湖州高价废钼回收多少钱收
钼，英文名称molybdenum。钼的密度10.2克/立方厘米，熔点2610℃，沸点5560℃。。钼是一种过渡元素，易改变其氧化状态，稳定价为+6。
钼主要用于钢铁工业，其中的大部分是以工业氧化钼压块后直接用于炼钢或铸铁，少部分熔炼成钼铁后再用于炼钢。低合金钢中的钼含量不大于1%,但这方面的消费却占钼总消费50%左右。不锈钢中加入钼，能改善钢的耐腐蚀性。在铸铁中加入钼，能提高铁的强度和耐磨性能。含钼18%的镍基超合金具有熔点高、密度低和热胀系数小等特性，用于制造航空和航天的高温部件。金属钼在电子管、晶体管和整流器等电子器件方面的应用。
纯钼丝用于高温电炉和电火花加工还有线切割加工;钼片用来制造无线电器材和X射线器材;钼坩埚用于稀土炼制;钼顶头用与无缝钢管的热穿孔;钼耐高温烧蚀，主要用于热流口，火炮内膛、火箭喷口、电灯泡钨丝支架的制造。
昨日上午8时许，位于洛南县石门镇的陕西秦岭钼业有限责任公司二分厂有毒气体泄漏，导致11人中毒，其中4人不幸身亡。
中毒工人:现场气味呛鼻
昨日上午10时许，华商报记者赶到洛南县医院，先后有7名工人被送到这里救治。在抢救室，几名中毒工人正在接受治疗，门外守着几名家属。
在医院抢救室，一名受伤工人插着氧气，家属正给他喂水。另一名躺在病床上的工人谢某伤势较轻。“我上夜班，早上8点下班时，领导让打扫卫生，厂里的杜总（音）和总工在那边配剂，用氢氧化钠与五硫化二磷，我看见有人晕倒了，工人陶某就喊雷总，雷总过来后上到配台上去拉杜总也晕倒了”。谢某称，当时现场气味呛鼻，随后救人的多名工人均中毒晕倒。
中毒事件发生后，厂区拨打了120并将中毒工人送到了医院。
4人送医途中经抢救无效死亡
“目前有3名伤势较重的患者已经送往了商洛市中心医院抢救，有4名伤者在洛南县医院抢救。”洛南县医院一名工作人员表示，他们正在和相关专家讨论对于中毒工人的抢救治疗方案。
华商报记者从洛南县医院获悉，中毒事件发生后，有11人送往医院抢救，送医途中4人经抢救无效死亡（均为男性），7人送到医院后紧急抢救（2男5女），他们中毒症状为抽风、昏迷、口唇发紫，四肢无力。
华商报记者了解到，涉事企业是一家从事矿业开采、有金属加工经营、销售的企业，主要生产钼精粉，用作合金及不锈钢的添加剂。
据洛南宣传部通报:事件发生在8月9日上午8时左右，陕西秦岭钼业有限责任公司二分厂2名剂工在化验室仓库外的搅拌桶旁配制剂（五硫化二磷和氢氧化钠）时，出现有毒气体，致使2人中毒。公司组织员工抢救过程中，又致9人中毒。
废钼回收的技术流程与关键环节
废钼回收的技术流程通常包括预处理、化学提纯和熔炼三个核心环节。预处理阶段通过磁选、破碎和筛分去除杂质；化学提纯采用酸浸或碱浸法溶解钼化合物，再通过沉淀或电解获得纯钼粉；最后经高温熔炼制成钼锭或钼合金。其中，催化剂废料的回收技术要求较高，需采用焙烧-氨浸工艺提取钼酸铵。技术难点在于杂质控制（如镍、铁）和回收率提升，部分企业已引入自动化分选系统和绿色浸出技术以优化效率。
钼金属通常采用粉末冶金技术生产。采用液压技术将钼粉压实，并在约2100°C的温度下进行烧结。在870-1260°C温度范围进行热加工。当钼在高于约600℃的空气中加热时，会形成挥发性氧化物，因此高温应用于非氧化性环境或真空环境。
钼粉球形团块(蕾丝花边状)，中间有镍铬合金实心球体粘附钼粉。
钼基合金在高温(高达1900°C)下具有出的强度和力学性能稳定性。它们的延展性高，韧性好，对缺陷和脆性断裂的耐受性高，优于陶瓷。钼合金的性能可应用于许多领域，如:
高温加热元件、辐射防护装置、挤压部件、锻模等;
用于临床诊断的旋转X射线阳;
玻璃熔炉电和耐熔融玻璃的部件;
用于半导体芯片安装的散热器，其热膨性能与硅匹配;
厚度仅几埃(10-7毫米)的溅射层，用于集成电路芯片上的门与互连元件;
汽车活塞环和机器零件的喷射涂层，可减小摩擦改善耐磨性能。
高温炉热区采用钼金属@奥地利PLANSEE AG
钼添加许多其他金属合金元素后，有专门的用途:
钼钨合金以其出的耐熔融锌能力而著称;
钼包覆铜可用于低膨胀率、高导电率的电子电路板;
钼-25%铼合金用于火箭发动机部件和液态金属热交换器，它们在室温下具有延展性。
各县（市）、区人民政府，市经济技术开发区管委会，市各委、办、，市各直属单位:
近年来，全市上下深入贯彻落实党的十八大和十八届二中、三中全会精神，紧紧围绕“科技兴市”战略，注重发挥科技人员的积性和创造性，鼓励科技人员进行理论和实践，取得了较好成绩。2011~2012年，全市科技人员结合南通实际，撰写并在省级以上刊物发表了一大批自然科学方面的学术论文，为推进科技工程作出了积贡献。经南通市自然科学学术论文评审委员会认真评审，并向社会公示，共评出第八届自然科学优秀学术论文120篇，现予公布。
希望各地、各部门、各单位和全市广大科技工作者牢固树立科学发展理念，勇于承担历史使命，以饱满的工作热情，积推动科技进步，不断创造新业绩，为南通加快建设北翼经济中心提供坚实的科技保障。
附件:南通市第八届自然科学优秀学术论文获奖名单
南通市人民政府
2014年1月2日
附件
南通市第八届自然科学优秀学术论文获奖名单
（共120篇）
一等奖名单（12篇）
1.Protease and transglutaminase application for wool anti-felting finishing （蛋白酶和转谷氨酰胺酶在羊毛抗毡缩整理中的应用）
张瑞萍、蔡再生（南通大学）
2.量子点修饰碳胶电在纸基上的电致化学发光
史传国、单 霞、潘忠芹（南通大学）
3.基于K2树的大规模网络图数据存储优化方法研究
施 佺、肖仰华、聂贝斯（南通大学）
4.拟爱因斯坦度量的刚性研究
王林峰（南通大学）
5.认知用户配对与协作感知算法研究
包志华、张、张晓格（南通大学）
6.基于全优化的南通市水资源优化配置研究
辛鹏磊、陈建标（南通市水文）
7.Analysis of pituitary specific transcription factor-1 gene polymorphism in several indigenous Chinese cattle and crossbred cattle（中国几种地方牛种和牛种垂体特异性转录因子1基因多态性研究）
严林俊（南通农业职业技术学院）
8.体外构建基于丝素导管的神经等价物及将该组织工程化神经用于修复坐骨神经缺损
汤 欣、薛成斌、王亚先（南通大学）
9.NO/cGMP/PKG信号通路参与二苯乙烯苷抑制平滑肌的机制研究
许晓乐、张 伟（南通大学）
10.中国农村女性代谢综合征的流行病学研究
蔡 辉（南通大学）、黄建萍（南通市疾病控制中心）、徐广飞（南通大学）
11.尿监控系统的研发与临床应用
王 芳（南通市人民医院）、陈建荣（南通市中医院）、刘经纬（南通市人民医院）
12.BDNF blended chitosan scaffolds for human umbilical cord MSC transplants in traumatic brain injury therapy
施 炜、陈 建（南通大学附属医院）
二等奖名单（24篇）
1.高温胁迫对条斑紫菜突变系圆盘体生长的影响
吕 峰、王小红、陆德祥（南通农业职业技术学院）
2.甲醇气相羰化合成醋酸的反应机理及本征动力学
刘金红、刘志军、黄艳芳（南通职业大学）
3.Research on Kenaf Degumming with Oxidation Process
颜婷婷、顾闻彦、郁崇文（南通大学）
4.基于赌轮选择遗传算法的数据隐藏发布方法
胡新平、贺玉芝、倪巍伟（南通大学）
5.喷射液束电解辅助激光打孔工艺对再铸层和溅射物的控制研究
张 华、徐家文（南通大学）
6.三维分级结构Zn3（OH）2V2O7?H2O与Zn3（VO4）2微米球的制备、表征及荧光性质研究
王 淼、石玉军、江（南通大学）
7.灰旅行时间的区域公交车辆调度模型和算法
魏 明、孙 博、靳文舟（南通大学）
8.基于槽线谐振器的可调/可开关带通滤波器
陈建新、施 金、包志华（南通大学）
9.微型桩芯搅拌桩工程实践与工作机理研究
包 华、邓亚光、 张 慧（南通大学）
10.三维激光扫描应用于古建测绘的关键技术研究
