嘉兴长期回收废钼收购厂家
废钼回收的社会效益与行业挑战
该行业的社会效益远超经济价值:一方面缓解资源短缺，保障战略金属供应链安全；另一方面创造大量就业，如废料分拣、技术研发等岗位。但挑战亦存:小作坊式回收导致环境污染，需加强监管；高端应用（如核工业钼材）对回收技术要求极高，国内企业仍依赖进口设备。推动产学研合作（如共建钼再生实验室）和行业标准统一，将是破局关键。
钼是一种白金属，硬度高且坚韧，在常温和高温下强度很高，在合金钢、特钢、工具钢以及结构钢中均有应用。人体各组织内页含有钼微量元素。那么，A股市场中生产钼的上市公司有哪些?下面就来具体了解一下。
生产钼的上市公司有哪些?生产金属钼的上市公司一览
新华龙(603399) :经过多年的研发和实践经验积累,公司已经取得11项专利权,并在钼精矿焙烧、钼铁冶炼和钼酸铵加工等生产过程中总结出一整套国内的工艺技术,形成原料要求低、产品质量稳定、热能利用率高的节约型生产模式。目前,公司焙烧钼精矿和钼酸铵产品收率可达98.5%以上,处于行业领先水平。
金钼股份(601958) :公司是亚洲大的钼产品生产商,年产折钼金属14000吨左右,占国内市场的30%以上。公司生产钼炉料、钼化工、钼金属三大系列二十余种品质一流的产品。公司焙烧钼精矿粉、焙烧钼精矿块、钼铁等钼炉料产品约20000吨,约占钼炉料产品产量的6%。
炼石有(000697) :2014年7月份,公司全资子公司陕西炼石矿业决定总投资9596.55万元实施对钼铼精矿(即钼精粉)进行综合回收利用。包括建设投资4313.02万元,流动资金5283.53万元。项目建设期一年,建成后,年处理能力为钼铼精矿3000吨,年产出二烷基二硫代氨基甲酸钼4000吨、二水钼酸钠2104.35吨、高铼酸铵1.00吨、硫酸钠3300.66吨。
兴业矿业(000426) :公司所在的内蒙矿产资源储量居全国之首,现已查明铅金属资源储量893万吨,锌金属储量2,270万吨,均居全国位;查明钼金属资源储量135.79万吨,居全国第三位,铁矿基础储量13.57亿吨,居全国第四位。
洛阳钼业(603993) :公司位于国内钼资源量的河南省洛阳市栾川县,地缘优势显著。2008年1月18日,河南省人民政府转发了《河南省钼矿资源整合实施意见》,该意见明确指出,钼矿资源整合的主要任务是完成相关钼矿探矿权、采矿权整合和钼加工企业联合重组;推动钼矿资源向规模大、技术水平高、深加工能力强、资源综合利用率高的钼矿资源开发优势企业集中。
闽东电力(000993) :地质四队以寿宁县天池银金矿、周宁县周挡金矿、周宁县王宿金矿、屏南县里洋钼矿的四个100%探矿权评估作价857.43万元
实验室教育
一、实验目的
1.
了解实验室管理制度
2.
主要掌握化学品使用、危险废物处置和应急救援
二、实验室典型隐患及教育案例
1.
试剂瓶放在桌面边缘
2.
做完实验盖子不及时盖好拧紧
3.
废液桶与废弃物存放点无警戒标识
4.
典型事故、事例
8
·
12
天津滨海新区爆炸事故——高校实验室管理的分水岭；
2015
年
8
月
12
日，天津市滨海新区发生火灾爆炸事故造成
165
人遇难 、
8
人失踪，
798
人受伤 ，造成直接经济损失
68.66
亿元。瑞海公司集装箱内的硝化棉在高温等
因素的作用下自燃， 引起相邻集装箱内的硝酸铵等危险化学品发生爆炸。
8
月
14
日紧急《关于深入开展危险化学品和易燃易爆物品专
项整治的紧急通知》
三、一般
1.
应熟悉实验室环境: 水、 电阀门以及通道的位置。 熟悉各类灭火和
应急设备的位置和使用方法。
2.
开展实验时要密切关注实验进展情况， 不得擅自离岗，进行危险实验时至
少
2
人在场。 严禁将实验室内物品私自带出实验室。
3.
实验结束后， 一个离开实验室的人员检查并关闭整个实验室的
水、 电、 气、 门窗。
4.
进入实验室要做好必要的个人防护， 不得在实验室内穿露脚趾的鞋子。
5.
严禁穿着实验室防护服离开实验室， 如就餐或去办公室、休息室和卫生间
等。
6.
禁止在实验室工作区域进食、 饮水、 吸烟、 化妆和处理隐形眼镜。
7.
禁止在实验室储存食品和饮料。
8.
处理性实验材料和动物后， 以及离开实验室前都应洗手。
9.
实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。
四、消防
1.实验室火灾隐患
1)
加热设备引起火灾
2)
违反操作规程引起火灾
不规范的蒸馏、 回流等操作
3)
易燃易爆危险品引起火灾
4)
化学废弃物易引起火灾
5)
用电不规范或电路老化引起火灾
6)
违规吸烟， 乱扔烟头引起火灾
2.
火灾初起的紧急处理
3.
消防器材使用方法
4.
火场自救与逃生常识
生命重要 ！
五、化学品
1.
危险化学品是指具有毒害、腐蚀、爆炸、燃烧、助燃等性质，对人体、环
境具有危害的剧毒化学品和其他化学品。
2.
采购受公安机关管控， 应通过院系申请、 学校等相关部门审批， 由管理
人员登录“危险化学品治安管理信息系统”
进行网上备案，
获得公安机关审批
后， 统一采购。
3.
化学品保存的一般原则:保持整洁、
通风、
隔热、
，
远离热源、
火
源、 电源和水源， 避免阳光直射。
4.
危险品分类存放要求 :如还原剂、 有机物等不能与氧化剂、硫酸、 硝酸
混放；
5.
强酸不能与强氧化剂的盐类混放；
6.
遇酸可产生有害气体的盐类（如: 氰化钾等）不能与酸混放。
六、化学品使用规范
1.
进行实验之前应先阅读使用化学品的技术说明书，了解化学品特性、
影响因素与正确处理事故的方法，采取必要的防护措施。
2.
实验人员穿着适合的实验工作服，长衣长裤，不得穿短裤短裙以及露趾凉鞋。
3.
严格按实验规程进行操作，在能够达到实验目的和效果的前提下，尽量减少
品用量，或者用危险性低的品替代危险性高的品。
4.
不可直接接触品、品尝品味道、把鼻子凑到容器口嗅闻品的气味。
5.
使用剧毒化学品、 爆炸性物品或强挥发性、 刺激性、 恶臭化学品时， 应
在通风良好的条件下进行。
七、危险废物处置
:
1.
破损的玻璃仪器（试管、量筒、烧杯等）应专门存放，不得与实验垃圾混放。
2.
废试剂瓶倒尽残液后应使用纸箱包装存放。
3.
化学实验废液不得直接倒入下水道。液桶盛放不得超过大容量的
80%
。收
集废液后应盖紧盖子（含内盖），存放位置要阴凉并远离热源、 火源。
4.
运送实验废物时，
至少需两人同行，
并穿着实验服，
佩戴口罩和手套，
做
好防护。 配合管理人员检查并称重， 填写入库记录， 粘贴危险废物标签。
八、应急救援:
发生化学事故， 应立即报告老师， 并积采取措施进行应急救援， 然
后送医院治疗。
1.
化学烧灼伤
应立即脱去沾染化学品的衣物，迅速用大量清水长时间冲洗，避免扩大烧伤
面。处理时，应尽可能保持水疱皮的完整性，不要撕去受损的皮肤。
2.
化学
应迅速脱离低温环境和冰冻物体，用
40
℃左右温水将冰冻融化后将衣物脱
下或剪开，然后对部位进行复温，并尽快就医。
3.
吸入化学品中毒
果断措施切断毒源，并打开门、
窗，
降低毒物浓度。迅速将伤员救离现场，
搬至空气新鲜、 流通的地方，松开领口、 紧身衣服和腰带， 以利呼吸畅
通， 使毒物尽快排出。
.
上学期实验:
实验一 蛋白质浓度的测定(1)—— Folin-酚法
一、实验目的
1.
学
Folin-
酚试剂法测定蛋白质含量的原理及方法
2.
学绘制标准曲线
3.
掌握用标准曲线求待测物质含量的方法
二、实验原理
1921 年，Folin 首创，利用蛋白质分子中酪氨酸残基（酚基）还原酚试剂
（磷钨酸
-
磷钼酸）起蓝反应。
1951
年，
Lowry
对此法进行了改进，先在标本
中加碱性铜试剂，再与酚试剂反应，提高了灵敏度。
Folin-酚试剂在碱性条件下不稳定，其磷钼酸盐-磷钨酸盐易被酚类化合
物还原而呈蓝反应(钼蓝和钨蓝的混合物)。由于蛋白质中含有带酚羟基的酪
氨酸(Tyr) ，故有此显反应。该反应分两步进行，首先在碱性溶液中，蛋白质
分子中的肽键与碱性铜试剂中的 Cu2+作用生成紫红的蛋白质- Cu2+复合物，然
后，蛋白质- Cu2+复合物中所含的酪氨酸残基还原酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸，
生成蓝的化合物。
在一定浓度范围内，蓝的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系，故可根据预先
绘制的标准曲线求出未知样品中蛋白质的含量。
三、实验试剂及仪器
1. 实验试剂
（
1
） 待测样品
（
2
） 酪蛋白标准品
（
3
）
Folin-
酚试剂甲:
（
4
）
Folin-
酚试剂乙:
（
5
）酪蛋白标准溶液母液（
500
μ
g/ml
）:
2. 实验仪器
（
1）722N 型可见分光光度计
（
2）试管 7 支、试管架
（
3）移液枪
（
4）水浴锅
四、实验步骤
1
、标准曲线的绘制:
取六支干净试管编号，按下表加入试剂:（单位毫升）
2.
待测样品:
准确吸取待测样液
0.5ml
于
7
号试管内，加入蒸馏水
0.5ml
、
Folin-
试剂甲
5.0ml
、
Folin-
试剂乙
0.5ml
，重复上步操作，测样品
A500
。
五
、
实验结果与分析
1.
标准曲线绘制
C
X
:为根据待测样品的吸光值查标准曲线所得的蛋白质浓度
编号
(
标准溶液
浓度
)
酪蛋白标准
溶液母液
(500
μ
g/ml)
ml
去离子水
(ml)
Folin-
酚甲
(ml)
Folin-
酚乙
(ml)
A500
1
0.0
1.0
5.0
0.5
0.000
2
0.2
0.8
5.0
0.5
X.XXX
3
0.4
0.6
5.0
0.5
X.XXX
4
0.6
0.4
5.0
0.5
X.XXX
5
0.8
0.2
5.0
0.5
X.XXX
6
1.0
0.0
5.0
0.5
X.XXX
7(?)
待测样液
0.5ml
0.5
5.0
0.5
X.XXX2.
计算待测样品浓度
根据图中数值，计算出待测样品的浓度。
六、实验注意事项
（一）实验操作注意事项
1. Folin-
酚乙试剂在碱性条件下不稳定，当
Folin-
酚试剂加到碱性的铜
-
蛋白质溶
液中后，立即混匀（加一管混匀一管），使还原反应发生在磷钼酸
-
磷钨
酸试剂被破坏之前
;
2.
尽量减少各管之间的反应时间误差；
3.
一定要注意实验的时间，因为溶液的光密度值是随着时间在不断增大的，如
果时间超过了
30
分钟，则测得的光密度值就不准确了；
4.
在使用分光光度计时，拿比皿是要拿它的毛面，不可以用手接触它的光滑
面，自己手上的油污是测量值不准确；
5.
在擦拭比皿时，要顺着一个方向擦；
6.
在比皿中装入的液体量大约要是比皿体积的三分之二
.
（二）标准曲线制作注意事项
1.
作一条标准曲线至少要
5
个点
2.
被测物与标准物应在相同条件下测定
3.
尽量使未经过线上的实验点均匀分布在曲线或直线两侧
4.
标准曲线中标准物浓度有一定的线性范围，应使标准曲线范围在被测物质浓
度的
1/2
～
2
倍之间，并使吸光度在
0.05
～
1.0
范围为宜
（三）移液枪使用注意事项
1.
量程选择:
35%-100%
范围内佳
2.
大体积→小体积
顺时针
;
小体积→大体积 逆时针
3.
将移液枪端垂直插入吸头，左右微微转动，上紧即可
4.
吸液
:
垂直吸液，枪头尖端需浸入液面
2-4mm
以下。慢吸慢放，控制好弹
簧的伸缩速度。吸液速度太快会产生反冲和气泡，导致移液体积不准确。
5.
放液
:
将吸嘴口贴到容器内壁并保持
10-40
°倾斜。平稳地把按钮压到一档，
停约一秒钟后压到二档，排出剩余液体。压住按钮，同时提起移液枪
;
松开
按钮。 按弹射器除去移液嘴。
6.
使用完毕
:
至大量程
,
让弹簧恢复原形，挂至移液枪架上。
七、思考题
1.
试述
Folin-
酚试剂法的优点？
2.
应用本方法有哪些干扰作用？为什么？应如何注意？
3.
什么叫标准曲线？ 绘制标准曲线有何实用意义？
实验二 蛋白质浓度测定(2)-紫外线（UV）吸收法
一、实验目的
1.
学紫外线（
UV
）吸收法测定蛋白质含量的原理
2.
了解紫外分光光度计的构造原理
3.
