯共聚物乳液）外墙涂料
2、有害物质含量超标准的内墙、溶剂型木器、玩具、汽车、
外墙涂料，含双对氯苯基三氯乙烷、三丁基锡、全氟辛酸及其盐类、
全氟辛烷磺酸、红丹等有害物质的涂料
3、在还原条件下会裂解产生 24 种有害芳香胺的偶氮染料（非
纺织品用的领域暂缓）、九种致癌性染料（用于与人体不直接接触
的领域暂缓）
4、含苯类、苯酚、苯甲醛和二（三）氯甲烷的脱漆剂，立德
粉，聚氯乙烯建筑防水接缝材料（焦油型），107 胶，瘦肉精，多氯
5
信息产业
限制类:
1、激光视盘机生产线（VCD 系列整机产品）
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
6
钢铁
限制类:
1、钢铁联合企业未同步配套建设干熄焦、装煤、推焦除尘装
置的炼焦项目；独立焦化企业未同步配套建设装煤、推焦除尘装置
的炼焦项目
2、180 平方米以下烧结机（铁合金烧结机、铸造用生铁烧结机
除外）
3、有效容积 400 立方米以上 1200 立方米以下炼钢用生铁高炉；
1200 立方米及以上但达不到、能耗、等强制性标准的炼钢
用生铁高炉
4、公称容量 30 吨以上 100 吨以下炼钢转炉；公称容量 100 吨
及以上但达不到、能耗、等强制性标准的炼钢转炉
5、公称容量 30 吨以上 100 吨（合金钢 50 吨）以下电弧炉；
公称容量 100 吨（合金钢 50 吨）及以上但达不到、能耗、等强制性标准的电弧炉
6、1450 毫米以下热轧带钢（不含钢）项目
7、30 万吨/年及以下热镀锌板卷项目
8、20 万吨/年及以下彩涂层板卷项目
9、含铬质耐火材料
10、普通功率和高功率石墨电压型设备、焙烧设备和生产线
11、直径 600 毫米以下或 2 万吨/年以下的超高功率石墨电生
产线
12、8 万吨/年以下预焙阳（炭块）、2 万吨/年以下普通阴
炭块、4 万吨/年以下炭电生产线
13、单机 120 万吨/年以下的球团设备（铁合金、铸造用生铁球
团除外）
14、顶装焦炉炭化室高度 1.9—2.1 ,说明有部分降解荧光光谱
链 cDNA 的合成:
以 RNA 为模板，反转录为 cDNA，由逆转录酶催化，该酶合成 DNA 时需要引
物引导，常用引物是 oligo dT、随机引物或基因特异引物（GSP）维生素 B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，
对热稳定。维生素 B2 溶液在 430～440 nm 蓝光的照射下，发出绿荧光，荧
光峰在 535 nm。维生素 B2 在 pH=6～7 的溶液中荧光强度大，在 pH=11 的碱
性溶液中荧光消失，所以可以用荧光光度法测维生素 B2 的含量。
三、试剂与仪器:
总 RNA 提取试剂盒（天根 RNAprep Pure Cell/Bacteriit）；链 cDNA
合成试剂盒（Tara PrimeScript™ RT Master Mix）；无菌，无ＲＮＡ酶离心
管无菌，无 RNA 酶枪头低温离心机等
四、实验操作:
1.提取总 RNA
1） 裂解细胞:确定细胞数量，吸除细胞培养基上清，加入 PBS 后吸除，加入
600ul 裂解液 RL（胍盐/ß-巯基乙醇）5min。
2） 将溶液转移至过滤柱 CS 上(过滤柱 CS 放在收集管中)，12,000 rpm 离
心 2 min，收集滤液。
3） 向滤液中加入 1 倍体积 70%乙醇，混匀，得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱
CR3 中， 12,000 rpm 离心 60 sec，倒掉收集管中的废液。
4） 向吸附柱 CR3 中加入 350
μ
l 去蛋白液 RW1，12,000 rpm 离心 60 sec，倒掉
收集管中的废液，将吸附柱 CR3 放回收集管中。
5） 向吸附柱 CR3 加入 80
μ
l 的 DNase I 工作液（10
μ
l DNase I 储存液
+70
μ
l RDD 溶液），室温放置 15 min。
6）向吸附柱 CR3 中加入 350
μ
l 去蛋白液 RW1，12,000 rpm 离心 60 sec，倒掉
收集管中的废液，将吸附柱 CR3 放回收集管中。
7）向吸附柱 CR3 中加入 500
μ
l 漂洗液 RW ，室温静置 2 min，12,000 rpm 离心