徐亚军、袁小军（南通市测绘院有限公司）、程 亮（南京大学）
11.Sobolev型时滞非部积分微分方程解的存在性
徐小平（南通职业大学）
12.CINRAD/SA雷达中微波器件故障判别
汤建国、周红根、周 良（南通市气象）
13.玉米抗粗缩病自交系种质的发掘和遗传多样性及其在育种中的应用
薛 林、张 丹、徐 亮（江苏沿江地区农业科学研究所）
14.真空渗糖对冷冻菜用大豆部分玻璃化转变温度和硬度的影响
唐明霞、袁春新、陈 惠（江苏沿江地区农业科学研究所）
15.Prognostic significance of FOXP1 as an oncogene in hepatocellular carcinoma
张一心、张素青、王晓冬（南通市肿瘤医院）
16.比较蛋白质组学研究感觉与运动神经差异表达蛋白
贺倩茹、满莉丽、季煜华（南通大学）
17.雪旺氏细胞溶酶体分泌参与神经损伤后髓鞘化过程
陈 罡、张志君、韦中亚（南通大学）
18.大鼠肝星状细胞活化的比较蛋白质组学研究:功能全面解析及免疫应答抑制
季菊玲、郁 枫、季秋虹（南通大学）
19.健忘症模型大鼠前脑胆碱能相关脑区神经再生的研究
张新化、金国华、李伟（南通大学）
20.Free-radical scavenger edaravone treatment confers neuroprotection against traumatic brain injury in rats
王国华、姜正林（南通大学）、李永财（宁夏人民医院）
21.低温中灌肠预防宫颈癌患者放射性直肠损伤的效果
张曦霞、张兰凤（南通市肿瘤医院）、叶 赟（南通大学）
22.Transvaginal color Doppler sonography predicts ovarian interstitial fibrosis and microvascular injury in patients with ovarian endometriotic cysts
刘曼华、邱君君、张忠新（南通市人民医院）
23.Role of small conductance calcium-activated potassium channels expressed in PVN in regulating sympathetic nerve activity and arterial blood pressure in rats
桂 乐（南通大学附属医院）
24.Telescopic technique associated with mucosectomy: a simple and safe anastomosis in pancreaticoduodenectomy
李 鹏、毛勤生（南通大学附属医院）
三等奖名单（84篇）
1.桑树不同季节施用杀虫剂虫螨腈对家蚕的残留毒性调查
佘柳涛、薛卫东、陆 琴（如皋市蚕桑技术指导站）
2.复方利多卡因乳膏治疗激素依赖性皮炎的临床研究
盛国荣、谢 勇（南通市疾病控制中心）
3.基于EKF-RNN算法的抗震棒材性能预报模型研究
顾力平（南通职业大学）
4.公平与效率视阈下的示范性高职院校遴选与建设
管德明（南通职业大学）
5.Mesoporous tungsten oxides as photocatalysts for 02 evolution under irradiation of visible light
黄 徽（南通职业大学）
6.催化氧化法合成草甘膦工艺条件研究
黄艳芳、刘志军、王健伟（南通职业大学）
7.成衣三维记忆与数码拓印艺术染整工艺
顾 鸣、刘素琼、梁惠娥（江苏华艺集团）
8.纯棉特细号高密防羽绒布的织前生产工艺
张国辉（南通职业大学）
9.Synthesis and Characterization of Polyacrylate Sizes Modified by Nano-Microspheres Prepared via Minienulsion Polymerization
金 啸、崔建伟（南通大学）
10.粘胶基碳化织物的制备及工艺优化
季 涛（南通大学）、李 杰（南通醋酸纤维有限公司）、高 强（南通大学）
11.酒石酸锑钾的制备
蒋云霞（南通农业职业技术学院）、钟国清（西南科技大学）
12.The research status of Nafion ternary composite membrane
马 骏（南通农业职业技术学院）、倪红军（南通大学）、苏冬云（南通职业大学）
13.金属材料拉伸试验随不同速率控制模式的改进
张 烨（海门市产品质量监督检验所）
14.滨海地区水泥改良盐渍土强度特性及其机理研究
陈雪峰（如东县交通运输工程质量监督站）
15.浅谈内河通航桥梁桥墩防撞设计
魏东海、施卫东、张兆民（江苏省交通规划设计院南通分院）
16.基于供应链模式下的物流服务外包--以南通港口为例
宋丽霞（南通航运职业技术学院）
17.万能式断路器合闸能量仿真与优化方法研究
丁建波、李 、唐文献（南通航运职业技术学院）
18.南京南站秦淮新河大桥引桥桥面施工技术
李晓平（江苏南通六建集团）
19.Porel 纤维混纺纱的开发实践
赵瑞芝（南通市纺织工业协会）、汪吉艮（江苏大生集团有限公司）
20.电子健康档案云研究
张志美、杨 剑、胡新平（南通大学）
21.基于稳态运行期间的变量测量确定开关磁阻电机的磁链特性
陈海进、景为平（南通大学）
22.稀土-异亮基酸-邻菲咯啉配合物的合成、表征及抗菌活性
商艳芳、葛存旺、尤克非（南通大学）
23.基于{血红蛋白/银纳米粒子}n多层组装膜的PH开关效应
于春梅、季万余、苟莉莉（南通大学）
24.低信噪比环境下基于线性合并的认知无线电频谱检测
张、包志华（南通大学）
25.带有非线性扰动的广义奇摄动系统的鲁棒稳定性
周 磊、陆国平（南通大学）
26.硝酸体系微波消解-偏钼酸铵分光光度法测定固废中总磷方法的研究
沈志群、李 莉、刘琳娟（南通市环境监测中心站）
27.中粳稻施肥体系的研究
陈 斌、丁华萍（海安县土壤肥料技术指导站）、仲卫华（海安县开发区农村工作）
28.南通市探索节水型社会建设实现途径
马 进、丁皛钰（南通市节约用水办公室）
29.3种海洋微藻ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达影响因素分析
张跃群、阎生荣、吕 峰（南通农业职业技术学院）
30.江苏近代以来沿海开发的成效与启示
黄志良（南通市水利勘测设计研究院有限公司）
31.施氮量对机插稻主要米质性状的影响
李世峰、刘蓉蓉、张岳芳（南通市作栽站）
32.大粒鲜食蚕豆通蚕鲜7号的选育及应用前景
汪凯华、王学军、缪亚梅（江苏沿江地区农业科学研究所）
33.辐射沙脊群南部浮游动物的生态特征
瑛、王云龙（江苏省海洋水产研究所）、刘培延（东海水产研究所）
34.相似路径热带气旋“米雷”和“梅花”影响南通降水差异及原因分析
李 超、陈爱玉、陈 铁（南通市气象）
35.辣椒新品种通研4号
李 进、张雪峰、胡桂华（南通市蔬菜科学研究所）
36.浅谈现代蚕业
韩益飞（如东县蚕桑指导站）
37.规模猪场粪水制沼产能技术应用
曹亚如（通州区农业委员会）
38.灸疮促发对化脓灸治疗支气管哮喘疗效的影响
沙建梅、邓筱娟、邵志赤（如皋市中医院）
39.食管灰白黏膜内镜病理、增殖凋亡和p53表达及临床意义
陈正言、朱小平、王正栋（如皋市人民医院）
40.High expression of CXCR2 is associated with tumorigenesis, progression, and prognosis of laryngeal squamous cell carcinoma
韩 靓、蒋 斌、吴 浩（南通市肿瘤医院）
41.Meta-Analysis of the Relationship between Common Type 2 Diabetes Risk Gene Variats with Gestational Diabetes Mellitus（妊娠期糖尿病和2型糖尿病基因多态性关系的Meta分析）
茅红艳、李 琴、高蜀君（启东市人民医院）