掌握它的使用方法。
二、实验原理
由于蛋白质分子中酪氨酸和氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此蛋白质具
有吸收紫外线的性质，吸收高峰在
280nm
波长处。在此波长范围内，蛋白质溶
液的光吸收值（
A280
）与其含量呈正比关系，可用作定量测定。
利用紫外线吸收法测定蛋白质含量的优点是迅速、简便、不消耗样品，低浓
度盐类不干扰测定。因此，在蛋白质和酶的生化制备中（是在柱层析分离中）
广泛应用。
此法的缺点是:（
1
）对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和氨酸含量差
异较大的蛋白质，有一定的误差；（
2
）若样品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外线的
物质，会出现较大的干扰。 不同的蛋白质和核酸的紫外线吸收是不相同的，即
使经过校正，测定结果也还存在一定的误差。但可作为初步定量的依据。
三、实验试剂及仪器
1. 实验试剂
（
1
）标准蛋白质溶液（
1mg/ml
）
（
2
）待测蛋白质溶液，浓度需稀释至
1mg/ml
附近。
2. 实验仪器
紫外分光光度计、微量移液器、枪头、试管和试管架等
四、实验步骤
1.
标准曲线法:
取
8
支试管，按下表加入试剂（单位
ml
），并进行操作，绘制标准曲线，
A280
值为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标（蛋白质浓度为
mg/ml
）。
2.
取待测蛋白质溶液
2.0 ml
于
5
号试管中
,
加入蒸馏水
2.0 ml
，摇匀，按上述方
法测定
A280
，在标准曲线上查出待测蛋白质浓度。
五
、
实验结果与分析
1
． 原始数据
:
记录各管的
OD
值
2
． 绘制出标准曲线:要求规范作图
（
1
）用铅笔作图、
（
2
）标出横、纵坐标名称及单位
（
3
）标出日期、作者 、曲线名称
（
4
）曲线上体现出待测样品的
OD
值及浓度值。
3.
计算:蛋白质含量。
（
1
）要求: 写出公式、代入数据、写出结果。
(2
）根据标准曲线
R
2
值判断实验结果是否，分析可能造成实验误差
的原因有哪些？
六、实验注意事项
1.
比皿使用时注意不要沾污或将比皿的透光面磨损，应手持比皿的毛
面。
2.
待测液制备好后应尽快测量，避免有物质分解，影响测量结果。
3.
测得的吸光度
A
好控制在
0.2~0.8
之间，超过
1.0
时要做适当稀释。
4.
开关试样室盖时动作要轻缓。
5.
不要在仪器上方倾倒测试样品，以免样品污染仪器表面，损坏仪器。
6.
比皿在盛装样品前，应用所盛装样品冲洗两次，测量结束后比皿应用
蒸馏水清洗干净后倒置晾干。若比皿内有颜挂壁，可用无水乙醇浸泡
清洗。
七、思考题
1.
紫外吸收法与
Folin-
酚比法测定蛋白质含量相比，有何缺点及优点？
2.
若样品中含有核酸类杂质，应如何校正？
3.
分析实验误差产生的原因
4.
为什么吸光度
A
好控制在
0.2~0.8
之间？
实验三 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
一、实验目的
1.
了解电泳的一般原理
2.
掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作技术
3.
掌握醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白的方法
二、实验原理
血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于
pH7.4
。它们在
pH8.6
的缓冲
液中均解离带负电荷，在电场中向正移动。
血清中含有清蛋白，
α
-
球蛋白、
β
-
球蛋白、
γ
-
球蛋白和各种脂蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构
象、分子大小、形状及所带的电荷量不同，因而在醋酸纤维素薄膜上电泳的速
度也不同，因此可以将它们分离。
在相同碱性
PH
值缓冲体系中，
分子量小、
等电点低、带负荷电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度较快。
醋酸纤维素薄膜电泳是采用醋酸纤维素薄膜作为支持物的一种电泳方法。
醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯，该膜具有均一的泡
沫状结构，厚度约为
120
μ
m
，通透性好，对分子移动阻力少，是一种良好的
电泳支持物。具有微量、、简便、区带清晰、灵敏度高、便于摄影和保存
等优点。常用于科学实验、生化产品分析和临床化验，如血浆蛋白、血红蛋白、
球蛋白、脂蛋白、糖蛋白、甲胎蛋白、同工酶等的分离鉴定。
三、实验试剂及仪器
1.
实验试剂、材料
巴比妥
-
巴比妥钠缓冲溶液，染液，漂洗液，血清
:
医院采血
2.
实验仪器
常压电泳仪、水平电泳槽、点样器、滤纸、醋酸纤维素薄膜、培养皿、镊子等
四、实验步骤
1.
准备和点样 :
将醋酸纤维素薄膜（
2cm
×
8cm
）浸入缓冲溶液中，待浸透用镊子轻轻取出，夹在两层粗滤纸内吸干多余的缓冲液，然后将无光泽面朝上平放于滤纸
上。点样器在血清上蘸一下，再将点样器轻印在加样线上，使血清成一条状点
于醋酸纤维素薄膜一端
1.5
厘米处，将薄膜无光泽面朝下，点样端为阴，进
行电泳。
2.
电泳条件:
电压
80-90V
，恒压，
1h
，电流与薄膜多少相关。
3.
染、漂洗:
电泳完毕，将薄膜浸于染液中
10
分钟，取出，置漂洗液中漂洗
2-3
次至
背景无，再浸于蒸馏水中观察。
五
、
实验结果与分析
以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清在
PH8.6
的缓冲体系中电泳
1h
左
右，染后可显示
5
条区带。清蛋白泳动快，其余依次为
α
1-
、
α
2-
、
β
-
及
γ
-
球蛋白，如下图所示。
对照各自电泳结果，分析各将条带是否成功分离，存在的问题及原因有哪些？
六、实验注意事项
1 .
薄膜的浸润与选膜是电泳成败的关键之一。
2.
应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸吸去，吸水量以不干不湿为宜。
3.
分清薄膜的点样面，点样应点在薄膜的毛面上。
4.
点样要细窄、均匀、集中；点样量要适量，不宜过多或过少； 动作要轻、
稳，用力不能太大。
5.
注意薄膜放置的方向。电泳时应将薄膜的点样端置于电泳槽的负端，且
点样面向下。
6.
勿使点样处与电泳槽接触。
7.
应控制染时间。时间长，薄膜底不易脱去；时间太短，着不易区分，
或造成条带染不均匀，必要时可进行复染。
七、思考题
1
．电泳时，点样端置于电场的正还是负？为什么？
2
．电泳后，泳动在前面的是何种蛋白质？各谱带为何种成分？请分析原因。
3 .
电泳图谱清晰的关键是什么？如何正确操作？
实验四 维生素 C 的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法 ）
一、实验目的
1.
学用
2,6
—二氯酚靛酚滴定法测定维生素
C
含量的原理及方法。
2.
掌握滴定法的一般过程及操作技术
二、实验原理
维生素
c
又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料
2,6-
二氯酚靛酚钠盐，本身
则氧化成脱氢抗坏血酸。
2,6-
二氯酚靛酚在碱性溶液中呈深蓝
,
被还原后变为
无，在酸性介质中呈浅红。因此可用蓝的碱性染料
2,6-
二氯酚靛酚标准
溶液滴定样品，对含维生素
C
的酸性浸出液进行氧化还原滴定
,
染料被还原为无
,
当到达滴定终点时
,
多余的染料在酸性介质中则表现为浅红
,
由染料用量计
算样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验试剂及器材
1. 实验试剂:
（
1
）
0.1% 2,6-
二氯酚靛酚
（
2
）
1%
、
2%
草酸溶液
（
3
）标准抗坏血酸溶液（
0.2mgVc/ml
）
（
4
）样液
2. 实验器材:
碱式滴定管、铁架台、蝴蝶夹、锥形瓶、微量移液器、枪头等
四、实验步骤
1.
标准滴定:
取标准
Vc 1.0ml
（含
0.2
毫克抗坏血酸）与空锥形瓶中，加入
9.0ml 1%
草酸，
用
2,6-
二氯酚靛酚滴定至淡红，并保持
15
秒不变即为终点。用所用染料计算
1ml
染料相当于多少毫克抗坏血酸。滴定开始时，染料要迅速加入，直到红不
立即消失，才一滴一滴加入，并不断摇动锥形瓶，直至淡红
15
秒不退。滴定
过程一般不超过
2
分钟。
2.
样液滴定:
取两份样液各
10ml
，分别放入
100ml
锥形瓶中，滴法同前，但不加草酸
计算样品抗坏血酸含量。
五、实验结果与分析
1.
根据标准
V
C
的量及滴定所需的染料，计算出每毫升染料可以滴定到少
V
C
2.
根据待测样液滴定所需的染料体积计算样液中
V
C
的含量
试分析测定的结果与实际是否相符，造成结果误差的原因有哪些？
六、实验注意事项
1.
注意滴定管的正确使用
首先加标准溶液到
0
刻度以上
2-3ml
处，排净尖嘴内的气泡。然后调整液面
高度到
0
刻度或
0
刻度以下。
2.
滴液时先快后慢，接近所取体积时逐点滴入。
3.
读取刻度是目光平视刻度线，刻度线对准液体凹面。
七、思考题
1.
实验过程中，要测得准确的还原型维生素
C
值，实验过程中应注意哪些操作
步骤，为什么？
2.
在测定过程中，样品的草酸提取液为什么不能暴露在光下？
3.
试简述维生素
C
的生理意义。
实验五 从动物组织中提取脱氧核糖核酸
一、实验目的
1.
学和掌握用浓盐法从动物组织中提取
DNA
的原理和技术
2.
了解分离提取
DNA
的一般原理。
二、实验原理
1.
动物细胞中的核糖核酸（
RNA
）与脱氧核糖核酸（
DNA
）与蛋白结合形成核
蛋白。分别表示为
RNP
和
DNP
。
RNP
和
DNP
在不同浓度氯化钠溶液中的溶
解度有显著差别。在
0.14M NaCl
中，
DNP
溶解度低，
RNP
溶解度高；在
1-2M
NaCl
溶液中，
DNP
溶解度高，
RNP
溶解度低。故调整
NaCl
溶液的浓度可将
RNP
和
DNP
从样本中逐步分离出来。
2.
加变性剂
SDS
可使蛋白质变性，与
DNA
分离。 核酸本身带负电荷，结合正
电荷的蛋白质，用于核酸提取的去垢剂，一般都是阴离子去垢剂。去垢剂的作用:
1
）溶解膜蛋白及脂肪，使细胞膜破裂；
2
）溶解核糖体上面的蛋白质，使其解聚，将核酸释放出来；
3
）对
RNase
、
DNase
有一定的抑制作用。如:
SDS
、脱氧胆酸钠、
4-
氨基水杨
酸钠、萘
-1.5-
二磺酸钠、三异丙基萘磺酸钠
3.
用有机溶剂沉淀，去除蛋白。本实验所用的有机溶剂为:氯仿
-
异丙醇混合液
（
24:1
）； 氯仿:使蛋白变性并加速有机相和水相的分层，增加核酸得率，同
时去除脂类。 异丙醇:减少泡沫，也能促使有机相和水相分离。
4. DNA
不溶于乙醇等有机溶剂，因此可用乙醇沉淀法来纯化和浓缩
DNA
。
DNA
分离提取的原则
1
）
DNA
结构的完整
2
）排除其他分子的污染
a.
核酸样品中不应存在对其有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子
b.
将其他生物大分子如蛋白、脂类分子的污染应降到
c.
排除
RNA
的污染
三、实验试剂及器材
1.
试剂:
1
） 新鲜猪肝
2
）
0.14M NaCl-0.15M EDTA Na2
溶液
3
）
25% SDS
4
）
5M NaCl
5
）
氯仿
-
异丙醇混合液
6
）
95%
乙醇
2.
器材:
离心机、恒温水浴箱、托盘天平、烧杯、玻棒、微量移液器等
四、实验步骤
1.
将猪肝用
0.14M Nacl-0.15M EDTANa2
溶液洗去血液，剪碎，置匀浆机中研
磨成糊状。
2.
取
50 mL
猪肝糜离心
6min
，
3500rpm
。（离心机已经调整到位，直接操作即可）
3.
弃去上清液，剩余沉淀用
20mL 0.14M Nacl-0.15M EDTA
溶液洗涤，离心
6min
。
重复以上操作一遍。
目的是尽量除去
RNP
。所得沉淀为
DNP
粗品。
4.
向上述沉淀中加入
0.14M Nacl-0.15M EDTA
溶液，使总体积为
44mL
，然后
滴加
25% SDS
溶液约
3mL
（此步骤由老师把关），边加边搅拌。加毕，于
60℃
水浴保温
10min
，其间不停搅拌，取出冷却至室温。
目的是使核酸与蛋白质分
离。
5.
加入
5M Nacl
溶液
10mL
，此时
Nacl
的浓度正好为
1M
，
DNA
的溶解度是水
中的两倍，搅拌
10min
，加入约一倍体积的氯仿
-
异丙醇（
40ml
）混合液，
充分混匀，离心
6min
，
3500rpm
。
6.
取出离心管，内容物分为三层，上层为
DNA
溶液，中间是变性蛋白质凝胶，
底部为有机相。小心取出上清液，置于烧杯中。
有机相回收！
7.
由老师加入
1.5
倍体积
95%
冷乙醇，边加边轻挑，可观察到
DNA
丝状物缠
绕在玻棒上。
由老师打分。
五、实验注意事项（补充一下）
1.
各操作步骤要轻柔
,
尽量减少
DNA
的人为降解。
2.