60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CR3 放回收集管中。再重复一次。
8）12,000 rpm 离心 2 min，倒掉废液。将吸附柱 CR3 置于室温放置 10 分钟，以
彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
9）将吸附柱 CR3 转入一个新的 RNase-Free 离心管中，加入 30-100
μ
l
RNase-Free ddH2O 室温放置 2 min，12,000 rpm 离心 2 min，得到 RNA 溶液。
10）RNA 鉴定分析（浓度，纯度）。2. 采用 TaRa PrimeScript RT Master Mix 进行 cDNA 链合成:
1）按下列组分配制 RT 反应液
5X PrimeScrip Mix 2
μ
l
Total RNA (50
μ
M) -- ul
RNase free H2O up to 10
μ
l
2）反转录反应条件如下
37℃ 15min （反转录反应）
85℃ 5sec （反转录酶失活反应）
五、实验注意事项
1. 严格控制外源性 RNA 酶的污染:外源性的 RNA 酶存在于操作人员的手汗、唾
液等，也可存在于灰尘中，造成器械、玻璃制品、塑料制品、电泳槽、研究人
员的手及各种试剂的污染。
2. 大限度地抑制内源性的 RNA 酶:而各种组织和细胞中则含有大量内源性的
RNA 酶。
3. 戴手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致 RNase 污染。
4. 使用无 RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
5. RNA 在裂解液 RL 中时不会被 RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不
含 RNase 的塑料和玻璃器皿。
6. 配制溶液应使用无 RNase 的水。
实验三 real-time PCR 测端粒酶 mRNA 表达
一、实验目的
1.掌握 RT-PCR 基因扩增的原理和过程
2.了解端粒酶的结构与功能
二、实验原理:
1. 实时定量 PCR 技术:
利用荧光信号的变化实时检测 PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，
通过 Ct 值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。
Ct 值的定义:PCR 扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数。
Xn = X0 × （
1＋En）Ct
lg Xt ＝lg X0 ＋ Ct lg（
1＋En）
Ct = -k lg X0 ＋ b
X0 :起始模板数量
En:扩增效率
Xt:荧光扩增信号达到阈值时扩增产物的量，在阈值设定以后，它是一个常数
Log 模板起始浓度与 Ct 值呈线性关系。
模板 DNA 量越多，荧光达到阈值的循环数越少，即 Ct 值越小。
2.常用荧光标记方法:
特异性荧光标记 TaqMan Probe
非特异性荧光标记 SYBR Green I:是一种结合于 dsDNA 双螺旋小沟区域
的具有绿激发波长的染料。
问题点:
SYBR Green I 与双链 DNA 进行结合后散发荧光，因此如果反应体系
中有非特异性扩增或引物二聚体的产生，也将同时被检测，从而可能导致检测
结果不准确。
关键点:
设计合适引物，非特异性扩增！
端粒酶:通过识别并结合富含胞嘧啶 C 的端粒末端，以自身 RNA 为模板， TER
催化，合成端粒的 DNA 重复序列，从而阻止随着 DNA 复制和细胞分裂所
造成的端粒的不断缩短， 进而稳定染体的长度，避免细胞因端粒丢失
所导致的凋亡。因此，端粒酶在细胞永生化和肿瘤发生中起着重要作用。
相对定量分析——2 -
∆ ∆
Ct 法
三、试剂与仪器:
1. LightCycler 480 SYBR Green I Master
2. LightCycler 8-Tube Strips (white)
3. 无菌，无ＲＮＡ酶离心管
4. 无菌，无ＲＮＡ酶枪头
四、实验操作:
1. 加样:试剂 体积
模板（稀释 5 倍） 2µl