42.我国新生儿乙肝疫苗免疫后效应概述及相关问题
姚红玉（启东市人民医院）、陈陶阳、曲春枫（启东肝癌防治研究所）
43.肾脏黏液性管状和梭形细胞癌的临床病理特征
宋红杰、马 捷、周航波（海门市人民医院）
44.成年大鼠脊髓损伤后SIAH1的上调
王东林、陆丘惠、邵 蓓（南通大学）
45.中国美沙酮门诊患者HIV和HCV流行水平研究
庄 勋、梁燕鲜（南通大学）
46.延髓背角中趋化因子CCL2和受体CCR2参与三叉神经痛的调节
张志军、董玉林、陆 颖（南通大学）
47.小干扰核糖核酸下调人类乳头瘤18型E6、E7基因及VEGF基因表达对人宫颈癌恶性生物细胞学行为的影响
陈 莉、吴圆圆、王建力（南通大学）
48.p38丝裂原活化蛋白激酶和肝X受体-α介导瘦素对肝星状细胞中固醇调节元件结合蛋白-1C表达的影响
闫坤锋、邓 雄、翟旭光（南通大学）
49.骨髓基质细胞联合壳聚糖导管修复大鼠脊髓全横断损伤
陈 雪、杨 阳、姚 健（南通大学）
50.白介素-6抵抗NMDA导的神经元凋亡的作用及其细胞内信号转导机制
刘 展、邱一华、李 冰（南通大学）
51.茵陈蒿汤保肝作用的血清理学研究
窦志华、罗 琳、候金燕（南通市第三人民医院）
52.补康灵对辐射损伤肺癌小鼠免疫功能影响的观察
张锦林、倪美鑫、蔡 晶（南通市肿瘤医院）
53.某院医务人员高危品认知调查
杨 燕、姜剑飞、崔志明（南通市人民医院）
54.止痒乳膏优选的正交试验研究
丁晓云（南通市第四人民医院）
55.HPLC法测定脑心清胶囊中非法添加氢氯噻嗪
周利贤（南通市品检验所）
56.中国江苏省南通市2010年麻疹N-蛋白基因序列分析
李海波（南通市疾病控制中心）、S.D.Spencer（美国国家癌症学会）、廉丽华（南通市疾病控制中心）
57.老年高血压保护动机问卷的编制及信效度测定
钱湘云、何 炜、耿桂灵（南通市第三人民医院）
58.个体化延续护理在急诊高血压病患者健康教育中的应用
吉云兰、崔秋霞、殷晓红（南通大学附属医院）
59.A sensitive method to quantify human cell-free circulating DNA in blood: Relevance to myocardial infarction screening
景蓉蓉、王惠民、崔 明（南通大学附属医院）
60.Expression of transforming growth factor-β1 （TGF-β1） and E-cadherin in glioma
杨 柳、刘 梅、邓传宗（南通大学附属医院）
61.Allograft tendon for Second-Stage Tendon Reconstru
谢仁国、汤锦波（南通大学附属医院）
62.Upregulation of p16INK4A promotes cellular senescence of bone marrow-derived mesenchymal stem cells from systemic lupus erythematosus patients
顾志峰、曹晓蕾、姜津霞（南通大学附属医院）
63.Application of a new method of revealing foramen ovale under X-ray in radiofrequency ablation in the treatment of trigeminal neuralgia
何玉泉、沈云霞（南通市人民医院）、何 书（南通大学）
64.Simultaneous knockdown of APRIL via multiple shRNAs reduces the malignancy of SW480 cells
李海泉、鞠少卿、王惠民（南通大学附属医院）
65.Effects of paxillin on HCT-8 Human Colorectal Cancer Cells
秦 军、王志伟、马利林（南通大学附属医院）
66.Overexpression of glucose-regulated protein 94 after spinal cord injury in rats
徐大伟、崔志明、王友华（南通市人民医院）
67.Serun A PRIL,a potential tumor marker in pancreatic cancer
陈 琳（南通市第三人民医院）、王 峰（南通大学附属医院）、邵建国（南通市第三人民医院）
68.ALI/ARDS患者呼出气冷凝液中H2O2检测的临床意义
邢佳丽、陈建荣、陈金亮（南通市人民医院）
69.Refractive changes induced by flickering light and form deprivation in the C57BL/6 mouse
俞 莹、陈 辉、庹旌生（南通大学附属医院）
70.早发型重度子痫前期临床处理与母儿结分析
崔爱民（南通市妇幼保健院）
71.Neutrophil cell poprlation data:usefuo indicators for postsurgical bacterial infection
朱易华、曹兴建、陈宇翔（南通市人民医院）
72.锁骨钢板内固定治疗锁骨粉碎性骨折48例
朱雪峰（南通市老年康复医院）
73.灵芝多糖、水飞蓟素对不同程序肾小球内皮细胞氧化损伤的保护作用研究
赵 旭、郝传铮、黄 敏（南通大学附属医院）
74.Safety and efficacy osplenic artery coil embolization for hypersplenism in liver cirrhosis（弹簧圈栓塞脾动脉治疗肝硬化脾功能亢进的及有效性研究）
顾建建（通州区人民医院）
75.亚低温联合依达拉奉治疗对急性脑梗死患者近期预后的影响
黄盘冰、王建军、瞿永梅（通州区第三人民医院）
76.乳腺导管内乳头状瘤65例临床分析
吴金柱、倪 毅、胡进勇（南通市第三人民医院）
77.The Preventative Role of Curcumin on the Lung Inflammator y Response Induced by Cardiopulmonar y Bypass in Rats
刘 锟、沈 立、王 军（南通大学附属医院）
78.南通市2008-2011年市售熟肉制品中盐含量的调查分析
戴志英、程晓宏（南通市疾病控制中心）
79.纤维支气管镜检查中并发症的预防及护理
唐建美（南通市第六人民医院）
80.An active murine-human chimeric Fab antibody derived from Escherichia coli , potential therapy against over-expressing VEGFR2 solid tumors
黄剑飞、梁 杰、唐 奇（南通大学附属医院）
81.多种导剂联合对大鼠骨髓间充质干细胞体外向神经元样的影响
陈 翔、樊兴娟（南通大学附属医院）、毛伟峰（南通大学）
82.海安县农村居民疟疾防治健康教育需求
曹晓斌、王小健、顾光明（海安县疾病控制中心）
83.肝癌HIF-1α表达特征及在诊断与预后中的临床价值研究
王 理、姚登福、吴 玮（南通大学附属医院）
84.甲型H1N1病房医护人员负性心理调查分析
谢幸尔、钱湘云、韩建平（南通市第三人民医院）
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序号
类别
项目
实施依据
执行单位
1
农林业
限制类:
1、天然草场超载放牧
2、单线 5 万立方米/年以下的普通刨花板、高中密度纤维板生
产装置
3、单线 3 万立方米/年以下的木质刨花板生产装置
4、1000 吨/年以下的松香生产项目
5、兽用粉剂/散剂/预混剂生产线项目（持有新兽书的品种
和自动化密闭式率混合生产工艺除外）
6、转瓶培养生产方式的兽用细胞苗生产线项目（持有新兽
书的品种和采用新技术的除外）
7、松脂初加工项目
8、以林木为原料的一次性木制品与木制包装的生产和使
用以及木竹加工综合利用率偏低的木竹加工项目