取各上清时
,
不应贪多
,
以防非核酸类成分干扰。
3.
异丙醇、乙醇等要预冷
,
以减少
DNA
的降解
,
促进
DNA
与蛋白等的分相及
DNA
沉淀。
4.
提取
DNA
过程中所用到的试剂和器材要进行无核酸酶化处理。
5.
试剂均用高压灭菌双蒸水配制。
实验六 核酸浓度测定——紫外吸收法
一、实验目的
1.
了解
Denovix
的基本原理并掌握其使用方法；
2.
掌握使用紫外分光光度法测定核酸含量的原理和方法。
二、实验原理
核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键，具有紫外吸收。
RNA
和
DNA
的
紫外吸收峰为
260nm
。一般在
260 nm
波长下，每毫升含
1mg DNA
溶液的光吸
收值约为
0.020
，每毫升含
1mgRNA
溶液的光吸收值为
0.022
。故测定待测浓度
RNA
或
DNA
溶液
260nm
的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。
蛋白质由于含有芳香氨基酸，因此也能吸收紫外光。通常蛋白质的吸收高峰
在
280nm
处，在
260nm
处的吸收值仅为核酸的十分之一或更低，故核酸样品中
蛋白质含量较低时对核酸的紫外测定影响不大。
纯净的
RNA
溶液，其
A260/A280
≥
2
；纯净的
DNA
溶液，其
A260/A280
≥
1.8
。如果小于
1.8
或
2.0
，表示存在蛋白质或酚类物质的影响。
A230
表示表示样
品中存在一些污染物，如碳水化合物、多肽、苯酚等。
Denovix
核酸蛋白测定仪采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列
分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过待测试的样品后，部分被吸收，
计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
dsDNA
的消光系数为
50
，核酸的浓度
ng/ul=A260
╳
50
RNA
的消光系数为
40
ssDNA
的消光系数为
33
三、实验试剂及器材
（
1）
Denovix
核酸蛋白分析仪（微量）
（
2）微量移液枪、微量枪头、1.5ml 离心管、
ddH2O
、吸水纸、擦镜纸
四、实验步骤
1.
清洗样品台:
2μl
灭菌的
ddH2O
点在样品台上，放下悬臂，
10s
后抬起悬臂，
用干净的无尘纸擦掉即可。
2.
使用溶解样品的缓冲液
1-1.5μl
点在样品台上，放下悬臂，点击
Blank
，测完
之后擦掉即可。
3.
混匀样品后，
1-1.5μl
点在样品台上，放下悬臂，点击
Measure
，出现下图的
界面。
4.
测量完样品后请及时擦掉样品。
五、实验结果
记录核酸的浓度，并分析纯度
六、实验注意事项
1.
首次使用，请先清洁样品台。抬起悬臂，滴
1-2ul
灭菌蒸馏水于样品台上，
放下悬臂使上下界面接触，再用无尘纸或擦镜纸擦去上下表面液滴。
2.
打开测量应用，在样品台上滴加
1ul
溶解样品的
buffer
，注意观察液滴中
不能有气泡。
3.
测量结束后，立即擦掉样品，样品干在样品台上，造成污染。
实验七 血清谷丙转氨酶的测定（King 氏法）
一、实验目的
1.
掌握血清谷丙转氨酶活力测定的原理和方法；
2.
进一步熟练标准曲线的制作和分光光度计的使用。
二、实验原理
1.
生物机体内转氨基作用是
α
-
氨基酸的氨基通过酶促作用转移到
α
－酮酸的
酮基位置上，生产相应的酮酸和氨基酸的化学反应。催化这反应的酶称为转
氨酶，其辅酶为磷酸吡哆醛。转氨酶广泛存在于机体的各种组织中，在肝、
心、肾等组织中的谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性较高。在正常的新陈代谢过
程中，血清内维持一定水平的转氨酶活性（即正常值）。
当肝、心、肾等组织发生病变时，由于组织细胞肿胀，坏死导致大量的酶释
放至血流中，从而引起血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性显著升高。因此测定
这些酶的活性对某些疾病的临场诊断具有重要的参考价值。
2.
血清中的谷
-
丙转氨酶（
ALT
），在
37
℃、
pH7.4
的条件下，可催化基质（底
物）液中的丙氨酸与
α
-
酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸。
3.
生成的丙酮酸可与起终止和显作用的
2,4
二硝基苯肼发生加成反应，生成
丙酮酸
-2,4-
二硝基苯腙，进而在碱性环境中生成红棕的苯腙硝醌化合物，
其颜的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量，亦即与
ALT
活性的高低成正
比关系。据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过标准曲线
查出血清中
ALT
的活性。
King
氏法谷丙转氨酶活性单位:每毫升血清在
37℃
与
pH7.4
的基质液
作用
60min
，生成
1μmol
丙酮酸为一个单位。临床检验取血清量为
0.1mL
，
报告数据以
100mL
血清计算，因此实际测得结果乘
1000
即可。例如
0.1mL
丙酮酸标准液中丙酮酸含量为
0.2μmol
，即相当
GPT200U/100mL
。
三、实验试剂及器材
1.
试剂:
1
）
pH7.4
磷酸缓冲溶液
2
）
L-
丙氨酸和
α
-
酮戊二酸混合液
3
）丙酮酸标准液
4
）
2
，
4 -
二硝基苯肼溶液
5
）
0.4mol/L NaOH
溶液
2.
器材:
722
分光光度计、微量移液器、枪头、恒温水浴锅、试管、试管架等
四、实验步骤
1.
取
4
支干燥试管，按下表加入试剂:
管号
血 清
（
mL
）
基质液
（
mL
）
标准丙酮酸
（
mL
）
磷酸缓冲液
（
mL
）
1
（空白管）
0.6
2
（对照管）
0.1
0.5
3
（标准管）
0.5
0.1
4
（样品管）
0.1
0.5
2.
加毕摇匀，置
37
℃水浴中保温
30
分钟，取出冷却至室温。各加
0.5mL 2,4 -
二硝基苯肼溶液，准确作用
5
分钟。各加
0.4mol/L NaOH
溶液
5mL
，摇匀，
10
分钟后比。以
1
号管调零，测
2
、
3
、
4
号管
A530
，按下式计算丙酮酸生
成量（注意单位）:
五、实验注意事项
1.
为溶血及其他因素对酶活性测定的影响，实验过程所用的一切器皿（注
射器、试管等）应清洗干净，干燥后方能使用。
2.
为操作结果，测定酶活性时应恒定
pH
，保温时间，选用固定的比
计，比杯以减少误差。
3.
吸量准确，严格控制反应时间和温度。
实验八 基于口腔拭子 PCR 基因组 DNA 扩增实验
一、 实验目的
1.
了解
PCR
基因扩增的一般原理
2.
掌握
PCR
基因扩增操作技术
二、 实验原理
PCR
（
Polymerase Chain Reaction
）是聚合酶链式反应的简称，指在引物指导下由
酶催化的对特定模板
(
克隆或基因组
DNA)
的扩增反应，是模拟体内
DNA
复制
过程，在体外特异性扩增
DNA
片段的一种技术，在分子生物学中有广泛的应
用，包括用于
DNA
作图、
DNA
测序、分子系统遗传学等。
1. PCR
扩增的基本特征及要素如下:
（
1
）
PCR
技术的基本原理类似于
DNA
的天然复制过程
（
2
）是以单链
DNA
为模板，
4
种
dNTP
为底物，在模板
3'
未端有引
物存在的情况下，用酶进行互补链的延伸，多次反复的循环能使微量
的模板
DNA
得到大程度的扩增。
（
3
）
PCR
反应需要在一定的条件下才能完成，只有这些条件协调作
用时才能达到很好的效果
: (1)
缓冲液
; (2)
脱氧三磷酸核苷
(dNTP) ;(3)
引物
;(4)
模板
; (5) DNA
聚合酶。
2.
根据
DNA
的半保留复制，以及
DNA
分子在体外不同的温度下双
链和单链可相互转变的机制，在体外人为地控制反应系统的温度，使
双链
DNA
变性
(denature)
、退火
(annealing)
、延伸
(extension),
实现
DNA
的扩增。
（
1
）变性:模板
DNA
通过加热至
95
℃左右，使
DNA
双螺旋的氢键断裂，
形成单链
DNA,
作为反应的模板；
（
2
）退火:模板
DNA
经加热变性成单链后，温度降至引物的
Tm
值
左右或以下
(
比
Tm
低
5
°
C
，通常为
55~65
°
C)
，引物与模板
DNA
单链的互补序列配对结合；
（
3
）延伸:
DNA
模板
-
引物结合物在
DNA
聚合酶
(
一种耐热的
DNA
聚合酶
)
的作用下，于
70~74
℃下，以引物
3'
端为起始点按
5'
→
3'
方向
使
DNA
新链延伸。
三、试验试剂及器材
1.
仪器:
（
1
）
PCR
仪
（
2
）移液枪、涡旋仪、离心机
2.
样品及试剂:
（
1
）样品:口腔拭子
（
2
）样本稀释液
（
3
）亚甲基四氢叶酸还原酶（
MTHFR
）
C677T
试剂盒
四、实验步骤
1.
口腔拭子样本采集
（
1
）取样前
30
分钟，不要吃东西，吸烟，饮酒等。准备一杯清水，
饮入约
50ml
清水充分洗漱口腔约
10
秒，吐掉；
（
2
）重复上述步骤
2-3
次。取样推荐漱口后半个小时 。
（
3
）撕开口腔拭子外包装，小心取出口腔拭子（注意:整个取样过
程中手不能接触拭子部分）；
（
4
）用拭子刮拭脸颊内部
20-30
次，尽量避免接触牙齿跟舌头；
（
5
）将拭子伸入采样管，根据不同型号的拭子采用推入或折断采样头；
（
6
）旋转采样管，采样完成。
2.
样品的处理
（
1
）取拭子样本涡旋混匀
(30s
左右
)
，再以
1
:
2
吸取拭子样液与样
本稀释液涡旋混匀，反应
2
分钟后，作为模板进行
PCR
实验。
（
2
）
PCR
体系准备:
每人份需做两个反应，取两个
0.2ml PCR
管，在
PCR
管盖上标记
M
、
WT
；在标有
M
的管中加入
44μl M
扩增液，在标有
WT
的管中加入
44μl
WT
扩增液；分别向以上的
M
和
WT
管中个加入
1μl
反应液，盖紧管盖，涡旋混匀，离心待用；在标有
M
和
WT
的管中分别加入
5μl
待测样本
(
已用样本
稀释液处理过
)
，盖紧管盖，涡旋混匀，瞬时离心。
3. PCR
扩增
将
PCR
管放入
PCR
仪中，按如下程序扩增:
50
℃
2 min
；
95
℃
3min30sec
；
94
℃
5sec
、
60
℃
10sec
、
65
℃
30sec
（
31Cycles
）；
65
℃
10min
；
4
℃
Hold
。
取出
PCR
产物，
2~8
℃保存。
五、结果分析
1.
从密封袋中取出检测卡，将待测样本
M
与
WT
管中的
PCR
产物（用
手动或者自动化加样平台）滴加在检测卡对应的样品垫处，待
2~5 min
对结果
进行判读，
20min
后结果不。
2.
将待测样本
M
与
WT
管中的
PCR
产物分别滴加在检测卡对应的样品垫
上，根据在检测线（
T
线）是否出现条带判读
C677T
位点的基因型。若
M
管
产物在试纸条上
T
线处不出现条带而
WT
管产物出现条带，则为野生型
（
677CC
型）；反之则为纯合突变型（
677TT
型），若两管产物均在试纸条
T
线
处出现条带则判读为杂合突变型（
677CT
型）；无效判定:质控线（
C
线）不
出现条带，可能为操作不正确或试纸条已变质损坏。
六、注意事项
实验室应该遵循
PCR
实验规范的要求分区操作，各区物品均为，不得
交叉使用，加模板和引物的移液器不能混用，每次加样后均需更换吸头。
1
．隔离不同操作区
;
2
．分装试剂
;
3
．严格实验操作
;
4
．严格按无菌操作的原则进行
PCR
操作等。
七、思考题
1.
循环次数是否越多越好
?
为何？
2.
如何根据实验结果优化
PCR
体系？
下学期实验:
实验一 核酸浓度测定——定磷法
一、实验目的
1.
掌握定磷法测定核酸含量的原理和方法
2.
熟练掌握分光光度计的使用方法
二、实验原理
1.
核酸分子中含有一定比例的有机磷，一般为
9.2%
左右
(RNA
含磷量约
9.0%
，
DNA
含磷量约为
9.2%)
，若测得某一核酸样品中有机磷的含量，即可推算其
核酸的含量。
2.
用强酸使核酸分子中的有机磷消化成无机磷
3.
酸性环境中，无机磷再与钼酸铵结合成磷钼酸铵。
PO
4 3-
+ 3NH
4 +
+ 12MoO
4 2-
+ 24H
+
(NH
4
)
3
PO
4
·
12MoO
3
·
6H
2
O
↓
(
黄
)+6H
2
O
4.
当有还原剂存在时，
Mo
6+
被还原成
Mo
4+
，此
4
价钼再与试剂中的其它
MoO
4 2
－
结合成
Mo(MoO
4
)
2
或
Mo
3
O
8
呈兰，称为钼兰。
钼兰在一定浓度范围内
(
无
机磷含量在
1
—
25
μ
g),
兰的深浅和磷酸的含量成正比
,
可用比法测定其
光吸收值。
(NH
4
)
3
PO
4
·
12MoO
3
·
6H
2
O +
还原剂（抗坏血酸）
钼兰
Mo(MoO
4
)
2
或
Mo
2
O
8
三、实验试剂及器材
1.