Master mix，2×conc. 10µl
正向引物 1µl
反向引物 1µl
水，PCR 级别 6µl
总体积 20µl
2.PCR 程序设定:SYBR Green I 选择“SYBR Green I /HRM Dye”，反应总体积
20 ul。
3.设定每个程序中对应步骤的①温度(Target)、②信号获取模式(Acquisition
Mode)及 ③时间(Hold)。
4.设定完成后，放入样板，窗口右下方的“Start Run” 按钮将由灰变为蓝，
此时即可点击之，开始运行实验。
5.运行完毕后，点击界面左侧“Sample Editor”，对样本详细信息进行编辑。
6.点击界面左边的“Analysis”，进入分析界面，进行 Tm 分析 (Tm Calling) 分
析和相对定量 (Relative Quantification) 分析
五、结果分析
2 - △△Ct 法:假设目的基因和参照基因扩增效率都接近 100%
△Ct（第 n 组）＝16－17＝-1 △Ct（组）＝18－17.4=0.6
△△Ct=△Ct（第 n 组）－△Ct（组）＝-1－0.6＝－1.6
比率（癌细胞组/正常细胞组）=2－△△Ct＝2－（－1.6） = 3
所以 TERT 基因在癌细胞的表达水平是正常细胞的 3 倍。
要求实验报告分析出自己组对比组的结果
六、实验注意事项
1、能标准的使用微量移液器，使重复样本得到相同的结果。2、学会分析溶解曲线，得到循环 CT 值后学会如何分析结果。
实验四 蛋白分子量测定——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
一、实验目的
1.
学
SDS-PAGE
测定蛋白质分子量的基本原理
2.
掌握
SDS-PAGE
垂直板电泳的操作方法
二、实验原理
聚丙烯酰胺凝胶（
PAGE
）是由丙烯酰胺（
Acr
）和交联试剂
N,N
’
-
甲叉双丙
烯酰胺
(Bis)
在有引发剂（如过硫酸铵）和增速剂（如
N,N,N
’
,N
’
-
四甲基乙二胺，
TEMED
）的情况下聚合而成的。在一定浓度范围内，改变聚合体系中
Acr
和
Bis
的比例，可得到不同网眼大小的凝胶，由于凝胶的三维网状结构，对在凝胶中泳
动的不同分子量的质点有着选择和阻碍，因此具有分子筛效应，决定着聚丙烯酰
胺凝胶的有效分离笵围。
SDS-
聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进了十二烷基硫酸
钠（
sodium dodecyl sulfate
，简称
SDS
），
SDS
是一种阴离子去污剂，它能破坏
蛋白质分子之间以及与其他物质分子之间的非共价键，使蛋白质变性而改变原有
的空间构象。是在强还原剂，如巯基乙醇存在下，由于蛋白质分子内的二硫
键被还原剂打开，不易再氧化，这就了蛋白质分子与
SDS
充分结合，形成
带负电荷的
SDS-
蛋白质复合物。
带负电荷的蛋白质
-SDS
复合物由于结合了大量的
SDS
，使蛋白质丧失了原有的电荷状态，形成了仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除
了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异。
蛋白质
-SDS
复合物在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒。不同蛋
白质的
SDS
复合物的短轴长度都一样，约为
1.8nm
，而长轴则随蛋白质的分子
量成正比变化。这样的蛋白质
-SDS
复合物在凝胶中的迁移率，受蛋白质原
有电荷和形状的影响，而只是椭圆棒的长度，也就是蛋白质分子量的函数。
lgMw = -bRm + K
Mw
:蛋白质的分子量；
Rm
:相对迁移率
b
: 斜率
;
K
:截距
当条件一定时，
b
，
K
均为常数，即此时
lgMw
与
Rm
的关系为线性关系，
如以
lgMw
对
mR
作图，应得到一条直线，如上图。
若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量的对数作图，可获得一条标
准曲线。未知蛋白质的相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲
线上求得分子量。
三、实验试剂及仪器
1.