9、1 万立方米/年以下的胶合板和细木工板生产线
10、珍稀植物和古树的根雕制造业
11、以野外资源为原料的珍贵濒危野生动植物加工
12、不符合生态养殖要求的湖泊、水库投饵网箱养殖
13、不利于生态环境保护的开荒性农业开发项目
14、缺水地区、国家生态脆弱区纸浆原料林基地建设
15、不符合国家规划及产业的粮食转化乙醇、食用植物油
料转化生物燃料项目
16、破坏林地、湿地、草地的开发项目
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
淘汰类:
1、湿法纤维板生产工艺2、滴水法松香生产工艺
3、农村传统老式炉灶炕
4、以木材、伐根为主要原料的土法活性炭生产
5、超过生态承载力的旅游活动和材等林产品采集
6、严重缺水地区建设灌溉型造纸原料林基地
7、种植前溴甲烷土壤熏蒸工艺
2
煤炭
限制类:
1、低于 30 万吨/年的煤矿（其中山西、内蒙古、陕西低于 120
万吨/年，宁夏低于 60 万吨/年），低于 90 万吨/年的煤与瓦斯突出矿井
2、采用非机械化开采工艺的煤矿项目
3、煤炭资源回收率达不到国家规定要求的煤矿项目
4、未按国家规定程序报批矿区总体规划的煤矿项目
5、井下回采工作面超过 2 个的煤矿项目
6、开采深度超过《煤矿规程》规定的煤矿、产品质量达
不到《商品煤质量管理暂行办法》要求的煤矿、开采技术和装备列
入《煤炭生产技术与装备导向（2014 年版）》限制目录且无法实施技术改造的煤矿
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
淘汰类:
1、与大型煤矿井田平面投影重叠的小煤矿
2、山西、内蒙古、陕西、宁夏 30 万吨/年以下（不含 30 万吨/年），河北、辽宁、吉林、黑龙江、江苏、安徽、山东、河南、甘肃、青海、新疆 15
万吨/年以下（不含 15 万吨/年），其他地区 9 万吨/年及以下（含 9 万吨/年）的煤矿；长期停产停建的 30 万吨/年以下（不含 30
万吨/年）“僵尸企业”煤矿；30 万吨/年以下（不含 30万吨/年）冲击地压、煤与瓦斯突出等灾害严重煤矿。属于满足林区、
边远山区居民生活用煤需要或承担供应任务且符合资源、、、技术、能耗等标准的煤矿，经省级人民政府批准，可以暂时保留或推迟退出
3、既无降硫措施又无达标排放用户的高硫煤炭（含硫高于 3%）
生产矿井，不能就地使用的高灰煤炭（灰分高于 40%）生产矿井以及高砷煤炭（动力用煤中砷含量超过 80μg/g，炼焦用煤中砷含量超过
35μg/g）生产煤矿
4、6AM、φM-2.5、PA-3 型煤用浮选机
5、PB2、PB3、PB4 型矿用隔爆高压开关
6、PG-27 型真空过滤机
7、X-1 型箱式压滤机
8、ZYZ、ZY3 型液压支架
9、不能实现洗煤废水闭路循环的选煤工艺、不能实现粉尘达
标排放的干法选煤设备
10、开采范围与自然保护区、风景名胜区、饮用水水源保护区
重叠的煤矿（根据法律法规及国家有关文件要求进行淘汰）
3
电力
限制类:
1、大电网覆盖范围内，发电煤耗高于 300 克标准煤/千瓦时的
湿冷发电机组，发电煤耗高于 305 克标准煤/千瓦时的空冷发电机组
2、无下泄生态流量的引水式水力发电
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
淘汰类:
1、不达标的单机容量 30 万千瓦级及以下的常规燃煤火电机组
（综合利用机组除外）、以发电为主的燃油锅炉及发电机组
4
石化化工
限制类:
1、新建 1000 万吨/年以下常减压、150 万吨/年以下催化裂化、
100 万吨/年以下连续重整（含芳烃抽提）、150 万吨/年以下加氢裂化生产装置
2、新建 80 万吨/年以下石脑油裂解制乙烯、13 万吨/年以下丙
烯腈、100 万吨/年以下精对苯二甲酸、20 万吨/年以下乙二醇、20万吨/年以下苯乙烯（干气制乙苯工艺除外）、10
万吨/年以下己内酰胺、乙烯法醋酸、30 万吨/年以下羰基合成法醋酸、天然气制甲醇（CO2 含量 20%以上的天然气除外），100
万吨/年以下煤制甲醇生产装置，丙酮氰醇法甲基丙烯酸甲酯、粮食法丙酮/丁醇、氯醇法环氧丙烷和皂化法环氧氯丙烷生产装置，300
吨/年以下皂素（含水解物）生产装置
3、新建 7 万吨/年以下聚丙烯、20 万吨/年以下聚乙烯、乙炔法
聚氯乙烯、起始规模小于 30 万吨/年的乙烯氧氯化法聚氯乙烯、10万吨/年以下聚苯乙烯、20 万吨/年以下丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物（ABS）、3
万吨/年以下普通合成胶乳-羧基丁苯胶（含丁苯胶乳）生产装置，新建、改扩建氯丁橡胶类、丁苯热塑性橡胶类、聚氨酯类和聚丙烯酸酯类中溶剂型通用胶粘剂生产装置
4、新建纯碱（井下循环制碱、天然碱除外）、烧碱（废盐综合
利用的离子膜烧碱装置除外）、30 万吨/年以下硫磺制酸（单项金属离子≤100ppb 的电子级硫酸除外）、20
万吨/年以下硫铁矿制酸、常压法及综合法硝酸、电石（以大型工艺设备进行等量替换的除外）、单线产能 5 万吨/年以下氢氧化钾生产装置
5、新建三聚磷酸钠、六偏磷酸钠、三氯化磷、五硫化二磷、磷酸氢钙、氯酸钠、少钙焙烧工艺重铬酸钠、电解二氧化锰、碳酸
钙、无水硫酸钠（盐业联产及副产除外）、碳酸钡、硫酸钡、氢氧化钡、氯化钡、硝酸钡、碳酸锶、白炭黑（气相法除外）、氯化胆碱生产装置
6、新建黄磷，起始规模小于 3 万吨/年、单线产能小于 1 万吨/ 年氰化钠（折 100%），单线产能 5
千吨/年以下碳酸锂、氢氧化锂，干法氟化铝及单线产能 2 万吨/年以下无水氟化铝或中低分子比冰晶石生产装置
7、新建以石油、天然气为原料的氮肥，采用固定层间歇气化
技术合成氨，磷铵生产装置，铜洗法氨合成原料气净化工艺
8、新建高毒、高残留以及对环境影响大的农原（包括氧
乐果、水胺硫磷、甲基异柳磷、甲拌磷、特丁磷、杀扑磷、溴甲烷、灭多威、涕灭威、克百威、敌鼠钠、敌、杀、杀鼠醚、溴敌隆、溴、肉毒素、杀虫双、灭线磷、磷化铝，有机氯类、有机锡类杀虫剂，福美类杀菌剂，复硝酚钠（钾）、氯磺隆、胺苯磺隆、甲磺隆等）生产装置
9、新建草甘膦、毒死蜱（水相法工艺除外）、三唑磷、百草枯、
百菌清、阿维菌素、吡虫啉、乙草胺（甲叉法工艺除外）、氯化苦生产装置
10、新建硫酸法钛白粉、铅铬黄、1 万吨/年以下氧化铁系颜料、
溶剂型涂料（鼓励类的涂料品种和生产工艺除外）、含异氰脲酸三缩水甘油酯（TGIC）的粉末涂料生产装置
11、新建染料、染料中间体、有机颜料、印染助剂生产装置（鼓
励类及采用鼓励类技术的除外）
12、新建氟化氢（HF，企业下游深加工产品配套自用、电子级
及湿法磷酸配套除外），新建初始规模小于 20 万吨/年、单套规模小于10 万吨/年的甲基氯硅烷单体生产装置，10 万吨/年以下（有机硅配套除外）和
10
万吨/年及以上、没有副产四氯化碳配套处置设施的甲烷氯化物生产装置，没有副产三氟甲烷配套处置设施的二氟一氯甲烷生产装置，可接受用途的全氟辛基磺酸及其盐类和全氟辛基磺酰氟（其余为淘汰类）、全氟辛酸（PFOA），六氟化硫（SF6，高纯级除外），特定豁免用途的六溴环十二烷（其余为淘汰类）生产装置
13、新建斜交轮胎和力车胎（含手推车胎）、锦纶帘线、3 万吨
/年以下钢丝帘线、再生胶（常压连续脱硫工艺除外）、橡胶塑解剂五氯硫酚、橡胶促进剂二硫化四甲基秋兰姆（TMTD）生产装置
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
淘汰类:
1、200 万吨/年及以下常减压装置（青海格尔木、新疆泽普装
置除外），采用明火高温加热方式生产油品的釜式蒸馏装置，废旧橡胶和塑料土法炼油工艺，焦油间歇法生产沥青，2.5
万吨/年及以下的单套粗（轻）苯精制装置，5 万吨/年及以下的单套煤焦油加工装置
2、10 万吨/年以下的硫铁矿制酸和硫磺制酸（边远地区除外），
平炉氧化法高锰酸钾，隔膜法烧碱生产装置（作为废盐综合利用的可以保留），平炉法和大锅蒸发法硫化碱生产工艺，芒硝法硅酸钠（泡花碱）生产工艺，间歇焦炭法二硫化碳工艺