试剂:
1
） 硫酸
2
）标准磷溶液（
20
微克磷
/
毫升）、
3
）定磷试剂（在使用前将上述试剂按以下比例混合
,
蒸馏水
:17% H
2
SO
4
:
2.5%
钼酸铵
: 10%
抗坏血酸
= 2
:
1
:
1
:
1
（
V/V
））
4
）样液
2.
器材:
通风橱、消化仪、容量瓶、移液器、试管、
722
分光光度计等
四、实验步骤
1.
磷标准曲线的绘制:取
6
只试管，按下表加入试剂
管号
标准磷溶液
(mL)
去离子水
(mL)
定磷试剂
(mL)
1
0
3
3
2
0.2
2.8
3
3
0.4
2.6
3
4
0.6
2.4
3
5
0.8
2.2
3
6
1
2
3
7
总磷
3mL
0
3
8
无机磷
3mL
0
3
加毕摇匀，于
45℃
水浴中保温
10
分钟（注意保温时间相同），冷却，测
A660
，
以磷含量为横坐标，
A660
为纵坐标作图。
2.
总磷的测定:
取样液
1.0 mL
于克氏烧瓶中，加入
2.5mL 27% H2SO4 ,
烧瓶口放一小漏斗，
于通风橱中加热消化，浓烟散尽溶液基本无透明即表示消化完成。冷却，将消
化液移至
100mL
容量瓶中，用少量去离子水冲洗烧瓶两次，洗涤液一并倒入容
量瓶，定容，摇匀后取
3.0mL
置于
7
号试管中，加入定磷试剂
3.0mL
，摇匀，
45℃
水浴保温
10
分钟，测
A660
。
3.
无机磷的测定:
取样液
1.0mL
于
100mL
容量瓶中，加去离子水至刻度，摇匀后取
3.0mL
置
于
8
号试管中，加入
3mL
定磷试剂，摇匀，
45℃
水浴保温
10
分钟，测
A660
。
4.
计算:
有机磷
=
总磷
-
无机磷
由标准曲线查得有机磷微克数（
X
）
,
按下式计算样品中核酸百分含量。
样品重量（
2000
微克）
五、实验注意事项
1.
消化溶液定容后务必上下颠倒混匀后再取样。
2. 1-8
号管
同时
加入定磷试剂后再放入
45
度水浴。
3.
分光光度计的使用:不用的时候要开着盖，注意比皿毛面。
顺序为
1-4
；
1 5-7
；
1 8
。个不要动，用于调零。
4.
标准曲线的绘制
:
得到
1-8
号管的吸光度后，写在实验报告表格的右侧。进
里面的电脑，用
excel
拟合曲线，得到
R
方值，写在大家的实验报告纸上。要
求
R
方大于
0.995
，回去写实验报告时需要用坐标纸。
5.
废液盆里
只能
倒
1-8
号管中的溶液。枪头、擦镜纸扔在一次性杯子里。
6.
试剂及器皿清洁，不含磷；研究生检查试管内水珠不挂壁才能走。
实验二 胍盐-
β
巯基乙醇法提取 RNA
一、实验目的
1.掌握胍盐/ß-巯基乙醇法提取 RNA 的原理和方法。
2.掌握链 cDNA 合成的原理和方法。
二、实验原理:
RNA 的提取方法:
1.异硫氰酸胍/苯酚法（TRIZOL）
2.胍盐/ß-巯基乙醇法
胍盐裂解样本，抑制 Rnase 的活性，
β
-巯基乙醇变性蛋白，离心柱上用 DNA
和蛋白酶消化基因组 DNA 和蛋白，然后漂洗纯化的方法。
3.介质吸附法
RNA 的鉴定分析
纯度: OD260/OD280 1.9—2.1 ,说明有部分降解荧光光谱
链 cDNA 的合成:
以 RNA 为模板，反转录为 cDNA，由逆转录酶催化，该酶合成 DNA 时需要引
物引导，常用引物是 oligo dT、随机引物或基因特异引物（GSP）维生素 B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，
对热稳定。维生素 B2 溶液在 430～440 nm 蓝光的照射下，发出绿荧光，荧
光峰在 535 nm。维生素 B2 在 pH=6～7 的溶液中荧光强度大，在 pH=11 的碱
性溶液中荧光消失，所以可以用荧光光度法测维生素 B2 的含量。
三、试剂与仪器:
总 RNA 提取试剂盒（天根 RNAprep Pure Cell/Bacteriit）；链 cDNA
合成试剂盒（Tara PrimeScript™ RT Master Mix）；无菌，无ＲＮＡ酶离心
管无菌，无 RNA 酶枪头低温离心机等
四、实验操作:
1.提取总 RNA
1） 裂解细胞:确定细胞数量，吸除细胞培养基上清，加入 PBS 后吸除，加入
600ul 裂解液 RL（胍盐/ß-巯基乙醇）5min。
2） 将溶液转移至过滤柱 CS 上(过滤柱 CS 放在收集管中)，12,000 rpm 离
心 2 min，收集滤液。
3） 向滤液中加入 1 倍体积 70%乙醇，混匀，得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱
CR3 中， 12,000 rpm 离心 60 sec，倒掉收集管中的废液。
4） 向吸附柱 CR3 中加入 350
μ
l 去蛋白液 RW1，12,000 rpm 离心 60 sec，倒掉
收集管中的废液，将吸附柱 CR3 放回收集管中。
5） 向吸附柱 CR3 加入 80
μ
l 的 DNase I 工作液（10
μ
l DNase I 储存液
+70
μ
l RDD 溶液），室温放置 15 min。
6）向吸附柱 CR3 中加入 350
μ
l 去蛋白液 RW1，12,000 rpm 离心 60 sec，倒掉
收集管中的废液，将吸附柱 CR3 放回收集管中。
7）向吸附柱 CR3 中加入 500
μ
l 漂洗液 RW ，室温静置 2 min，12,000 rpm 离心
60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CR3 放回收集管中。再重复一次。
8）12,000 rpm 离心 2 min，倒掉废液。将吸附柱 CR3 置于室温放置 10 分钟，以
彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
9）将吸附柱 CR3 转入一个新的 RNase-Free 离心管中，加入 30-100
μ
l
RNase-Free ddH2O 室温放置 2 min，12,000 rpm 离心 2 min，得到 RNA 溶液。
10）RNA 鉴定分析（浓度，纯度）。2. 采用 TaRa PrimeScript RT Master Mix 进行 cDNA 链合成:
1）按下列组分配制 RT 反应液
5X PrimeScrip Mix 2
μ
l
Total RNA (50
μ
M) -- ul
RNase free H2O up to 10
μ
l
2）反转录反应条件如下
37℃ 15min （反转录反应）
85℃ 5sec （反转录酶失活反应）
五、实验注意事项
1. 严格控制外源性 RNA 酶的污染:外源性的 RNA 酶存在于操作人员的手汗、唾
液等，也可存在于灰尘中，造成器械、玻璃制品、塑料制品、电泳槽、研究人
员的手及各种试剂的污染。
2. 大限度地抑制内源性的 RNA 酶:而各种组织和细胞中则含有大量内源性的
RNA 酶。
3. 戴手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致 RNase 污染。
4. 使用无 RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
5. RNA 在裂解液 RL 中时不会被 RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不
含 RNase 的塑料和玻璃器皿。
6. 配制溶液应使用无 RNase 的水。
实验三 real-time PCR 测端粒酶 mRNA 表达
一、实验目的
1.掌握 RT-PCR 基因扩增的原理和过程
2.了解端粒酶的结构与功能
二、实验原理:
1. 实时定量 PCR 技术:
利用荧光信号的变化实时检测 PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，
通过 Ct 值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。
Ct 值的定义:PCR 扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数。
Xn = X0 × （
1＋En）Ct
lg Xt ＝lg X0 ＋ Ct lg（
1＋En）
Ct = -k lg X0 ＋ b
X0 :起始模板数量
En:扩增效率
Xt:荧光扩增信号达到阈值时扩增产物的量，在阈值设定以后，它是一个常数
Log 模板起始浓度与 Ct 值呈线性关系。
模板 DNA 量越多，荧光达到阈值的循环数越少，即 Ct 值越小。
2.常用荧光标记方法:
特异性荧光标记 TaqMan Probe
非特异性荧光标记 SYBR Green I:是一种结合于 dsDNA 双螺旋小沟区域
的具有绿激发波长的染料。
问题点:
SYBR Green I 与双链 DNA 进行结合后散发荧光，因此如果反应体系
中有非特异性扩增或引物二聚体的产生，也将同时被检测，从而可能导致检测
结果不准确。
关键点:
设计合适引物，非特异性扩增！
端粒酶:通过识别并结合富含胞嘧啶 C 的端粒末端，以自身 RNA 为模板， TER
催化，合成端粒的 DNA 重复序列，从而阻止随着 DNA 复制和细胞分裂所
造成的端粒的不断缩短， 进而稳定染体的长度，避免细胞因端粒丢失
所导致的凋亡。因此，端粒酶在细胞永生化和肿瘤发生中起着重要作用。
相对定量分析——2 -
∆ ∆
Ct 法
三、试剂与仪器:
1. LightCycler 480 SYBR Green I Master
2. LightCycler 8-Tube Strips (white)
3. 无菌，无ＲＮＡ酶离心管
4. 无菌，无ＲＮＡ酶枪头
四、实验操作:
1. 加样:试剂 体积
模板（稀释 5 倍） 2µl
Master mix，2×conc. 10µl
正向引物 1µl
反向引物 1µl
水，PCR 级别 6µl
总体积 20µl
2.PCR 程序设定:SYBR Green I 选择“SYBR Green I /HRM Dye”，反应总体积
20 ul。
3.设定每个程序中对应步骤的①温度(Target)、②信号获取模式(Acquisition
Mode)及 ③时间(Hold)。
4.设定完成后，放入样板，窗口右下方的“Start Run” 按钮将由灰变为蓝，
此时即可点击之，开始运行实验。
5.运行完毕后，点击界面左侧“Sample Editor”，对样本详细信息进行编辑。
6.点击界面左边的“Analysis”，进入分析界面，进行 Tm 分析 (Tm Calling) 分
析和相对定量 (Relative Quantification) 分析
五、结果分析
2 - △△Ct 法:假设目的基因和参照基因扩增效率都接近 100%
△Ct（第 n 组）＝16－17＝-1 △Ct（组）＝18－17.4=0.6
△△Ct=△Ct（第 n 组）－△Ct（组）＝-1－0.6＝－1.6
比率（癌细胞组/正常细胞组）=2－△△Ct＝2－（－1.6） = 3
所以 TERT 基因在癌细胞的表达水平是正常细胞的 3 倍。
要求实验报告分析出自己组对比组的结果
六、实验注意事项
1、能标准的使用微量移液器，使重复样本得到相同的结果。2、学会分析溶解曲线，得到循环 CT 值后学会如何分析结果。
实验四 蛋白分子量测定——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
一、实验目的
1.
学
SDS-PAGE
测定蛋白质分子量的基本原理
2.
掌握
SDS-PAGE
垂直板电泳的操作方法
二、实验原理
聚丙烯酰胺凝胶（
PAGE
）是由丙烯酰胺（
Acr
）和交联试剂
N,N
’
-
甲叉双丙
烯酰胺
(Bis)
在有引发剂（如过硫酸铵）和增速剂（如
N,N,N
’
,N
’
-
四甲基乙二胺，
TEMED
）的情况下聚合而成的。在一定浓度范围内，改变聚合体系中
Acr
和
Bis
的比例，可得到不同网眼大小的凝胶，由于凝胶的三维网状结构，对在凝胶中泳
动的不同分子量的质点有着选择和阻碍，因此具有分子筛效应，决定着聚丙烯酰
胺凝胶的有效分离笵围。
SDS-
聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进了十二烷基硫酸
钠（
sodium dodecyl sulfate
，简称
SDS
），
SDS
是一种阴离子去污剂，它能破坏
蛋白质分子之间以及与其他物质分子之间的非共价键，使蛋白质变性而改变原有
的空间构象。是在强还原剂，如巯基乙醇存在下，由于蛋白质分子内的二硫
键被还原剂打开，不易再氧化，这就了蛋白质分子与
SDS
充分结合，形成
带负电荷的
SDS-
蛋白质复合物。
带负电荷的蛋白质
-SDS
复合物由于结合了大量的
SDS
，使蛋白质丧失了原有的电荷状态，形成了仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除
了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异。
蛋白质
-SDS
复合物在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒。不同蛋
白质的
SDS
复合物的短轴长度都一样，约为
1.8nm
，而长轴则随蛋白质的分子
量成正比变化。这样的蛋白质
-SDS
复合物在凝胶中的迁移率，受蛋白质原
有电荷和形状的影响，而只是椭圆棒的长度，也就是蛋白质分子量的函数。
lgMw = -bRm + K
Mw
:蛋白质的分子量；
Rm
:相对迁移率
b
: 斜率
;
K
:截距
当条件一定时，
b
，
K
均为常数，即此时
lgMw
与
Rm
的关系为线性关系，
如以
lgMw
对
mR
作图，应得到一条直线，如上图。
若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量的对数作图，可获得一条标
准曲线。未知蛋白质的相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲
线上求得分子量。
三、实验试剂及仪器
1.