实验试剂
（
1
）
30%
丙烯酰胺（
Acr
）:
Acr/
甲叉双丙烯酰胺
(Bis)=29:1
（
2
）
10%SDS
（十二烷基磺酸钠）
（
3
）
10%
过硫酸铵
(AP)
（
4
）
TEMED
（四甲基乙二胺）
（
5
）
2
×上样缓冲液:
10%SDS
（
4ml
）
+
巯基乙醇（
1ml
）
+0.2%
溴酚蓝（
2ml +
甘油
2ml +1M pH6.8Tris-HCl
（
1ml
）
（
6
） 浓缩胶缓冲液（
1M Tris-Cl
缓冲液
pH6.8
）
（
7
） 分离胶缓冲液（
1.5M Tris-Cl
缓冲液
pH8.8
）
（
8
） 电泳缓冲液
: (SDS 20g
，
Tris 60g,
甘氨酸
282.2g, pH8.3
）加蒸馏水使其溶
解后定容至
2L
。
（
9
） 固定液:乙醇
500ml
，冰乙酸
100ml
混匀，
（
10
） 染液:考马斯亮蓝
R250 1.25g
，甲醇
225ml
，冰乙酸
50ml
，蒸馏水定
溶至
1L
。
（
11
） 脱液:冰乙酸
80ml
，乙醇
250ml
，加蒸馏水定容至
1L
。
2.
实验仪器
（
1
）垂直板电泳装置、电泳仪、制胶架
（
2
）移液枪、移液管
（
3
） 烧杯、培养皿
（
4
） 离心机
四、实验步骤
1.
装板
将垂直板型电泳装置内的板状凝胶模子取出，将玻璃片洗净、凉干、嵌入
凹槽中，形成一个“夹心”凝胶腔，
把装好的凝胶腔置于仰放的电上槽。将电泳槽、凝胶模子串成一体的垂
直板型电泳装置，垂直放置在水平台面上，灌注胶液。
2.
分离胶的配制（
12%
）
试剂
体积
H2O
3.35
（
ml
）
凝胶贮备液
2.5
（
ml
）
分离胶缓冲液
(pH8.8)
2.5
（
ml
）
10% SDS
0.1
（
ml
）
TEMED
5
（
ul
）
10%
过硫酸铵
50
（
ul
）
总体积
10
（
ml
）
3.
分离胶的灌注和聚合
用移液管将所配制的分离胶缓冲液沿着凝胶腔的长玻璃板的内面缓缓注
入，留出梳齿的齿高加
1cm
的空间以便灌注浓缩胶，然后加满蒸馏水。待分离胶凝固后，倒出蒸馏水，用滤纸吸干。
4.
浓缩胶的配制（
5%
）
试剂
体积
H2O
2.92
（
ml
）
凝胶贮备液
0.8
（
ml
）
分离胶缓冲液
(pH6.8)
1.25
（
ml
）
10% SDS
0.05
（
ml
）
TEMED
5
（
ul
）
10%
过硫酸铵
25
（
ul
）
总体积
5.05
（
ml
）
5.
浓缩胶的灌注和聚合
用移液管将所配制的浓缩胶缓冲液沿着凝胶腔的长玻璃板的内面缓缓
加入，将梳子插入胶液顶部，放置室温下待其聚合。
6.
样品的准备
在低分子量标准蛋白质和待测样品中分别加入适量还原缓冲液，放入沸水
中加热
3-5min
，取出冷至室温。
7.
加样
加入电缓冲液，小心拔出梳齿，用微量注射器向凝胶梳孔内加样。同时加
入
Marker
。
8.
电泳
上槽接负，下槽接正，打开直流电源，刚开始时，电压控制在不高于
100V
，
电流恒定在
10mA
；样品进入分离胶后，电压控制在不高于
140V
，电流恒定在
20mA
。待指示剂染料（溴酚蓝）迁移至凝胶下沿
1.0cm
处停止电泳。
9.
染和脱
电泳结束后，撬开玻璃板， 小心将胶取出，放入一大培养皿中。
染:加入染液，置于摇床上染
2h
。
脱:染完毕，倒出染液，加入脱液，置于摇床上脱，数小时更换
一次脱液，直至背景清晰，拍照。
10.