3、单台产能 5000 吨/年以下和不符合准入条件的黄磷生产装置，有钙焙烧铬化合物生产装置，单线产能 3000
吨/年以下普通级硫酸钡、氢氧化钡、氯化钡、硝酸钡生产装置，产能 1 万吨/年以下氯酸钠生产装置，单台炉容量小于 12500
千伏安的电石炉及开放式电石炉，高汞催化剂（氯化汞含量
6.5%以上）和使用高汞催化剂的乙炔法聚氯乙烯生产装置，使用汞或汞化合物的甲醇钠、甲醇钾、乙醇钠、乙醇钾、聚氨酯、乙醛、烧碱、生物杀虫剂和部抗菌剂生产装置，氨钠法及氰熔体氰化钠生产工艺
4、单线产能 1 万吨/年以下三聚磷酸钠、0.5 万吨/年以下六偏
磷酸钠、0.5 万吨/年以下三氯化磷、3 万吨/年以下饲料磷酸氢钙、5000 吨/年以下工艺技术落后和污染严重的氢氟酸、5000
吨/年以下湿法氟化铝及敞开式结晶氟盐生产装置
5、单线产能 0.3 万吨/年以下氰化钠（100%氰化钠）、1 万吨/
年以下氢氧化钾、1.5 万吨/年以下普通级白炭黑、2 万吨/年以下普通级碳酸钙、10 万吨/年以下普通级无水硫酸钠（盐业联产及副产除外）、0.3
万吨/年以下碳酸锂和氢氧化锂、2 万吨/年以下普通级碳酸钡、1.5 万吨/年以下普通级碳酸锶生产装置
6、半水煤气氨水液相脱硫、天然气常压间歇转化工艺制合成
氨、一氧化碳常压变化及全中温变换（高温变换）工艺、没有配套硫磺回收装置的湿法脱硫工艺，没有配套建设吹风气余热回收、造气炉渣综合利用装置的固定层间歇式煤气化装置，没有配套工艺冷
凝液水解解析装置的尿素生产设施
7、钠法百草枯生产工艺，敌百虫碱法敌敌畏生产工艺，小包
装（1 公斤及以下）农产品手工包（灌）装工艺及设备，雷蒙机法生产农粉剂，以六氯苯为原料生产五氯酚（钠）装置
8、用火直接加热的涂料用树脂、四氯化碳溶剂法制取氯化橡
胶生产工艺，100
吨/年以下皂素（含水解物）生产装置，盐酸酸解法皂素生产工艺及污染物排放不能达标的皂素生产装置，铁粉还原法工艺（4,4-二氨基二苯乙烯-二磺酸[DSD
酸]、2-氨基-4-甲基-5-氯苯磺酸[CLT 酸]、1-氨基-8-萘酚-3,6-二磺酸[H 酸]三种产品暂缓执行）
9、50 万条/年及以下的斜交轮胎和以天然棉帘子布为骨架的轮
胎、1.5 万吨/年及以下的干法造粒炭黑（特种炭黑和半补强炭黑除外）、3 亿只/年以下的天然胶乳套，橡胶硫化促进剂 N-氧联二
（1,2-亚乙基）-2-苯并噻唑次磺酰胺（NOBS）和橡胶防老剂 D 生产装置
10、氯氟烃（CFCs）、含氢氯氟烃（HCFCs，作为自身下游化
工产品的原料且不对外销售的除外），用于清洗的 1,1,1-三氯乙烷（甲基氯仿），主产四氯化碳（CTC）、以四氯化碳（CTC）为加工助剂的产品，以
PFOA
为加工助剂的含氟聚合物生产工艺，含滴滴涕的涂料、采用滴滴涕为原料非封闭生产三氯杀螨醇生产装置（根据国家履行公约总体计划要求进行淘汰）
1、改性淀粉、改性纤维、多彩内墙（树脂以硝化纤维素为主，
溶剂以二甲苯为主的 O/W 型涂料）、氯乙烯-偏氯乙烯共聚乳液外墙、
焦油型聚氨酯防水、水性聚氯乙烯焦油防水、聚乙烯醇及其缩醛类
内外墙（106、107 涂料等）、聚醋酸乙烯乳液类（含乙烯/醋酸乙烯
酯共聚物乳液）外墙涂料
2、有害物质含量超标准的内墙、溶剂型木器、玩具、汽车、
外墙涂料，含双对氯苯基三氯乙烷、三丁基锡、全氟辛酸及其盐类、
全氟辛烷磺酸、红丹等有害物质的涂料
3、在还原条件下会裂解产生 24 种有害芳香胺的偶氮染料（非
纺织品用的领域暂缓）、九种致癌性染料（用于与人体不直接接触
的领域暂缓）
4、含苯类、苯酚、苯甲醛和二（三）氯甲烷的脱漆剂，立德
粉，聚氯乙烯建筑防水接缝材料（焦油型），107 胶，瘦肉精，多氯
5
信息产业
限制类:
1、激光视盘机生产线（VCD 系列整机产品）
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
6
钢铁
限制类:
1、钢铁联合企业未同步配套建设干熄焦、装煤、推焦除尘装
置的炼焦项目；独立焦化企业未同步配套建设装煤、推焦除尘装置
的炼焦项目
2、180 平方米以下烧结机（铁合金烧结机、铸造用生铁烧结机
除外）
3、有效容积 400 立方米以上 1200 立方米以下炼钢用生铁高炉；
1200 立方米及以上但达不到、能耗、等强制性标准的炼钢
用生铁高炉
4、公称容量 30 吨以上 100 吨以下炼钢转炉；公称容量 100 吨
及以上但达不到、能耗、等强制性标准的炼钢转炉
5、公称容量 30 吨以上 100 吨（合金钢 50 吨）以下电弧炉；
公称容量 100 吨（合金钢 50 吨）及以上但达不到、能耗、等强制性标准的电弧炉
6、1450 毫米以下热轧带钢（不含钢）项目
7、30 万吨/年及以下热镀锌板卷项目
8、20 万吨/年及以下彩涂层板卷项目
9、含铬质耐火材料
10、普通功率和高功率石墨电压型设备、焙烧设备和生产线
11、直径 600 毫米以下或 2 万吨/年以下的超高功率石墨电生
产线
12、8 万吨/年以下预焙阳（炭块）、2 万吨/年以下普通阴
炭块、4 万吨/年以下炭电生产线
13、单机 120 万吨/年以下的球团设备（铁合金、铸造用生铁球
团除外）
14、顶装焦炉炭化室高度 1.9—2.1 ,说明有部分降解荧光光谱
链 cDNA 的合成:
以 RNA 为模板，反转录为 cDNA，由逆转录酶催化，该酶合成 DNA 时需要引
物引导，常用引物是 oligo dT、随机引物或基因特异引物（GSP）维生素 B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，
对热稳定。维生素 B2 溶液在 430～440 nm 蓝光的照射下，发出绿荧光，荧
光峰在 535 nm。维生素 B2 在 pH=6～7 的溶液中荧光强度大，在 pH=11 的碱
性溶液中荧光消失，所以可以用荧光光度法测维生素 B2 的含量。
三、试剂与仪器:
总 RNA 提取试剂盒（天根 RNAprep Pure Cell/Bacteriit）；链 cDNA
合成试剂盒（Tara PrimeScript™ RT Master Mix）；无菌，无ＲＮＡ酶离心
管无菌，无 RNA 酶枪头低温离心机等
四、实验操作:
1.提取总 RNA
1） 裂解细胞:确定细胞数量，吸除细胞培养基上清，加入 PBS 后吸除，加入
600ul 裂解液 RL（胍盐/ß-巯基乙醇）5min。
2） 将溶液转移至过滤柱 CS 上(过滤柱 CS 放在收集管中)，12,000 rpm 离
心 2 min，收集滤液。
3） 向滤液中加入 1 倍体积 70%乙醇，混匀，得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱
CR3 中， 12,000 rpm 离心 60 sec，倒掉收集管中的废液。
4） 向吸附柱 CR3 中加入 350
μ
l 去蛋白液 RW1，12,000 rpm 离心 60 sec，倒掉
收集管中的废液，将吸附柱 CR3 放回收集管中。
5） 向吸附柱 CR3 加入 80
μ
l 的 DNase I 工作液（10
μ
l DNase I 储存液
+70
μ
l RDD 溶液），室温放置 15 min。
6）向吸附柱 CR3 中加入 350
μ
l 去蛋白液 RW1，12,000 rpm 离心 60 sec，倒掉
收集管中的废液，将吸附柱 CR3 放回收集管中。
7）向吸附柱 CR3 中加入 500
μ
l 漂洗液 RW ，室温静置 2 min，12,000 rpm 离心
60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CR3 放回收集管中。再重复一次。
8）12,000 rpm 离心 2 min，倒掉废液。将吸附柱 CR3 置于室温放置 10 分钟，以
彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
9）将吸附柱 CR3 转入一个新的 RNase-Free 离心管中，加入 30-100
μ
l
RNase-Free ddH2O 室温放置 2 min，12,000 rpm 离心 2 min，得到 RNA 溶液。