实验试剂
（
1
）
30%
丙烯酰胺（
Acr
）:
Acr/
甲叉双丙烯酰胺
(Bis)=29:1
（
2
）
10%SDS
（十二烷基磺酸钠）
（
3
）
10%
过硫酸铵
(AP)
（
4
）
TEMED
（四甲基乙二胺）
（
5
）
2
×上样缓冲液:
10%SDS
（
4ml
）
+
巯基乙醇（
1ml
）
+0.2%
溴酚蓝（
2ml +
甘油
2ml +1M pH6.8Tris-HCl
（
1ml
）
（
6
） 浓缩胶缓冲液（
1M Tris-Cl
缓冲液
pH6.8
）
（
7
） 分离胶缓冲液（
1.5M Tris-Cl
缓冲液
pH8.8
）
（
8
） 电泳缓冲液
: (SDS 20g
，
Tris 60g,
甘氨酸
282.2g, pH8.3
）加蒸馏水使其溶
解后定容至
2L
。
（
9
） 固定液:乙醇
500ml
，冰乙酸
100ml
混匀，
（
10
） 染液:考马斯亮蓝
R250 1.25g
，甲醇
225ml
，冰乙酸
50ml
，蒸馏水定
溶至
1L
。
（
11
） 脱液:冰乙酸
80ml
，乙醇
250ml
，加蒸馏水定容至
1L
。
2.
实验仪器
（
1
）垂直板电泳装置、电泳仪、制胶架
（
2
）移液枪、移液管
（
3
） 烧杯、培养皿
（
4
） 离心机
四、实验步骤
1.
装板
将垂直板型电泳装置内的板状凝胶模子取出，将玻璃片洗净、凉干、嵌入
凹槽中，形成一个“夹心”凝胶腔，
把装好的凝胶腔置于仰放的电上槽。将电泳槽、凝胶模子串成一体的垂
直板型电泳装置，垂直放置在水平台面上，灌注胶液。
2.
分离胶的配制（
12%
）
试剂
体积
H2O
3.35
（
ml
）
凝胶贮备液
2.5
（
ml
）
分离胶缓冲液
(pH8.8)
2.5
（
ml
）
10% SDS
0.1
（
ml
）
TEMED
5
（
ul
）
10%
过硫酸铵
50
（
ul
）
总体积
10
（
ml
）
3.
分离胶的灌注和聚合
用移液管将所配制的分离胶缓冲液沿着凝胶腔的长玻璃板的内面缓缓注
入，留出梳齿的齿高加
1cm
的空间以便灌注浓缩胶，然后加满蒸馏水。待分离胶凝固后，倒出蒸馏水，用滤纸吸干。
4.
浓缩胶的配制（
5%
）
试剂
体积
H2O
2.92
（
ml
）
凝胶贮备液
0.8
（
ml
）
分离胶缓冲液
(pH6.8)
1.25
（
ml
）
10% SDS
0.05
（
ml
）
TEMED
5
（
ul
）
10%
过硫酸铵
25
（
ul
）
总体积
5.05
（
ml
）
5.
浓缩胶的灌注和聚合
用移液管将所配制的浓缩胶缓冲液沿着凝胶腔的长玻璃板的内面缓缓
加入，将梳子插入胶液顶部，放置室温下待其聚合。
6.
样品的准备
在低分子量标准蛋白质和待测样品中分别加入适量还原缓冲液，放入沸水
中加热
3-5min
，取出冷至室温。
7.
加样
加入电缓冲液，小心拔出梳齿，用微量注射器向凝胶梳孔内加样。同时加
入
Marker
。
8.
电泳
上槽接负，下槽接正，打开直流电源，刚开始时，电压控制在不高于
100V
，
电流恒定在
10mA
；样品进入分离胶后，电压控制在不高于
140V
，电流恒定在
20mA
。待指示剂染料（溴酚蓝）迁移至凝胶下沿
1.0cm
处停止电泳。
9.
染和脱
电泳结束后，撬开玻璃板， 小心将胶取出，放入一大培养皿中。
染:加入染液，置于摇床上染
2h
。
脱:染完毕，倒出染液，加入脱液，置于摇床上脱，数小时更换
一次脱液，直至背景清晰，拍照。
10.
相对分子质量的计算
量出分离胶顶端距溴酚蓝间的距离
(cm)
以及各蛋白质样品区带中心与分离
胶顶端的距离
(cm)
，按下式计算相对迁移率
:
蛋白质样品距分离胶顶端迁移距离
(cm)
Rm =
溴酚蓝区带中心距分离胶顶端距离
(cm)
以标准蛋白质分子量的对数对相对迁移率作图，得到标准曲线，根据待测样
品相对迁移率，从标准曲线上计算出其分子量。
五
、
实验结果与分析
1.
根据凝胶结果，依据标准蛋白条带，判断各个蛋白质样品区带大概分子量。
2.
测量样品中各种蛋白质分子的相对迁移率
Rm
值，然后根据标准曲线计算
出各自分子量
3.
对实验操作及结果中不足之处进行分析。
六、实验注意事项
1
．丙烯酰胺和双丙烯酰胺具有很强的神经毒性并容易吸附于皮肤，操作时应免
避沾在脸、手等皮肤上。好戴一次性塑料手套操作。
2
．
10%
过硫酸铵现用现配，
4
℃冰箱贮存不超过
48
小时。
3
．灌制凝胶时，应避免产生汽泡，因为汽泡会影响电泳分离效果。
4.
蛋白加样量要合适。加样量太少，条带不清晰
;
加样量太多则泳道超载，条带
过宽而重叠，甚至覆盖至相邻泳道。
5
．刚灌注分离胶混合溶液后，应在分离胶液面上加
1-2cm
高的水层，以阻隔空
气。胶液面上加水层时要小心，缓缓叠加，以免冲坏凝胶的胶面。
七、思考题
1.
在不连续体系
SDS-PAGE
中，当分离胶加完后，需在其上加一层水，为什么
?
2.
电缓冲液中甘氨酸的作用
?
3.
在不连续体系
SDS-PAGE
中，分离胶与浓缩胶中均含有
TEMED
和
AP
，试述
其作用
?
4.
样品液为何在加样前需在沸水中加热几分钟
?
实验五 糖酵解中间产物的鉴定
一、实验目的
1
．掌握糖酵解中间产物的鉴定方法和原理。
2
．熟悉通过酶的抑制作用调节代谢途径。
3
．了解使中间产物堆积的方法在研究中间代谢中的意义。
二、 实验原理
在细胞质中，一分子葡萄糖通过一系列反应转化为两分子丙酮酸，并伴随着
ATP
生成的一系列反应是有机体获得化学能的原始的途径，也是原核生物和真
核生物糖类物质分解代谢的共同途径。利用碘乙酸对糖酵解过程中的
3-
磷酸甘油
醛脱氢酶特异地且不可逆地抑制作用，使
3-
磷酸甘油醛向前变化而积累。硫
酸肼作为稳定剂，用来保护
3-
磷酸苷油醛使其不自发分解。然后用
2,4-
二硝基苯
肼与
3-
磷酸甘油醛在碱性条件下形成
2,4-
二硝基苯肼
-
丙糖的棕复合物，其棕
程度与
3-
磷酸甘油醛含量成正比。从而明糖的分解代谢过程中，含有
3-
磷
酸甘油醛的中间产物。
三、实验试剂及器材
1.实验材料
新鲜酵母
2. 仪器:
离心管、移液枪；恒温水浴；离心机
3.试剂:
1
）
2,4-
二硝基苯肼
: 0.1 g 2,4-
二硝基苯肼溶于水
100 ml 2 mol/L
盐酸溶液中，储
于棕瓶中备用。
2
）
0.56 mol/L
硫酸肼溶液
:
称取
7.28 g
硫酸肼溶于
50 ml
水中，这时不会溶
解，当加入
NaOH
使
pH
值达
7.4
时则溶解。
3
）
5%
葡萄糖溶液。
4
）
10%
三氯乙酸溶液。
5
）
75 mol/L NaOH
溶液。
6
）
0.002 mol/L
碘乙酸溶液。
四、实验步骤
1．取小烧杯 3 支，编号，分别加入新鲜酵母 0.3 g，并按表 1 分别加入各试剂，
混匀。
2．将各杯混合物分别放入 37℃水浴中保温 1.0 小时，观察发酵管产生气泡的量
有何不同。
3．在 2 号和 3 号杯中按表 2 补加各试剂，摇匀后放 5-10 分钟
4. 将三支离心管中的上清液分别进行离心或者过滤，3000rpm, 3min。
5．取 3 支试管，分别加入上述滤液 0.5 ml，并按表 3 加入试剂和处理。
（取上清液 0.5 ml，加入 0.75 mol/L NaOH 0.5 ml，混匀后在 37℃水浴保温
10 分钟，然后分别向上述试管中加入 0.5 ml 2,4-二硝基苯肼，混匀后在 37℃
水浴保温 10 分钟，然后加入 0.75 mol/L NaOH 3.5 ml，观察实验结果。）
表 1 糖酵解中间产物的鉴定——发酵产生气泡观察
编号
5%
葡萄糖溶
液 （
ml
）
10%
三氯乙
酸（
ml
）
碘乙酸
（
ml
）
硫酸肼
（
ml
）
发泡量
1
10
（
ml
）
2
1
1
2
10
（
ml
）
0
1
1
3
10
（
ml
）
0
0
0
表 2
补加试剂
编号
10%
三氯乙酸
（
ml
）
碘乙酸
（
ml
）
硫酸肼
（
ml
）
发泡量
2
2
0
0
3
2
1
1
表 3 糖酵解中间产物的鉴定——二硝基苯肼反应
五、结果与分析
实验中哪一发酵管生成的气泡多?哪一管生成的颜深? 为什么?
描述观察到得实验现象并对实验结果加以分析。包括保温后的气泡量及的
显效果。
六、注意事项
1. 本实验虽为定性鉴定，但量取体积等人要求相对准确 ；
2. 注意试剂的添加顺序，编号不要弄混 ；
3. 每步反应前注意要充分混匀 。
七、思考与讨论
1. 实验鉴定的是哪种中间产物？
2. 实验中三氯乙酸、碘乙酸、硫酸肼三种试剂分别起什么作用？
3. 实验中的气泡是什么气体? 如何产生的？
编号
滤液
（ml）
0.75 mol/L
NaOH（ml）
摇
匀
，
室
温
放
置
5
分
钟
2，4-二硝基
苯肼 （ml）
摇
匀
，
室
温
放
置
5
分
钟
0.75 mol/L
NaOH（ml）
1
0.5
0.5
0.5
3.5
2
0.5
0.5
0.5
3.5
3
0.5
0.5
0.5
3.5
实验六 荧光分光光度法测定维生素 B2 的含量
一、实验目的
1．学荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素 B2 的分析原理；
2．掌握荧光分光光度计的使用方法；
3．了解分子荧光产生的机理.