相对分子质量的计算
量出分离胶顶端距溴酚蓝间的距离
(cm)
以及各蛋白质样品区带中心与分离
胶顶端的距离
(cm)
，按下式计算相对迁移率
:
蛋白质样品距分离胶顶端迁移距离
(cm)
Rm =
溴酚蓝区带中心距分离胶顶端距离
(cm)
以标准蛋白质分子量的对数对相对迁移率作图，得到标准曲线，根据待测样
品相对迁移率，从标准曲线上计算出其分子量。
五
、
实验结果与分析
1.
根据凝胶结果，依据标准蛋白条带，判断各个蛋白质样品区带大概分子量。
2.
测量样品中各种蛋白质分子的相对迁移率
Rm
值，然后根据标准曲线计算
出各自分子量
3.
对实验操作及结果中不足之处进行分析。
六、实验注意事项
1
．丙烯酰胺和双丙烯酰胺具有很强的神经毒性并容易吸附于皮肤，操作时应免
避沾在脸、手等皮肤上。好戴一次性塑料手套操作。
2
．
10%
过硫酸铵现用现配，
4
℃冰箱贮存不超过
48
小时。
3
．灌制凝胶时，应避免产生汽泡，因为汽泡会影响电泳分离效果。
4.
蛋白加样量要合适。加样量太少，条带不清晰
;
加样量太多则泳道超载，条带
过宽而重叠，甚至覆盖至相邻泳道。
5
．刚灌注分离胶混合溶液后，应在分离胶液面上加
1-2cm
高的水层，以阻隔空
气。胶液面上加水层时要小心，缓缓叠加，以免冲坏凝胶的胶面。
七、思考题
1.
在不连续体系
SDS-PAGE
中，当分离胶加完后，需在其上加一层水，为什么
?
2.
电缓冲液中甘氨酸的作用
?
3.
在不连续体系
SDS-PAGE
中，分离胶与浓缩胶中均含有
TEMED
和
AP
，试述
其作用
?
4.
样品液为何在加样前需在沸水中加热几分钟
?
实验五 糖酵解中间产物的鉴定
一、实验目的
1
．掌握糖酵解中间产物的鉴定方法和原理。
2
．熟悉通过酶的抑制作用调节代谢途径。
3
．了解使中间产物堆积的方法在研究中间代谢中的意义。
二、 实验原理
在细胞质中，一分子葡萄糖通过一系列反应转化为两分子丙酮酸，并伴随着
ATP
生成的一系列反应是有机体获得化学能的原始的途径，也是原核生物和真
核生物糖类物质分解代谢的共同途径。利用碘乙酸对糖酵解过程中的
3-
磷酸甘油
醛脱氢酶特异地且不可逆地抑制作用，使
3-
磷酸甘油醛向前变化而积累。硫
酸肼作为稳定剂，用来保护
3-
磷酸苷油醛使其不自发分解。然后用
2,4-
二硝基苯
肼与
3-
磷酸甘油醛在碱性条件下形成
2,4-
二硝基苯肼
-
丙糖的棕复合物，其棕
程度与
3-
磷酸甘油醛含量成正比。从而明糖的分解代谢过程中，含有
3-
磷
酸甘油醛的中间产物。
三、实验试剂及器材
1.实验材料
新鲜酵母
2. 仪器:
离心管、移液枪；恒温水浴；离心机
3.试剂:
1
）
2,4-
二硝基苯肼
: 0.1 g 2,4-
二硝基苯肼溶于水
100 ml 2 mol/L
盐酸溶液中，储
于棕瓶中备用。
2
）
0.56 mol/L
硫酸肼溶液
:
称取
7.28 g
硫酸肼溶于
50 ml
水中，这时不会溶
解，当加入
NaOH
使
pH
值达
7.4
时则溶解。
3
）
5%
葡萄糖溶液。
4
）
10%
三氯乙酸溶液。
5
）
75 mol/L NaOH
溶液。
6
）
0.002 mol/L
碘乙酸溶液。
四、实验步骤
1．取小烧杯 3 支，编号，分别加入新鲜酵母 0.3 g，并按表 1 分别加入各试剂，
混匀。
2．将各杯混合物分别放入 37℃水浴中保温 1.0 小时，观察发酵管产生气泡的量
有何不同。
3．在 2 号和 3 号杯中按表 2 补加各试剂，摇匀后放 5-10 分钟