10）RNA 鉴定分析（浓度，纯度）。2. 采用 TaRa PrimeScript RT Master Mix 进行 cDNA 链合成:
1）按下列组分配制 RT 反应液
5X PrimeScrip Mix 2
μ
l
Total RNA (50
μ
M) -- ul
RNase free H2O up to 10
μ
l
2）反转录反应条件如下
37℃ 15min （反转录反应）
85℃ 5sec （反转录酶失活反应）
五、实验注意事项
1. 严格控制外源性 RNA 酶的污染:外源性的 RNA 酶存在于操作人员的手汗、唾
液等，也可存在于灰尘中，造成器械、玻璃制品、塑料制品、电泳槽、研究人
员的手及各种试剂的污染。
2. 大限度地抑制内源性的 RNA 酶:而各种组织和细胞中则含有大量内源性的
RNA 酶。
3. 戴手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致 RNase 污染。
4. 使用无 RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
5. RNA 在裂解液 RL 中时不会被 RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不
含 RNase 的塑料和玻璃器皿。
6. 配制溶液应使用无 RNase 的水。
实验三 real-time PCR 测端粒酶 mRNA 表达
一、实验目的
1.掌握 RT-PCR 基因扩增的原理和过程
2.了解端粒酶的结构与功能
二、实验原理:
1. 实时定量 PCR 技术:
利用荧光信号的变化实时检测 PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，
通过 Ct 值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。
Ct 值的定义:PCR 扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数。
Xn = X0 × （
1＋En）Ct
lg Xt ＝lg X0 ＋ Ct lg（
1＋En）
Ct = -k lg X0 ＋ b
X0 :起始模板数量
En:扩增效率
Xt:荧光扩增信号达到阈值时扩增产物的量，在阈值设定以后，它是一个常数
Log 模板起始浓度与 Ct 值呈线性关系。
模板 DNA 量越多，荧光达到阈值的循环数越少，即 Ct 值越小。
2.常用荧光标记方法:
特异性荧光标记 TaqMan Probe
非特异性荧光标记 SYBR Green I:是一种结合于 dsDNA 双螺旋小沟区域
的具有绿激发波长的染料。
问题点:
SYBR Green I 与双链 DNA 进行结合后散发荧光，因此如果反应体系
中有非特异性扩增或引物二聚体的产生，也将同时被检测，从而可能导致检测
结果不准确。
关键点:
设计合适引物，非特异性扩增！
端粒酶:通过识别并结合富含胞嘧啶 C 的端粒末端，以自身 RNA 为模板， TER
催化，合成端粒的 DNA 重复序列，从而阻止随着 DNA 复制和细胞分裂所
造成的端粒的不断缩短， 进而稳定染体的长度，避免细胞因端粒丢失
所导致的凋亡。因此，端粒酶在细胞永生化和肿瘤发生中起着重要作用。
相对定量分析——2 -
∆ ∆
Ct 法
三、试剂与仪器:
1. LightCycler 480 SYBR Green I Master
2. LightCycler 8-Tube Strips (white)
3. 无菌，无ＲＮＡ酶离心管
4. 无菌，无ＲＮＡ酶枪头
四、实验操作:
1. 加样:试剂 体积
模板（稀释 5 倍） 2µl
Master mix，2×conc. 10µl
正向引物 1µl
反向引物 1µl
水，PCR 级别 6µl
总体积 20µl
2.PCR 程序设定:SYBR Green I 选择“SYBR Green I /HRM Dye”，反应总体积
20 ul。
3.设定每个程序中对应步骤的①温度(Target)、②信号获取模式(Acquisition
Mode)及 ③时间(Hold)。
4.设定完成后，放入样板，窗口右下方的“Start Run” 按钮将由灰变为蓝，
此时即可点击之，开始运行实验。
5.运行完毕后，点击界面左侧“Sample Editor”，对样本详细信息进行编辑。
6.点击界面左边的“Analysis”，进入分析界面，进行 Tm 分析 (Tm Calling) 分
析和相对定量 (Relative Quantification) 分析
五、结果分析
2 - △△Ct 法:假设目的基因和参照基因扩增效率都接近 100%
△Ct（第 n 组）＝16－17＝-1 △Ct（组）＝18－17.4=0.6
△△Ct=△Ct（第 n 组）－△Ct（组）＝-1－0.6＝－1.6
比率（癌细胞组/正常细胞组）=2－△△Ct＝2－（－1.6） = 3
所以 TERT 基因在癌细胞的表达水平是正常细胞的 3 倍。
要求实验报告分析出自己组对比组的结果
六、实验注意事项
1、能标准的使用微量移液器，使重复样本得到相同的结果。2、学会分析溶解曲线，得到循环 CT 值后学会如何分析结果。
实验四 蛋白分子量测定——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
一、实验目的
1.
学
SDS-PAGE
测定蛋白质分子量的基本原理
2.
掌握
SDS-PAGE
垂直板电泳的操作方法
二、实验原理
聚丙烯酰胺凝胶（
PAGE
）是由丙烯酰胺（
Acr
）和交联试剂
N,N
’
-
甲叉双丙
烯酰胺
(Bis)
在有引发剂（如过硫酸铵）和增速剂（如
N,N,N
’
,N
’
-
四甲基乙二胺，
TEMED
）的情况下聚合而成的。在一定浓度范围内，改变聚合体系中
Acr
和
Bis
的比例，可得到不同网眼大小的凝胶，由于凝胶的三维网状结构，对在凝胶中泳
动的不同分子量的质点有着选择和阻碍，因此具有分子筛效应，决定着聚丙烯酰
胺凝胶的有效分离笵围。
SDS-
聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进了十二烷基硫酸
钠（
sodium dodecyl sulfate
，简称
SDS
），
SDS
是一种阴离子去污剂，它能破坏
蛋白质分子之间以及与其他物质分子之间的非共价键，使蛋白质变性而改变原有
的空间构象。是在强还原剂，如巯基乙醇存在下，由于蛋白质分子内的二硫
键被还原剂打开，不易再氧化，这就了蛋白质分子与
SDS
充分结合，形成
带负电荷的
SDS-
蛋白质复合物。
带负电荷的蛋白质
-SDS
复合物由于结合了大量的
SDS
，使蛋白质丧失了原有的电荷状态，形成了仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除
了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异。
蛋白质
-SDS
复合物在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒。不同蛋
白质的
SDS
复合物的短轴长度都一样，约为
1.8nm
，而长轴则随蛋白质的分子
量成正比变化。这样的蛋白质
-SDS
复合物在凝胶中的迁移率，受蛋白质原
有电荷和形状的影响，而只是椭圆棒的长度，也就是蛋白质分子量的函数。
lgMw = -bRm + K
Mw
:蛋白质的分子量；
Rm
:相对迁移率
b
: 斜率
;
K
:截距
当条件一定时，
b
，
K
均为常数，即此时
lgMw
与
Rm
的关系为线性关系，
如以
lgMw
对
mR
作图，应得到一条直线，如上图。
若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量的对数作图，可获得一条标
准曲线。未知蛋白质的相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲
线上求得分子量。
三、实验试剂及仪器
1.