二、 实验原理
维生素 B2 易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光
照易分解，对热稳定。 维生素 B2 在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为
光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测 VB2 的荧光时溶液要控制在
酸性范围内，且在避光条件下进行。
核黄素
(V
B2
)
光黄素
多维葡萄糖中含有维生素 B1、B2、C、D2 及葡萄糖，其中维生素 C 和葡萄糖
在水溶液中不发荧光，维生素 B1 本身无荧光，在碱性溶液中用铁氰化钾氧化后
才产生荧光，维生素 D2 用二氯乙酸处理后才有荧光，他们都不干扰维生素 B2
的测定。
维生素 B2 溶液在 430～440 nm 蓝光的照射下，发出绿荧光，其峰值波长为
545 nm。VB2 的荧光在 pH=6～7 时强，在 pH=11 时消失。
三、实验试剂及器材
1. 试剂:
100
μ
g/mlVB2 标准溶液（4%冰醋酸配制，置阴暗处保存）；冰乙酸；
多维葡萄糖粉试样
2. 器材:
岛津 RF5301PC 荧光分光光度计 ；微量移液器 ；容量瓶；石英比皿
四、实验步骤
1、打开氙灯，再打开主机，然后打开计算机启动工作站并初始化仪器。
2、仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目
设置适当的仪器参数:激发波长 Ex= 435 nm，发射波长 Em=545nm。
3、标准曲线测定，样品测定。
4、制作标准曲线，由标准曲线计算样品中维生素 B2 的含量。
5、 退出主程序，关闭计算机，先关主机，关氙灯。
五、结果与分析
1、 原始数据:标准曲线以及样本的荧光值。
测量 1-6 号标准曲线荧光值:VB2 的含量:0.0ug/ml、0.1ug/ml、0.2ug/ml、
0.3ug/ml、0.4ug/ml、0.5ug/ml。
测量 7 号样品荧光值
2、绘制出标准曲线:要求规范作图
铅笔作图；
横、纵坐标名称及单位；
日期、作者 、曲线名称；
曲线上体现出待测样品的荧光值及浓度值。
3、计算:样品中维生素 B2 的量。
要求: 写出公式、代入数据、写出结果。
实验八 pH 值和温度对酶促反应速度的影响
一、实验目的
1
．了解不同
pH
和温度对淀粉水解和唾液淀粉酶活性的影响。
2
．学会测定酶适
pH
和温度的方法。
二、实验原理
酶都是蛋白质，它的活性受环境 pH 的影响为显著。通常各种酶只有在一
定的 pH 范围内才表现它的活性，一种酶表现其高活性时 pH 的值，称为该酶的适 pH。本实验以唾液淀粉酶在不同的温度和 pH 下对淀粉的作用为例观察温度
和 pH 对酶活性的影响，淀粉的水解程度用其与碘液的呈反应加以区别。
三、实验试剂及器材
1. 试剂:
淀粉；碘；碘化钾；磷酸氢二钠；柠檬酸
2. 器材:
试管 吸量管 试管架 吸耳球
四、实验步骤
1. 溶液配制:
0.5%淀粉溶液（含 0.3%氯化钠）（新鲜配置），碘-碘化钾溶液（4 g 碘及碘化
钾 6 g 溶于 100 ml 蒸馏水中，于棕瓶中保存），0.2 mol/L 磷酸氢二钠溶液，
0.1 mol/L 柠檬酸溶液。
2. 样品收集
每人取一个干净的小烧杯，先用自来水漱口，将口腔内的食物残渣清除干净，
然后去蒸馏水约 20ml 含入口中，做咀嚼动作 3-4min,以分泌较多的唾液。将
口腔中的蒸馏水吐入干净的小烧杯中，此即为稀释的唾液淀粉酶液。
3. pH 对酶活性的影响
（
1）缓冲液的配制
编号
0.2mol/L
磷酸氢二纳（
ml
）
0.1mol/L
柠檬酸（
ml
）
缓冲液（
ml
）
1
5.15
4.85
5.0
2
6.16
3.39
6.2
3
7.72
2.28
6.8
4
9.08
0.92
7.4
5
9.72
0.28
8.0
（
2）底物的准备
6 支干燥的试管编号，依次加入不同 pH 的缓冲液各 3 ml，第 6 号试管与第
3 号相同。再向每个试管中添加 0.5%淀粉溶液 2 ml，摇匀。
（
3）酶促反应时间测定
向第 6 号试管加入稀释 100 倍的唾液 2 ml，摇匀后放入 37 ℃恒温水浴中保
温。每分钟取 1 滴混合液于离心管中或反应板上，加 1 滴碘化钾-碘溶液，呈橙
黄时取出试管，记录时间。
（
4）适 pH 测定
以 1 min 的间隔，依次向 1～5 号试管中加入稀释 200 倍的唾液 2 ml，摇匀，
同样以 1 min 间隔，将 5 只试管放入 37 ℃恒温水浴中保温，反应至所需时间。
依次取出，立即加入碘化钾-碘液 2 滴，充分摇匀。观察颜，可看出不同 pH
值时淀粉被水解的程度，不同 pH 值对唾液淀粉酶活性的影响，并确定其适 pH。
4. 温度对酶活性的影响
(1）取三支试管按下表操作:
试剂
管号
1
2
3
1%
淀粉溶液（
ml
）
1
1
1
放置条件
沸水浴
37
℃
冰浴
稀释唾液（滴）
4
4
4
分别按上述条件继续放置 10 min。
(2) 从三支试管中取出溶液 1 滴于离心管中或反应板上，加上 1 滴碘液，观察呈
现象，记录结果并解释其原因。
五、注意事项
1. 各管反应及操作应在同一水平；
2. 每管间隔相同的时间加样和终止反应以各管反应时间相同。
附件:生化实验.pdf
嘉兴长期回收废钼收购厂家
序号
类别
项目
实施依据
执行单位
1
农林业
限制类:
1、天然草场超载放牧
2、单线 5 万立方米/年以下的普通刨花板、高中密度纤维板生
产装置
3、单线 3 万立方米/年以下的木质刨花板生产装置
4、1000 吨/年以下的松香生产项目
5、兽用粉剂/散剂/预混剂生产线项目（持有新兽书的品种
和自动化密闭式率混合生产工艺除外）
6、转瓶培养生产方式的兽用细胞苗生产线项目（持有新兽
书的品种和采用新技术的除外）
7、松脂初加工项目
8、以林木为原料的一次性木制品与木制包装的生产和使
用以及木竹加工综合利用率偏低的木竹加工项目
9、1 万立方米/年以下的胶合板和细木工板生产线
10、珍稀植物和古树的根雕制造业
11、以野外资源为原料的珍贵濒危野生动植物加工
12、不符合生态养殖要求的湖泊、水库投饵网箱养殖
13、不利于生态环境保护的开荒性农业开发项目
14、缺水地区、国家生态脆弱区纸浆原料林基地建设
15、不符合国家规划及产业的粮食转化乙醇、食用植物油
料转化生物燃料项目
16、破坏林地、湿地、草地的开发项目
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
淘汰类:
1、湿法纤维板生产工艺2、滴水法松香生产工艺
3、农村传统老式炉灶炕
4、以木材、伐根为主要原料的土法活性炭生产
5、超过生态承载力的旅游活动和材等林产品采集
6、严重缺水地区建设灌溉型造纸原料林基地
7、种植前溴甲烷土壤熏蒸工艺
2
煤炭
限制类:
1、低于 30 万吨/年的煤矿（其中山西、内蒙古、陕西低于 120
万吨/年，宁夏低于 60 万吨/年），低于 90 万吨/年的煤与瓦斯突出矿井
2、采用非机械化开采工艺的煤矿项目
3、煤炭资源回收率达不到国家规定要求的煤矿项目
4、未按国家规定程序报批矿区总体规划的煤矿项目
5、井下回采工作面超过 2 个的煤矿项目
6、开采深度超过《煤矿规程》规定的煤矿、产品质量达
不到《商品煤质量管理暂行办法》要求的煤矿、开采技术和装备列
入《煤炭生产技术与装备导向（2014 年版）》限制目录且无法实施技术改造的煤矿
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
淘汰类:
1、与大型煤矿井田平面投影重叠的小煤矿
2、山西、内蒙古、陕西、宁夏 30 万吨/年以下（不含 30 万吨/年），河北、辽宁、吉林、黑龙江、江苏、安徽、山东、河南、甘肃、青海、新疆 15
万吨/年以下（不含 15 万吨/年），其他地区 9 万吨/年及以下（含 9 万吨/年）的煤矿；长期停产停建的 30 万吨/年以下（不含 30
万吨/年）“僵尸企业”煤矿；30 万吨/年以下（不含 30万吨/年）冲击地压、煤与瓦斯突出等灾害严重煤矿。属于满足林区、
边远山区居民生活用煤需要或承担供应任务且符合资源、、、技术、能耗等标准的煤矿，经省级人民政府批准，可以暂时保留或推迟退出
3、既无降硫措施又无达标排放用户的高硫煤炭（含硫高于 3%）
生产矿井，不能就地使用的高灰煤炭（灰分高于 40%）生产矿井以及高砷煤炭（动力用煤中砷含量超过 80μg/g，炼焦用煤中砷含量超过
35μg/g）生产煤矿
4、6AM、φM-2.5、PA-3 型煤用浮选机
5、PB2、PB3、PB4 型矿用隔爆高压开关
6、PG-27 型真空过滤机
7、X-1 型箱式压滤机
8、ZYZ、ZY3 型液压支架
9、不能实现洗煤废水闭路循环的选煤工艺、不能实现粉尘达
标排放的干法选煤设备
10、开采范围与自然保护区、风景名胜区、饮用水水源保护区
重叠的煤矿（根据法律法规及国家有关文件要求进行淘汰）
3
电力
限制类:
1、大电网覆盖范围内，发电煤耗高于 300 克标准煤/千瓦时的
湿冷发电机组，发电煤耗高于 305 克标准煤/千瓦时的空冷发电机组
2、无下泄生态流量的引水式水力发电
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
淘汰类:
1、不达标的单机容量 30 万千瓦级及以下的常规燃煤火电机组
（综合利用机组除外）、以发电为主的燃油锅炉及发电机组
4
石化化工
限制类:
1、新建 1000 万吨/年以下常减压、150 万吨/年以下催化裂化、
100 万吨/年以下连续重整（含芳烃抽提）、150 万吨/年以下加氢裂化生产装置
2、新建 80 万吨/年以下石脑油裂解制乙烯、13 万吨/年以下丙
烯腈、100 万吨/年以下精对苯二甲酸、20 万吨/年以下乙二醇、20万吨/年以下苯乙烯（干气制乙苯工艺除外）、10
万吨/年以下己内酰胺、乙烯法醋酸、30 万吨/年以下羰基合成法醋酸、天然气制甲醇（CO2 含量 20%以上的天然气除外），100
万吨/年以下煤制甲醇生产装置，丙酮氰醇法甲基丙烯酸甲酯、粮食法丙酮/丁醇、氯醇法环氧丙烷和皂化法环氧氯丙烷生产装置，300
吨/年以下皂素（含水解物）生产装置
3、新建 7 万吨/年以下聚丙烯、20 万吨/年以下聚乙烯、乙炔法
聚氯乙烯、起始规模小于 30 万吨/年的乙烯氧氯化法聚氯乙烯、10万吨/年以下聚苯乙烯、20 万吨/年以下丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物（ABS）、3
万吨/年以下普通合成胶乳-羧基丁苯胶（含丁苯胶乳）生产装置，新建、改扩建氯丁橡胶类、丁苯热塑性橡胶类、聚氨酯类和聚丙烯酸酯类中溶剂型通用胶粘剂生产装置
4、新建纯碱（井下循环制碱、天然碱除外）、烧碱（废盐综合
利用的离子膜烧碱装置除外）、30 万吨/年以下硫磺制酸（单项金属离子≤100ppb 的电子级硫酸除外）、20
万吨/年以下硫铁矿制酸、常压法及综合法硝酸、电石（以大型工艺设备进行等量替换的除外）、单线产能 5 万吨/年以下氢氧化钾生产装置
5、新建三聚磷酸钠、六偏磷酸钠、三氯化磷、五硫化二磷、磷酸氢钙、氯酸钠、少钙焙烧工艺重铬酸钠、电解二氧化锰、碳酸
钙、无水硫酸钠（盐业联产及副产除外）、碳酸钡、硫酸钡、氢氧化钡、氯化钡、硝酸钡、碳酸锶、白炭黑（气相法除外）、氯化胆碱生产装置
6、新建黄磷，起始规模小于 3 万吨/年、单线产能小于 1 万吨/ 年氰化钠（折 100%），单线产能 5
千吨/年以下碳酸锂、氢氧化锂，干法氟化铝及单线产能 2 万吨/年以下无水氟化铝或中低分子比冰晶石生产装置
7、新建以石油、天然气为原料的氮肥，采用固定层间歇气化
技术合成氨，磷铵生产装置，铜洗法氨合成原料气净化工艺
8、新建高毒、高残留以及对环境影响大的农原（包括氧
乐果、水胺硫磷、甲基异柳磷、甲拌磷、特丁磷、杀扑磷、溴甲烷、灭多威、涕灭威、克百威、敌鼠钠、敌、杀、杀鼠醚、溴敌隆、溴、肉毒素、杀虫双、灭线磷、磷化铝，有机氯类、有机锡类杀虫剂，福美类杀菌剂，复硝酚钠（钾）、氯磺隆、胺苯磺隆、甲磺隆等）生产装置
9、新建草甘膦、毒死蜱（水相法工艺除外）、三唑磷、百草枯、
百菌清、阿维菌素、吡虫啉、乙草胺（甲叉法工艺除外）、氯化苦生产装置
10、新建硫酸法钛白粉、铅铬黄、1 万吨/年以下氧化铁系颜料、
溶剂型涂料（鼓励类的涂料品种和生产工艺除外）、含异氰脲酸三缩水甘油酯（TGIC）的粉末涂料生产装置