4. 将三支离心管中的上清液分别进行离心或者过滤，3000rpm, 3min。
5．取 3 支试管，分别加入上述滤液 0.5 ml，并按表 3 加入试剂和处理。
（取上清液 0.5 ml，加入 0.75 mol/L NaOH 0.5 ml，混匀后在 37℃水浴保温
10 分钟，然后分别向上述试管中加入 0.5 ml 2,4-二硝基苯肼，混匀后在 37℃
水浴保温 10 分钟，然后加入 0.75 mol/L NaOH 3.5 ml，观察实验结果。）
表 1 糖酵解中间产物的鉴定——发酵产生气泡观察
编号
5%
葡萄糖溶
液 （
ml
）
10%
三氯乙
酸（
ml
）
碘乙酸
（
ml
）
硫酸肼
（
ml
）
发泡量
1
10
（
ml
）
2
1
1
2
10
（
ml
）
0
1
1
3
10
（
ml
）
0
0
0
表 2
补加试剂
编号
10%
三氯乙酸
（
ml
）
碘乙酸
（
ml
）
硫酸肼
（
ml
）
发泡量
2
2
0
0
3
2
1
1
表 3 糖酵解中间产物的鉴定——二硝基苯肼反应
五、结果与分析
实验中哪一发酵管生成的气泡多?哪一管生成的颜深? 为什么?
描述观察到得实验现象并对实验结果加以分析。包括保温后的气泡量及的
显效果。
六、注意事项
1. 本实验虽为定性鉴定，但量取体积等人要求相对准确 ；
2. 注意试剂的添加顺序，编号不要弄混 ；
3. 每步反应前注意要充分混匀 。
七、思考与讨论
1. 实验鉴定的是哪种中间产物？
2. 实验中三氯乙酸、碘乙酸、硫酸肼三种试剂分别起什么作用？
3. 实验中的气泡是什么气体? 如何产生的？
编号
滤液
（ml）
0.75 mol/L
NaOH（ml）
摇
匀
，
室
温
放
置
5
分
钟
2，4-二硝基
苯肼 （ml）
摇
匀
，
室
温
放
置
5
分
钟
0.75 mol/L
NaOH（ml）
1
0.5
0.5
0.5
3.5
2
0.5
0.5
0.5
3.5
3
0.5
0.5
0.5
3.5
实验六 荧光分光光度法测定维生素 B2 的含量
一、实验目的
1．学荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素 B2 的分析原理；
2．掌握荧光分光光度计的使用方法；
3．了解分子荧光产生的机理.
二、 实验原理
维生素 B2 易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光
照易分解，对热稳定。 维生素 B2 在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为
光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测 VB2 的荧光时溶液要控制在
酸性范围内，且在避光条件下进行。
核黄素
(V
B2
)
光黄素
多维葡萄糖中含有维生素 B1、B2、C、D2 及葡萄糖，其中维生素 C 和葡萄糖
在水溶液中不发荧光，维生素 B1 本身无荧光，在碱性溶液中用铁氰化钾氧化后
才产生荧光，维生素 D2 用二氯乙酸处理后才有荧光，他们都不干扰维生素 B2
的测定。
维生素 B2 溶液在 430～440 nm 蓝光的照射下，发出绿荧光，其峰值波长为
545 nm。VB2 的荧光在 pH=6～7 时强，在 pH=11 时消失。
三、实验试剂及器材
1. 试剂:
100
μ
g/mlVB2 标准溶液（4%冰醋酸配制，置阴暗处保存）；冰乙酸；
多维葡萄糖粉试样
2. 器材:
岛津 RF5301PC 荧光分光光度计 ；微量移液器 ；容量瓶；石英比皿
四、实验步骤
1、打开氙灯，再打开主机，然后打开计算机启动工作站并初始化仪器。
2、仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目
设置适当的仪器参数:激发波长 Ex= 435 nm，发射波长 Em=545nm。
3、标准曲线测定，样品测定。
4、制作标准曲线，由标准曲线计算样品中维生素 B2 的含量。
5、 退出主程序，关闭计算机，先关主机，关氙灯。
五、结果与分析
1、 原始数据:标准曲线以及样本的荧光值。
测量 1-6 号标准曲线荧光值:VB2 的含量:0.0ug/ml、0.1ug/ml、0.2ug/ml、
0.3ug/ml、0.4ug/ml、0.5ug/ml。
测量 7 号样品荧光值
2、绘制出标准曲线:要求规范作图
铅笔作图；
横、纵坐标名称及单位；
日期、作者 、曲线名称；
曲线上体现出待测样品的荧光值及浓度值。
3、计算:样品中维生素 B2 的量。
要求: 写出公式、代入数据、写出结果。
实验八 pH 值和温度对酶促反应速度的影响
一、实验目的
1
．了解不同
pH
和温度对淀粉水解和唾液淀粉酶活性的影响。
2
．学会测定酶适
pH
和温度的方法。
二、实验原理
酶都是蛋白质，它的活性受环境 pH 的影响为显著。通常各种酶只有在一
定的 pH 范围内才表现它的活性，一种酶表现其高活性时 pH 的值，称为该酶的适 pH。本实验以唾液淀粉酶在不同的温度和 pH 下对淀粉的作用为例观察温度
和 pH 对酶活性的影响，淀粉的水解程度用其与碘液的呈反应加以区别。
三、实验试剂及器材
1. 试剂:
淀粉；碘；碘化钾；磷酸氢二钠；柠檬酸
2. 器材:
试管 吸量管 试管架 吸耳球
四、实验步骤
1. 溶液配制:
0.5%淀粉溶液（含 0.3%氯化钠）（新鲜配置），碘-碘化钾溶液（4 g 碘及碘化
钾 6 g 溶于 100 ml 蒸馏水中，于棕瓶中保存），0.2 mol/L 磷酸氢二钠溶液，
0.1 mol/L 柠檬酸溶液。
2. 样品收集
每人取一个干净的小烧杯，先用自来水漱口，将口腔内的食物残渣清除干净，
然后去蒸馏水约 20ml 含入口中，做咀嚼动作 3-4min,以分泌较多的唾液。将
口腔中的蒸馏水吐入干净的小烧杯中，此即为稀释的唾液淀粉酶液。
3. pH 对酶活性的影响
（
1）缓冲液的配制
编号
0.2mol/L
磷酸氢二纳（
ml
）
0.1mol/L
柠檬酸（
ml
）
缓冲液（
ml
）
1
5.15
4.85
5.0
2
6.16
3.39
6.2
3
7.72
2.28
6.8
4
9.08
0.92
7.4
5
9.72
0.28
8.0
（
2）底物的准备
6 支干燥的试管编号，依次加入不同 pH 的缓冲液各 3 ml，第 6 号试管与第
3 号相同。再向每个试管中添加 0.5%淀粉溶液 2 ml，摇匀。
（
3）酶促反应时间测定
向第 6 号试管加入稀释 100 倍的唾液 2 ml，摇匀后放入 37 ℃恒温水浴中保
温。每分钟取 1 滴混合液于离心管中或反应板上，加 1 滴碘化钾-碘溶液，呈橙
黄时取出试管，记录时间。
（
4）适 pH 测定
以 1 min 的间隔，依次向 1～5 号试管中加入稀释 200 倍的唾液 2 ml，摇匀，
同样以 1 min 间隔，将 5 只试管放入 37 ℃恒温水浴中保温，反应至所需时间。
依次取出，立即加入碘化钾-碘液 2 滴，充分摇匀。观察颜，可看出不同 pH