实验试剂
（
1
）
30%
丙烯酰胺（
Acr
）:
Acr/
甲叉双丙烯酰胺
(Bis)=29:1
（
2
）
10%SDS
（十二烷基磺酸钠）
（
3
）
10%
过硫酸铵
(AP)
（
4
）
TEMED
（四甲基乙二胺）
（
5
）
2
×上样缓冲液:
10%SDS
（
4ml
）
+
巯基乙醇（
1ml
）
+0.2%
溴酚蓝（
2ml +
甘油
2ml +1M pH6.8Tris-HCl
（
1ml
）
（
6
） 浓缩胶缓冲液（
1M Tris-Cl
缓冲液
pH6.8
）
（
7
） 分离胶缓冲液（
1.5M Tris-Cl
缓冲液
pH8.8
）
（
8
） 电泳缓冲液
: (SDS 20g
，
Tris 60g,
甘氨酸
282.2g, pH8.3
）加蒸馏水使其溶
解后定容至
2L
。
（
9
） 固定液:乙醇
500ml
，冰乙酸
100ml
混匀，
（
10
） 染液:考马斯亮蓝
R250 1.25g
，甲醇
225ml
，冰乙酸
50ml
，蒸馏水定
溶至
1L
。
（
11
） 脱液:冰乙酸
80ml
，乙醇
250ml
，加蒸馏水定容至
1L
。
2.
实验仪器
（
1
）垂直板电泳装置、电泳仪、制胶架
（
2
）移液枪、移液管
（
3
） 烧杯、培养皿
（
4
） 离心机
四、实验步骤
1.
装板
将垂直板型电泳装置内的板状凝胶模子取出，将玻璃片洗净、凉干、嵌入
凹槽中，形成一个“夹心”凝胶腔，
把装好的凝胶腔置于仰放的电上槽。将电泳槽、凝胶模子串成一体的垂
直板型电泳装置，垂直放置在水平台面上，灌注胶液。
2.
分离胶的配制（
12%
）
试剂
体积
H2O
3.35
（
ml
）
凝胶贮备液
2.5
（
ml
）
分离胶缓冲液
(pH8.8)
2.5
（
ml
）
10% SDS
0.1
（
ml
）
TEMED
5
（
ul
）
10%
过硫酸铵
50
（
ul
）
总体积
10
（
ml
）
3.
分离胶的灌注和聚合
用移液管将所配制的分离胶缓冲液沿着凝胶腔的长玻璃板的内面缓缓注
入，留出梳齿的齿高加
1cm
的空间以便灌注浓缩胶，然后加满蒸馏水。待分离胶凝固后，倒出蒸馏水，用滤纸吸干。
4.
浓缩胶的配制（
5%
）
试剂
体积
H2O
2.92
（
ml
）
凝胶贮备液
0.8
（
ml
）
分离胶缓冲液
(pH6.8)
1.25
（
ml
）
10% SDS
0.05
（
ml
）
TEMED
5
（
ul
）
10%
过硫酸铵
25
（
ul
）
总体积
5.05
（
ml
）
5.
浓缩胶的灌注和聚合
用移液管将所配制的浓缩胶缓冲液沿着凝胶腔的长玻璃板的内面缓缓
加入，将梳子插入胶液顶部，放置室温下待其聚合。
6.
样品的准备
在低分子量标准蛋白质和待测样品中分别加入适量还原缓冲液，放入沸水
中加热
3-5min
，取出冷至室温。
7.
加样
加入电缓冲液，小心拔出梳齿，用微量注射器向凝胶梳孔内加样。同时加
入
Marker
。
8.
电泳
上槽接负，下槽接正，打开直流电源，刚开始时，电压控制在不高于
100V
，
电流恒定在
10mA
；样品进入分离胶后，电压控制在不高于
140V
，电流恒定在
20mA
。待指示剂染料（溴酚蓝）迁移至凝胶下沿
1.0cm
处停止电泳。
9.
染和脱
电泳结束后，撬开玻璃板， 小心将胶取出，放入一大培养皿中。
染:加入染液，置于摇床上染
2h
。
脱:染完毕，倒出染液，加入脱液，置于摇床上脱，数小时更换
一次脱液，直至背景清晰，拍照。
10.
相对分子质量的计算
量出分离胶顶端距溴酚蓝间的距离
(cm)
以及各蛋白质样品区带中心与分离
胶顶端的距离
(cm)
，按下式计算相对迁移率
:
蛋白质样品距分离胶顶端迁移距离
(cm)
Rm =
溴酚蓝区带中心距分离胶顶端距离
(cm)
以标准蛋白质分子量的对数对相对迁移率作图，得到标准曲线，根据待测样
品相对迁移率，从标准曲线上计算出其分子量。
五
、
实验结果与分析
1.
根据凝胶结果，依据标准蛋白条带，判断各个蛋白质样品区带大概分子量。
2.
测量样品中各种蛋白质分子的相对迁移率
Rm
值，然后根据标准曲线计算
出各自分子量
3.
对实验操作及结果中不足之处进行分析。
六、实验注意事项
1
．丙烯酰胺和双丙烯酰胺具有很强的神经毒性并容易吸附于皮肤，操作时应免
避沾在脸、手等皮肤上。好戴一次性塑料手套操作。
2
．
10%
过硫酸铵现用现配，
4
℃冰箱贮存不超过
48
小时。
3
．灌制凝胶时，应避免产生汽泡，因为汽泡会影响电泳分离效果。
4.
蛋白加样量要合适。加样量太少，条带不清晰
;
加样量太多则泳道超载，条带
过宽而重叠，甚至覆盖至相邻泳道。
5
．刚灌注分离胶混合溶液后，应在分离胶液面上加
1-2cm
高的水层，以阻隔空
气。胶液面上加水层时要小心，缓缓叠加，以免冲坏凝胶的胶面。
七、思考题
1.
在不连续体系
SDS-PAGE
中，当分离胶加完后，需在其上加一层水，为什么
?
2.
电缓冲液中甘氨酸的作用
?
3.
在不连续体系
SDS-PAGE
中，分离胶与浓缩胶中均含有
TEMED
和
AP
，试述
其作用
?
4.
样品液为何在加样前需在沸水中加热几分钟
?
实验五 糖酵解中间产物的鉴定
一、实验目的
1
．掌握糖酵解中间产物的鉴定方法和原理。
2
．熟悉通过酶的抑制作用调节代谢途径。
3
．了解使中间产物堆积的方法在研究中间代谢中的意义。
二、 实验原理
在细胞质中，一分子葡萄糖通过一系列反应转化为两分子丙酮酸，并伴随着
ATP
生成的一系列反应是有机体获得化学能的原始的途径，也是原核生物和真
核生物糖类物质分解代谢的共同途径。利用碘乙酸对糖酵解过程中的
3-
磷酸甘油
醛脱氢酶特异地且不可逆地抑制作用，使
3-
磷酸甘油醛向前变化而积累。硫
酸肼作为稳定剂，用来保护
3-
磷酸苷油醛使其不自发分解。然后用
2,4-
二硝基苯
肼与
3-
磷酸甘油醛在碱性条件下形成
2,4-
二硝基苯肼
-
丙糖的棕复合物，其棕
程度与
3-
磷酸甘油醛含量成正比。从而明糖的分解代谢过程中，含有
3-
磷
酸甘油醛的中间产物。
三、实验试剂及器材
1.实验材料
新鲜酵母
2. 仪器:
离心管、移液枪；恒温水浴；离心机
3.试剂:
1
）
2,4-
二硝基苯肼
: 0.1 g 2,4-
二硝基苯肼溶于水
100 ml 2 mol/L
盐酸溶液中，储
于棕瓶中备用。
2
）
0.56 mol/L
硫酸肼溶液
:
称取
7.28 g
硫酸肼溶于
50 ml
水中，这时不会溶
解，当加入
NaOH
使
pH
值达
7.4
时则溶解。
3
）
5%
葡萄糖溶液。
4
）
10%
三氯乙酸溶液。
5
）
75 mol/L NaOH
溶液。
6
）
0.002 mol/L
碘乙酸溶液。
四、实验步骤
1．取小烧杯 3 支，编号，分别加入新鲜酵母 0.3 g，并按表 1 分别加入各试剂，
混匀。
2．将各杯混合物分别放入 37℃水浴中保温 1.0 小时，观察发酵管产生气泡的量
有何不同。
3．在 2 号和 3 号杯中按表 2 补加各试剂，摇匀后放 5-10 分钟
4. 将三支离心管中的上清液分别进行离心或者过滤，3000rpm, 3min。
5．取 3 支试管，分别加入上述滤液 0.5 ml，并按表 3 加入试剂和处理。
（取上清液 0.5 ml，加入 0.75 mol/L NaOH 0.5 ml，混匀后在 37℃水浴保温
10 分钟，然后分别向上述试管中加入 0.5 ml 2,4-二硝基苯肼，混匀后在 37℃
水浴保温 10 分钟，然后加入 0.75 mol/L NaOH 3.5 ml，观察实验结果。）
表 1 糖酵解中间产物的鉴定——发酵产生气泡观察
编号
5%
葡萄糖溶
液 （
ml
）
10%
三氯乙
酸（
ml
）
碘乙酸
（
ml
）
硫酸肼
（
ml
）
发泡量
1
10
（
ml
）
2
1
1
2
10
（
ml
）
0
1
1
3
10
（
ml
）
0
0
0
表 2
补加试剂
编号
10%
三氯乙酸
（
ml
）
碘乙酸
（
ml
）
硫酸肼
（
ml
）
发泡量
2
2
0
0
3
2
1
1
表 3 糖酵解中间产物的鉴定——二硝基苯肼反应
五、结果与分析
实验中哪一发酵管生成的气泡多?哪一管生成的颜深? 为什么?