11、新建染料、染料中间体、有机颜料、印染助剂生产装置（鼓
励类及采用鼓励类技术的除外）
12、新建氟化氢（HF，企业下游深加工产品配套自用、电子级
及湿法磷酸配套除外），新建初始规模小于 20 万吨/年、单套规模小于10 万吨/年的甲基氯硅烷单体生产装置，10 万吨/年以下（有机硅配套除外）和
10
万吨/年及以上、没有副产四氯化碳配套处置设施的甲烷氯化物生产装置，没有副产三氟甲烷配套处置设施的二氟一氯甲烷生产装置，可接受用途的全氟辛基磺酸及其盐类和全氟辛基磺酰氟（其余为淘汰类）、全氟辛酸（PFOA），六氟化硫（SF6，高纯级除外），特定豁免用途的六溴环十二烷（其余为淘汰类）生产装置
13、新建斜交轮胎和力车胎（含手推车胎）、锦纶帘线、3 万吨
/年以下钢丝帘线、再生胶（常压连续脱硫工艺除外）、橡胶塑解剂五氯硫酚、橡胶促进剂二硫化四甲基秋兰姆（TMTD）生产装置
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
淘汰类:
1、200 万吨/年及以下常减压装置（青海格尔木、新疆泽普装
置除外），采用明火高温加热方式生产油品的釜式蒸馏装置，废旧橡胶和塑料土法炼油工艺，焦油间歇法生产沥青，2.5
万吨/年及以下的单套粗（轻）苯精制装置，5 万吨/年及以下的单套煤焦油加工装置
2、10 万吨/年以下的硫铁矿制酸和硫磺制酸（边远地区除外），
平炉氧化法高锰酸钾，隔膜法烧碱生产装置（作为废盐综合利用的可以保留），平炉法和大锅蒸发法硫化碱生产工艺，芒硝法硅酸钠（泡花碱）生产工艺，间歇焦炭法二硫化碳工艺
3、单台产能 5000 吨/年以下和不符合准入条件的黄磷生产装置，有钙焙烧铬化合物生产装置，单线产能 3000
吨/年以下普通级硫酸钡、氢氧化钡、氯化钡、硝酸钡生产装置，产能 1 万吨/年以下氯酸钠生产装置，单台炉容量小于 12500
千伏安的电石炉及开放式电石炉，高汞催化剂（氯化汞含量
6.5%以上）和使用高汞催化剂的乙炔法聚氯乙烯生产装置，使用汞或汞化合物的甲醇钠、甲醇钾、乙醇钠、乙醇钾、聚氨酯、乙醛、烧碱、生物杀虫剂和部抗菌剂生产装置，氨钠法及氰熔体氰化钠生产工艺
4、单线产能 1 万吨/年以下三聚磷酸钠、0.5 万吨/年以下六偏
磷酸钠、0.5 万吨/年以下三氯化磷、3 万吨/年以下饲料磷酸氢钙、5000 吨/年以下工艺技术落后和污染严重的氢氟酸、5000
吨/年以下湿法氟化铝及敞开式结晶氟盐生产装置
5、单线产能 0.3 万吨/年以下氰化钠（100%氰化钠）、1 万吨/
年以下氢氧化钾、1.5 万吨/年以下普通级白炭黑、2 万吨/年以下普通级碳酸钙、10 万吨/年以下普通级无水硫酸钠（盐业联产及副产除外）、0.3
万吨/年以下碳酸锂和氢氧化锂、2 万吨/年以下普通级碳酸钡、1.5 万吨/年以下普通级碳酸锶生产装置
6、半水煤气氨水液相脱硫、天然气常压间歇转化工艺制合成
氨、一氧化碳常压变化及全中温变换（高温变换）工艺、没有配套硫磺回收装置的湿法脱硫工艺，没有配套建设吹风气余热回收、造气炉渣综合利用装置的固定层间歇式煤气化装置，没有配套工艺冷
凝液水解解析装置的尿素生产设施
7、钠法百草枯生产工艺，敌百虫碱法敌敌畏生产工艺，小包
装（1 公斤及以下）农产品手工包（灌）装工艺及设备，雷蒙机法生产农粉剂，以六氯苯为原料生产五氯酚（钠）装置
8、用火直接加热的涂料用树脂、四氯化碳溶剂法制取氯化橡
胶生产工艺，100
吨/年以下皂素（含水解物）生产装置，盐酸酸解法皂素生产工艺及污染物排放不能达标的皂素生产装置，铁粉还原法工艺（4,4-二氨基二苯乙烯-二磺酸[DSD
酸]、2-氨基-4-甲基-5-氯苯磺酸[CLT 酸]、1-氨基-8-萘酚-3,6-二磺酸[H 酸]三种产品暂缓执行）
9、50 万条/年及以下的斜交轮胎和以天然棉帘子布为骨架的轮
胎、1.5 万吨/年及以下的干法造粒炭黑（特种炭黑和半补强炭黑除外）、3 亿只/年以下的天然胶乳套，橡胶硫化促进剂 N-氧联二
（1,2-亚乙基）-2-苯并噻唑次磺酰胺（NOBS）和橡胶防老剂 D 生产装置
10、氯氟烃（CFCs）、含氢氯氟烃（HCFCs，作为自身下游化
工产品的原料且不对外销售的除外），用于清洗的 1,1,1-三氯乙烷（甲基氯仿），主产四氯化碳（CTC）、以四氯化碳（CTC）为加工助剂的产品，以
PFOA
为加工助剂的含氟聚合物生产工艺，含滴滴涕的涂料、采用滴滴涕为原料非封闭生产三氯杀螨醇生产装置（根据国家履行公约总体计划要求进行淘汰）
1、改性淀粉、改性纤维、多彩内墙（树脂以硝化纤维素为主，
溶剂以二甲苯为主的 O/W 型涂料）、氯乙烯-偏氯乙烯共聚乳液外墙、
焦油型聚氨酯防水、水性聚氯乙烯焦油防水、聚乙烯醇及其缩醛类
内外墙（106、107 涂料等）、聚醋酸乙烯乳液类（含乙烯/醋酸乙烯
酯共聚物乳液）外墙涂料
2、有害物质含量超标准的内墙、溶剂型木器、玩具、汽车、
外墙涂料，含双对氯苯基三氯乙烷、三丁基锡、全氟辛酸及其盐类、
全氟辛烷磺酸、红丹等有害物质的涂料
3、在还原条件下会裂解产生 24 种有害芳香胺的偶氮染料（非
纺织品用的领域暂缓）、九种致癌性染料（用于与人体不直接接触
的领域暂缓）
4、含苯类、苯酚、苯甲醛和二（三）氯甲烷的脱漆剂，立德
粉，聚氯乙烯建筑防水接缝材料（焦油型），107 胶，瘦肉精，多氯
5
信息产业
限制类:
1、激光视盘机生产线（VCD 系列整机产品）
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
6
钢铁
限制类:
1、钢铁联合企业未同步配套建设干熄焦、装煤、推焦除尘装
置的炼焦项目；独立焦化企业未同步配套建设装煤、推焦除尘装置
的炼焦项目
2、180 平方米以下烧结机（铁合金烧结机、铸造用生铁烧结机
除外）
3、有效容积 400 立方米以上 1200 立方米以下炼钢用生铁高炉；
1200 立方米及以上但达不到、能耗、等强制性标准的炼钢
用生铁高炉
4、公称容量 30 吨以上 100 吨以下炼钢转炉；公称容量 100 吨
及以上但达不到、能耗、等强制性标准的炼钢转炉
5、公称容量 30 吨以上 100 吨（合金钢 50 吨）以下电弧炉；
公称容量 100 吨（合金钢 50 吨）及以上但达不到、能耗、等强制性标准的电弧炉
6、1450 毫米以下热轧带钢（不含钢）项目
7、30 万吨/年及以下热镀锌板卷项目
8、20 万吨/年及以下彩涂层板卷项目
9、含铬质耐火材料
10、普通功率和高功率石墨电压型设备、焙烧设备和生产线
11、直径 600 毫米以下或 2 万吨/年以下的超高功率石墨电生
产线
12、8 万吨/年以下预焙阳（炭块）、2 万吨/年以下普通阴
炭块、4 万吨/年以下炭电生产线
13、单机 120 万吨/年以下的球团设备（铁合金、铸造用生铁球
团除外）
14、顶装焦炉炭化室高度<6.0米、捣固焦炉炭化室高度<5.5米，
100 万吨/年以下焦化项目；热回收焦炉捣固煤饼体积<35 立方米，
企业生产能力<100 万吨/年（铸造焦<60 万吨/年）焦化项目；半焦
炉单炉生产能力<10 万吨/年，企业生产能力<100 万吨/年焦化项目
15、3000 千伏安及以上，未采用热装热兑工艺的中低碳锰铁、
电炉金属锰和中低微碳铬铁精炼电炉
16、300 立方米以下锰铁高炉；300 立方米及以上，但焦比高
于 1320 千克/吨的锰铁高炉；规模小于 10 万吨/年的锰铁高炉企业
17、1.25 万千伏安以下的硅钙合金和硅钙钡铝合金矿热电炉；
1.25 万千伏安及以上，但硅钙合金电耗高于 11000 千瓦时/吨的矿热电炉
18、1.65 万千伏安以下硅铝合金矿热电炉；1.65 万千伏安及以
上，但硅铝合金电耗高于 9000 千瓦时/吨的矿热电炉
19、2×2.5 万千伏安以下普通铁合金矿热电炉（中西部具有独
立运行的小水电及矿产资源优势的国家确定的重点贫困地区，矿热
电炉容量<2×1.25 万千伏安）；2×2.5 万千伏安及以上，但变压器未
选用有载电动多级调压的三相或三个单相型设备，未实现工艺
操作机械化和控制自动化，硅铁电耗高于 8500 千瓦时/吨，工业硅
电耗高于 12000 千瓦时/吨，电炉锰铁电耗高于 2600 千瓦时/吨，硅
锰合金电耗高于 4200 千瓦时/吨，高碳铬铁电耗高于 3200 千瓦时/
吨，硅铬合金电耗高于 4800 千瓦时/吨的普通铁合金矿热电炉
20、间断浸出、间断送液的电解金属锰浸出工艺；10000 吨/年
以下电解金属锰单条生产线（一台变压器），电解金属锰生产总规
模为 30000 吨/年以下的企业
21、厂区内无配套炼钢工序的独立热轧生产线
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
淘汰类:
1、土法炼焦（含改良焦炉）；单炉产能 7.5 万吨/年以下或无煤
气、焦油回收利用和污水处理达不到焦化行业准入条件的半焦（兰炭）生产装置2、炭化室高度小于 4.3 米焦炉（3.8
米及以上捣固焦炉除外）；未配套干熄焦装置的钢铁企业焦炉
3、土烧结矿
4、热烧结矿
5、钢铁生产用环形烧结机、90 平方米以下烧结机、8 平方米
以下球团竖炉；铁合金生产用 24 平方米以下带式锰矿、铬矿烧结机
6、400 立方米及以下炼钢用生铁高炉（河北 2020 年底前淘汰
450 立方米及以下炼钢用生铁高炉），200 立方米及以下铁合金生产用高炉（其中锰铁高炉为 100 立方米及以下），200
立方米及以下铸造用生铁高炉（其中配套“短流程”铸造工艺的铸造用生铁高炉为100 立方米及以下）
7、用于熔化废钢的工频和中频感应炉（根据法律法规和国家
取缔“地条钢”有关要求淘汰）
8、30 吨及以下炼钢转炉（不含铁合金转炉）（河北 2020 年底
前淘汰 40 吨及以下炼钢转炉，其中生产质量合金钢的转炉除外）
9、30 吨及以下炼钢电弧炉（不含机械铸造，质量合金钢，
高温合金、精密合金等合金材料用电弧炉）
10、化铁炼钢
11、复二重线材轧机
12、横列式线材轧机
13、横列式棒材及型材轧机（不含生产高温合金的轧机）
14、叠轧薄板轧机
15、普钢初轧机及开坯用中型轧机
16、热轧窄带钢轧机
17、三辊劳特式中板轧机
18、直径 76 毫米以下热轧无缝管机组
19、三辊式型线材轧机（不含钢生产）
20、不达标的冶金炉窑
21、手工操作的土沥青焦油浸渍装置，矿石原料与固体原料混
烧、自然通风、手工操作的土竖窑，以煤直接为燃料、烟尘净化不能达标的倒焰窑
22、6300 千伏安及以下铁合金矿热电炉，3000 千伏安以下铁
合金半封闭直流电炉、铁合金精炼电炉（钨铁、钒铁等品种的电炉除外）
23、蒸汽加热混捏、倒焰式焙烧炉、艾奇逊交流石墨化炉、10000
千伏安及以下三相桥式整流艾奇逊直流石墨化炉及其并联机组
24、单机产能 1 万吨及以下的冷轧带肋钢筋生产装备（高延性
冷轧带肋钢筋生产装备除外）
25、生产预应力钢丝的单罐拉丝机生产装备
26、预应力钢材生产消除应力处理的铅淬火工艺
27、煅烧石灰土窑
28、每炉单产 5 吨以下的钛铁熔炼炉、用反射炉焙烧钼精矿的
钼铁生产线及用反射炉还原、煅烧红矾钠、铬酐生产金属铬的生产线
29、燃煤倒焰窑耐火材料及原料制品生产线
30、钢铁行业用一段式固定煤气发生炉项目（不含粉煤气化炉）
31、电解金属锰用 6000 千伏安及以下的整流变压器、有效容
积 170 立方米及以下的化合槽
32、企业生产能力＜40 万吨/年热回收焦炉；未同步配套建设
热能回收装置的焦炉
33、还原二氧化锰用反射炉（包括硫酸锰厂用反射炉、矿粉厂
用反射炉等）
34、电解金属锰一次压滤用除高压隔膜压滤机以外的板框、箱
式压滤机
35、有效容积 18 立方米及以下轻烧反射窑
36、有效容积 30 立方米及以下重烧镁砂竖窑1、热轧硅钢片
2、普通松弛级别的钢丝、钢绞线
3、热轧钢筋:牌号 HRB335、HPB235
4、使用工频或中频感应炉熔化废钢生产的钢坯（锭），及以其
为原料生产的钢材产品（根据国家法律法规和国家取缔“地条钢”有
关要求淘汰）
7
有金属
淘汰类:
1、采用马弗炉、马槽炉、横罐、小竖罐等进行焙烧、简易冷
凝设施进行收尘等落后方式炼锌或生产氧化锌工艺装备
2、采用铁锅和土灶、蒸馏罐、坩埚炉及简易冷凝收尘设施等
落后方式炼汞
3、采用土坑炉或坩埚炉焙烧、简易冷凝设施收尘等落后方式
炼制氧化砷或金属砷工艺装备
4、铝自焙电解槽及 160kA 以下预焙槽5、鼓风炉、电炉、反射炉炼铜工艺及设备
6、烟气制酸干法净化和热浓酸洗涤技术
7、采用地坑炉、坩埚炉、赫氏炉等落后方式炼锑
8、采用烧结锅、烧结盘、简易高炉等落后方式炼铅工艺及设
备
9、利用坩埚炉熔炼再生铝合金、再生铅的工艺及设备
10、铝用湿法氟化盐项目