值时淀粉被水解的程度，不同 pH 值对唾液淀粉酶活性的影响，并确定其适 pH。
4. 温度对酶活性的影响
(1）取三支试管按下表操作:
试剂
管号
1
2
3
1%
淀粉溶液（
ml
）
1
1
1
放置条件
沸水浴
37
℃
冰浴
稀释唾液（滴）
4
4
4
分别按上述条件继续放置 10 min。
(2) 从三支试管中取出溶液 1 滴于离心管中或反应板上，加上 1 滴碘液，观察呈
现象，记录结果并解释其原因。
五、注意事项
1. 各管反应及操作应在同一水平；
2. 每管间隔相同的时间加样和终止反应以各管反应时间相同。
附件:生化实验.pdf
废钼回收的主要来源与分类
废钼的回收来源多样，主要包括工业生产废料、报废设备和消费后废品三大类。工业废料如钼合金切削屑、轧制废料和废钼电极，通常纯度较高，回收价值大；报废设备中的耐热部件、航空发动机叶片等含钼部件需经过拆解和分选；消费后废品如废旧电子元件（如半导体散热基板）和废弃化工催化剂则需化学提取。根据钼含量和杂质水平，废钼可分为高品位（Mo＞90%）和低品位（Mo＜50%），不同类别对应不同的回收工艺和定价标准。
钼主要用于钢铁工业,其中的大部分是以工业氧化钼压块后直接用于炼钢或铸铁,少部分熔炼成钼铁 钼箔片后再用于炼钢.低合金钢中的钼含量不大于1%,但这方面的消费却占钼总消费量的50%左右.不锈钢中加入钼,能改善钢的耐腐蚀性.在铸铁中加入钼,能提高铁的强度和耐磨性能.含钼18%的镍基超合金具有熔点高、密度低和热胀系数小等特性,用于制造航空和航天的各种高温部件.金属钼在电子管、晶体管和整流器等电子器件方面得到广泛应用.氧化钼和钼酸盐是化学和石油工业中的优良催化剂.二硫化钼是一种重要的润滑剂,用于航天和机械工业部门.除此之外,二硫化钼因其的抗硫性质,可以在一定条件下催化一氧化碳加氢制取醇类物质,是很有前景的C1化学催化剂.钼是植物所的微量元素之一,在农业上用作微量元素化肥. 纯钼丝用于高温电炉和电火花加工还有线切割加工；钼片用来制造无线电器材和X射线器材；钼耐高温 钼坩埚烧蚀,主要用于火炮内膛、火箭喷口、电灯泡钨丝支架的制造.合金钢中加钼可以提高弹性限、抗腐蚀性能以及保持永久磁性等,钼是植物生长和发育中所需七种微量营养元素中的一种,没有它,植物就无法生存.动物和鱼类与植物一样,同样需要钼. 钼在其它合金领域及化工领域的应用也不断扩大.例如,二硫化钼润滑剂广泛用于各类机械的润滑,钼金属逐步应用于核电、新能源等领域.由于钼的重要性,各国政府视其为战略性金属,钼在二十世纪初被大量应用于制造装备,现代高、精、尖装备对材料的要求更高,如钼和钨、铬、钒的合金用于制造军舰、火箭、卫星的合金构件和零部件. 钼在薄膜太阳能及其他镀膜行业中,作为不同膜面的衬底也被广泛的应用.
钼箔/钼板/钼片(MO1)钼，是银白的坚硬金属。很重，比重为l0.2。难熔，熔点高达2620℃。纯净的钼富有延展性，但含有少量杂质时，变得很脆。
钼箔/钼板/钼片(MO1)钼的化学性质也很稳定，不会被盐酸，氢氟酸及碱液所腐蚀，但在硝酸，王水或热浓硫酸中会被腐蚀。在纯氧中，加热到500℃以上，钼会燃烧，变成三氧化钼。金属钼的用途并不太广，主要是用来制造真空管的，电灯泡里的钨丝托架等。
钼箔/钼板/钼片(MO1)钼1927年，人们制成超纯金属钼，纯度高达99.999%，拉成细丝，用作集成电路的导线。另外，金属钼丝还用于机床的电火花加工。近年来我国制成的数控线切割机床，就是用金属钼丝导电，进行切割――电火花加工的。在惰性气体的保护气氛中，钼丝和钨丝可配制成高温热点偶，用以测量1200-2000℃的高温。