描述观察到得实验现象并对实验结果加以分析。包括保温后的气泡量及的
显效果。
六、注意事项
1. 本实验虽为定性鉴定，但量取体积等人要求相对准确 ；
2. 注意试剂的添加顺序，编号不要弄混 ；
3. 每步反应前注意要充分混匀 。
七、思考与讨论
1. 实验鉴定的是哪种中间产物？
2. 实验中三氯乙酸、碘乙酸、硫酸肼三种试剂分别起什么作用？
3. 实验中的气泡是什么气体? 如何产生的？
编号
滤液
（ml）
0.75 mol/L
NaOH（ml）
摇
匀
，
室
温
放
置
5
分
钟
2，4-二硝基
苯肼 （ml）
摇
匀
，
室
温
放
置
5
分
钟
0.75 mol/L
NaOH（ml）
1
0.5
0.5
0.5
3.5
2
0.5
0.5
0.5
3.5
3
0.5
0.5
0.5
3.5
实验六 荧光分光光度法测定维生素 B2 的含量
一、实验目的
1．学荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素 B2 的分析原理；
2．掌握荧光分光光度计的使用方法；
3．了解分子荧光产生的机理.
二、 实验原理
维生素 B2 易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光
照易分解，对热稳定。 维生素 B2 在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为
光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测 VB2 的荧光时溶液要控制在
酸性范围内，且在避光条件下进行。
核黄素
(V
B2
)
光黄素
多维葡萄糖中含有维生素 B1、B2、C、D2 及葡萄糖，其中维生素 C 和葡萄糖
在水溶液中不发荧光，维生素 B1 本身无荧光，在碱性溶液中用铁氰化钾氧化后
才产生荧光，维生素 D2 用二氯乙酸处理后才有荧光，他们都不干扰维生素 B2
的测定。
维生素 B2 溶液在 430～440 nm 蓝光的照射下，发出绿荧光，其峰值波长为
545 nm。VB2 的荧光在 pH=6～7 时强，在 pH=11 时消失。
三、实验试剂及器材
1. 试剂:
100
μ
g/mlVB2 标准溶液（4%冰醋酸配制，置阴暗处保存）；冰乙酸；
多维葡萄糖粉试样
2. 器材:
岛津 RF5301PC 荧光分光光度计 ；微量移液器 ；容量瓶；石英比皿
四、实验步骤
1、打开氙灯，再打开主机，然后打开计算机启动工作站并初始化仪器。
2、仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目
设置适当的仪器参数:激发波长 Ex= 435 nm，发射波长 Em=545nm。
3、标准曲线测定，样品测定。
4、制作标准曲线，由标准曲线计算样品中维生素 B2 的含量。
5、 退出主程序，关闭计算机，先关主机，关氙灯。
五、结果与分析
1、 原始数据:标准曲线以及样本的荧光值。
测量 1-6 号标准曲线荧光值:VB2 的含量:0.0ug/ml、0.1ug/ml、0.2ug/ml、
0.3ug/ml、0.4ug/ml、0.5ug/ml。
测量 7 号样品荧光值
2、绘制出标准曲线:要求规范作图
铅笔作图；
横、纵坐标名称及单位；
日期、作者 、曲线名称；
曲线上体现出待测样品的荧光值及浓度值。
3、计算:样品中维生素 B2 的量。
要求: 写出公式、代入数据、写出结果。
实验八 pH 值和温度对酶促反应速度的影响
一、实验目的
1
．了解不同
pH
和温度对淀粉水解和唾液淀粉酶活性的影响。
2
．学会测定酶适
pH
和温度的方法。
二、实验原理
酶都是蛋白质，它的活性受环境 pH 的影响为显著。通常各种酶只有在一
定的 pH 范围内才表现它的活性，一种酶表现其高活性时 pH 的值，称为该酶的适 pH。本实验以唾液淀粉酶在不同的温度和 pH 下对淀粉的作用为例观察温度
和 pH 对酶活性的影响，淀粉的水解程度用其与碘液的呈反应加以区别。
三、实验试剂及器材
1. 试剂:
淀粉；碘；碘化钾；磷酸氢二钠；柠檬酸
2. 器材:
试管 吸量管 试管架 吸耳球
四、实验步骤
1. 溶液配制:
0.5%淀粉溶液（含 0.3%氯化钠）（新鲜配置），碘-碘化钾溶液（4 g 碘及碘化
钾 6 g 溶于 100 ml 蒸馏水中，于棕瓶中保存），0.2 mol/L 磷酸氢二钠溶液，
0.1 mol/L 柠檬酸溶液。
2. 样品收集
每人取一个干净的小烧杯，先用自来水漱口，将口腔内的食物残渣清除干净，
然后去蒸馏水约 20ml 含入口中，做咀嚼动作 3-4min,以分泌较多的唾液。将
口腔中的蒸馏水吐入干净的小烧杯中，此即为稀释的唾液淀粉酶液。
3. pH 对酶活性的影响
（
1）缓冲液的配制
编号
0.2mol/L
磷酸氢二纳（
ml
）
0.1mol/L
柠檬酸（
ml
）
缓冲液（
ml
）
1
5.15
4.85
5.0
2
6.16
3.39
6.2
3
7.72
2.28
6.8
4
9.08
0.92
7.4
5
9.72
0.28
8.0
（
2）底物的准备
6 支干燥的试管编号，依次加入不同 pH 的缓冲液各 3 ml，第 6 号试管与第
3 号相同。再向每个试管中添加 0.5%淀粉溶液 2 ml，摇匀。
（
3）酶促反应时间测定
向第 6 号试管加入稀释 100 倍的唾液 2 ml，摇匀后放入 37 ℃恒温水浴中保
温。每分钟取 1 滴混合液于离心管中或反应板上，加 1 滴碘化钾-碘溶液，呈橙
黄时取出试管，记录时间。
（
4）适 pH 测定
以 1 min 的间隔，依次向 1～5 号试管中加入稀释 200 倍的唾液 2 ml，摇匀，
同样以 1 min 间隔，将 5 只试管放入 37 ℃恒温水浴中保温，反应至所需时间。
依次取出，立即加入碘化钾-碘液 2 滴，充分摇匀。观察颜，可看出不同 pH
值时淀粉被水解的程度，不同 pH 值对唾液淀粉酶活性的影响，并确定其适 pH。
4. 温度对酶活性的影响
(1）取三支试管按下表操作:
试剂
管号
1
2
3
1%
淀粉溶液（
ml
）
1
1
1
放置条件
沸水浴
37
℃
冰浴
稀释唾液（滴）
4
4
4
分别按上述条件继续放置 10 min。
(2) 从三支试管中取出溶液 1 滴于离心管中或反应板上，加上 1 滴碘液，观察呈
现象，记录结果并解释其原因。
五、注意事项
1. 各管反应及操作应在同一水平；
2. 每管间隔相同的时间加样和终止反应以各管反应时间相同。
附件:生化实验.pdf