11、1 万吨/年以下的再生铝、再生铅项目
12、再生有金属生产中采用直接燃煤的反射炉项目
13、铜线杆（黑杆）生产工艺
14、未配套制酸及尾气吸收系统的烧结机炼铅工艺
15、烧结-鼓风炉炼铅工艺
16、无烟气治理措施的再生铜焚烧工艺及设备
17、50 吨以下传统固定式反射炉再生铜生产工艺及设备
18、4 吨以下反射炉再生铝生产工艺及设备
19、离子型稀土矿堆浸和池浸工艺
20、独居石单一矿种开发项目
21、稀土氯化物电解制备金属工艺项目
22、湿法生产电解用氟化稀土生产工艺
23、20000 吨/年（REO）以下混合型稀土矿山开发项目；5000
吨（REO）/年以下的氟碳铈矿稀土矿山开发项目；500 吨（REO）
/年以下的离子型稀土矿山开发项目
24、2000 吨（REO）/年以下的稀土分离项目
25、1500 吨/年以下、电解槽电流小于 5000A、电流效率低于
85%的轻稀土金属冶炼项目
26、原生汞矿开采（2032 年 8 月 16 日）
1、铜线杆（黑杆）
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
限制类:
1、新建、扩建钨金属储量小于 1 万吨、年开采规模小于 30 万
吨矿石量的钨矿开采项目（现有钨矿山的深部和边部资源开采扩建
项目除外），钨、钼、锡、锑冶炼项目（符合国家等法律
法规要求的项目除外）以及氧化锑、铅锡焊料生产项目，稀土采选、
冶炼分离项目（符合稀土开采、冶炼分离总量控制要求的稀土
企业集团项目除外）2、单系列 10 万吨/年规模以下粗铜冶炼项目（再生铜项目及氧
化矿直接浸出项目除外）
3、电解铝项目（产能置换项目除外）
4、单系列 5 万吨/年规模以下铅冶炼项目（不新增产能的技改
和改造项目除外）
5、单系列 10 万吨/年规模以下锌冶炼项目（直接浸出除外）
6、镁冶炼项目（综合利用项目和工艺技术改造
项目除外）
7、10 万吨/年以下的独立铝用炭素项目
8、新建单系列生产能力 5 万吨/年及以下、改扩建单系列生产
能力 2 万吨/年及以下、以及资源利用、能源消耗、环境保护等
达不到行业准入条件要求的再生铅项目
9、新建、扩建原生汞矿开采项目
8
黄金
限制类:
1、日处理金精矿 200 吨（不含）以下的原料自供能力不足 50%
（不含）的独立氰化项目（生物氰化提金工艺除外）
2、日处理矿石 300 吨（不含）以下的无配套采矿系统的独立
黄金选矿厂项目
3、日处理金精矿 200 吨（不含）以下的无配套采矿系统的独
立黄金冶炼厂火法冶炼项目
4、1500 吨/日（不含）以下的无配套采矿系统的独立堆浸场项 目5、日处理岩金矿石 300 吨（不含）以下的露天采选项目、100
吨（不含）以下的地下采选项目
6、年处理砂金矿砂 30 万（不含）立方米以下的砂金开采项目
7、在林区、基本农田、河道中开采砂金项目
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
淘汰类:
1、混汞提金工艺
2、小氰化池浸工艺、土法冶炼工艺
3、无措施提取线路板中金、银、钯等贵重金属
4、日处理能力 50 吨（不含）以下采选项目
5、整体矿石汞齐化；露天焚烧汞合金或经过加工的汞合金；
在居民区焚烧汞合金；在没有首先去除汞的情况下，对添加了汞的
沉积物、矿石或尾矿石进行氰化物浸出
9
建材
限制类:
1、2000 吨/日（不含）以下新型干法水泥熟料生产线（特种水
泥生产线除外），60 万吨/年（不含）以下水泥粉磨站
2、150 万平方米/年及以下的建筑陶瓷（不包括建筑琉璃制品）
生产线
3、60 万件/年（不含）以下的隧道窑卫生陶瓷生产线
4、3000 万平方米/年（不含）以下的纸面石膏板生产线（西藏
除外）
5、中碱玻璃纤维池窑法拉丝生产线；单窑规模小于 8 万吨/年
（不含）的无碱玻璃纤维粗纱池窑拉丝生产线；中碱、无碱、耐碱
玻璃球窑生产线；中碱、无碱玻璃纤维代铂坩埚拉丝生产线
6、粘土空心砖生产线（陕西、青海、甘肃、新疆、西藏、宁
夏除外）
7、15 万平方米/年（不含）以下的石膏（空心）砌块生产线、
单班 5 万立方米/年（不含）以下的混凝土小型空心砌块以及单班
15 万平方米/年（不含）以下的混凝土铺地砖固定式生产线、5 万立
方米/年（不含）以下的人造轻集料（陶粒）生产线
8、15 万立方米/年（不含）以下的加气混凝土生产线9、6000 万标砖/年（不含）以下的烧结砖及烧结空心砌块生产
线
10、30000 吨/年以下岩（矿）棉制品生产线和 8000 吨/年以下
玻璃棉制品生产线
11、100 万米/年及以下预应力高强混凝土离心桩生产线
12、预应力钢筒混凝土管（简称 PCCP 管）生产线:PCCP-L
型:年设计生产能力≤50 千米，PCCP-E 型:年设计生产能力≤30
千米
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
淘汰类:1、干法中空窑（生产铝酸盐水泥等特种水泥除外），水泥机立
窑，立波尔窑、湿法窑
2、直径 3 米（不含）以下水泥粉磨设备（生产特种水泥除外）
3、无覆膜塑编水泥包装袋生产线
4、平拉工艺平板玻璃生产线（含格法）
5、100 万平方米/年（不含）以下的建筑陶瓷砖、20 万件/年（不
含）以下卫生陶瓷生产线
6、建筑卫生陶瓷（不包括建筑琉璃制品）土窑、倒焰窑、多
孔窑、煤烧明焰隧道窑、隔焰隧道窑、匣钵装卫生陶瓷隧道窑7、建筑陶瓷砖成型用的摩擦压砖机
8、玻璃纤维陶土坩埚拉丝生产工艺与装备
9、1000 万平方米/年（不含）以下的纸面石膏板生产线
10、500 万平方米/年（不含）以下的改性沥青类防水卷材生产
线；500 万平方米/年（不含）以下沥青复合胎柔性防水卷材生产线；
100 万卷/年（不含）以下沥青纸胎油毡生产线
11、石灰土立窑
12、砖瓦轮窑（2020 年 12 月 31 日）以及立窑、无顶轮窑、马
蹄窑等土窑
13、普通挤砖机
14、SJ1580-3000 双轴、单轴制砖搅拌机
15、SQP400500-700500 双辊破碎机
16、1000 型普通切条机
17、100 吨以下盘转式压砖机
18、手工制作墙板生产线
19、简易移动式砼砌块成型机、附着式振动成型台
20、单班 1 万立方米/年以下的混凝土砌块固定式成型机、单班
10 万平方米/年以下的混凝土铺地砖固定式成型机
21、人工浇筑、非机械成型的石膏（空心）砌块生产工艺
22、真空加压法和气炼一步法石英玻璃生产工艺装备
23、生产人造金刚石用 6×6 兆牛顿六面顶小型压机
24、手工切割加气混凝土生产线、非蒸压养护加气混凝土生产线
25、非烧结、非蒸压粉煤灰砖生产线
26、装饰石材矿山硐室爆破开采技术、吊索式大理石土拉锯、
移动式小型圆盘锯1、使用非耐碱玻纤或非低碱水泥生产的玻纤增强水泥（GRC）
空心条板
2、陶土坩埚拉丝玻璃纤维和制品及其增强塑料（玻璃钢）制 品 3、25A 空腹钢窗
4、S-2 型混凝土轨枕
5、一次冲洗大用水量 8 升以上的坐便器
6、角闪石石棉（即蓝石棉）
7、非机械生产的中空玻璃、双层双框各类门窗及单腔结构型
的塑料门窗
8、采用二次加热复合成型工艺生产的聚乙烯丙纶类复合防水
卷材、聚乙烯丙纶复合防水卷材（聚乙烯芯材厚度在 0.5mm 以下）；
棉涤玻纤（高碱）网格复合胎基材料、聚氯乙烯防水卷材（S 型）
9、石棉绒质离合器面片、合成火车闸瓦，石棉软木湿式离合
器面片
10
医
限制类:
1、新建、扩建古龙酸和维生素 C 原粉（包括用、食品用、
饲料用、化妆品用）生产装置，新建品、食品、饲料、化妆品等
用途的维生素 B1、维生素 B2、维生素 B12、维生素 E 原料生产装
置 2、新建青霉素工业盐、6-氨基青霉烷酸（6-APA）、化学法生
产 7-氨基头孢烷酸（7-ACA）、化学法生产 7-氨基-3-去乙酰氧基头
孢烷酸（7-ADCA）、青霉素 V、氨苄青霉素、羟氨苄青霉素、头孢
菌素 c 发酵、土霉素、四环素、氯霉素、安乃近、扑热息痛、林可
霉素、庆大霉素、双氢链霉素、丁胺卡那霉素、麦迪霉素、柱晶白
霉素、环丙氟哌酸、氟哌酸、氟嗪酸、利福平、咖啡因、柯柯豆碱
生产装置
3、新建紫杉醇（配套红豆杉种植除外）、植物提取法黄连素（配
套黄连种植除外）生产装置4、新建、改扩建用丁基橡胶塞、二步法生产输液用塑料瓶
生产装置
5、新建及改扩建原料含有尚未规模化种植或养殖的濒危动植
物材的产品生产装置
6、新建、改扩建充汞式玻璃体温计、血压计生产装置、银汞
齐齿科材料，新建 2 亿支/年以下一次性注射器、输血器、输液器生
产装置
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
淘汰类:
1、手工胶囊填充工艺
2、软木塞烫腊包装品工艺
3、不符合 GMP 要求的安瓿拉丝灌封机
4、塔式重蒸馏水器
5、无净化设施的热风干燥箱
6、环境、职业健康和不能达到国家标准的原料生产装
置 7、铁粉还原法对乙酰氨基酚（扑热息痛）、咖啡因装置
8、使用氯氟烃（CFCs）作为气雾剂、推进剂、抛射剂或分散
剂的医用品生产工艺（根据国家履行公约总体计划要求进行
淘汰）
1、铅锡软膏管、单层聚烯烃软膏管（肛肠、腔道给除外）
2、安瓿灌装注射用无菌粉末
3、用天然胶塞
4、非易折安瓿
5、输液用聚氯乙烯（PVC）软袋（不包括腹膜透析液、冲洗
液用）
11
机械
限制类:
1、2 臂及以下凿岩台车制造项目
2、装岩机（立爪装岩机除外）制造项目
3、3 立方米及以下小矿车制造项目
4、直径 2.5 米及以下绞车制造项目
5、直径 3.5 米及以下矿井提升机制造项目
6、40 平方米及以下筛分机制造项目
7、直径 700 毫米及以下旋流器制造项目
8、800 千瓦及以下采煤机制造项目
9、斗容 3.5 立方米及以下矿用挖掘机制造项目
10、矿用搅拌、浓缩、过滤设备（加压式除外）制造项目
11、仓栅车、栏板车、自卸车和普通厢式车等普通运输类
汽车和普通运输类挂车企业项目；三轮汽车、低速电动车
12、单缸柴油机制造项目
13、配套单缸柴油机的皮带传动小四轮拖拉机，配套单缸柴油机的手扶拖拉机，滑动齿轮换档、排放达不到要求的 50 马力以下
轮式拖拉机
14、30 万千瓦级及以下常规燃煤火力发电设备制造项目（综合
利用机组除外）
15、6 千伏及以上（陆上用）干法交联电力电缆制造项目
16、非数控金属切削机床制造项目
17、6300 千牛及以下普通机械压力机制造项目
18、非数控剪板机、折弯机、弯管机制造项目
19、普通高速钢钻头、铣刀、锯片、丝锥、板牙项目
20、棕刚玉、绿碳化硅、黑碳化硅等烧结块项目
21、直径 450 毫米以下且磨削速度 40 米/秒以下的各种结合剂
砂轮（钢轨打磨砂轮除外）
22、直径 400 毫米及以下人造金刚石切割锯片制造项目
23、P0 级、直径 60 毫米以下普通微小型轴承制造项目
24、220 千伏及以下电力变压器（非晶合金、卷铁芯等配
电变压器除外）
25、220 千伏及以下高、中、低压开关柜制造项目（使用
型中压气体的缘开关柜以及用于爆炸性环境的防爆型开关柜除
外）
26、酸性碳钢焊条制造项目
27、民用普通电度表制造项目
28、8.8 级以下普通低档标准紧固件制造项目29、一般用途固定往复活塞空气压缩机（驱动电动机功率 560
千瓦及以下、额定排气压力 1.25 兆帕及以下）制造项目
30、普通运输集装干箱项目
31、56 英寸及以下单级中开泵制造项目
32、通用类 10 兆帕及以下中低压碳钢阀门制造项目
33、5 吨/小时及以下短炉龄冲天炉
34、有合金六氯乙烷精炼、镁合金 SF6 保护
35、冲天炉熔化采用冶金焦
36、无旧砂再生的水玻璃砂造型制芯工艺
37、盐浴氮碳、硫氮碳共渗炉及盐
38、电子管高频感应加热设备
39、亚硝盐缓蚀、防腐剂
40、铸/锻造用燃油加热炉
41、锻造用燃煤加热炉
42、手动燃气锻造炉
43、蒸汽锤
44、弧焊变压器
45、含铅和含镉钎料
46、全断面掘进机整机组装项目
47、万吨级以上自由锻造液压机项目
48、使用淘汰类和限制类设备及工艺生产的铸件、锻件；不采
用自动化造型设备的粘土砂型铸造项目、水玻璃熔模精密铸造项目、规模小于 20 万吨/年的离心球墨铸铁管项目、规模小于 3 万吨/年的
离心灰铸铁管项目
49、动圈式和抽头式手工焊条弧焊机
50、Y 系列（IP44）三相异步电动机（机座号 80～355）及其
派生系列，Y2 系列（IP54）三相异步电动机（机座号 63～355）
51、背负式手动压缩式喷雾器
52、背负式机动喷雾喷粉机
53、手动插秧机
54、青铜制品的茶叶加工机械
55、双盘摩擦压力机
56、含铅粉末冶金件
57、出口船舶分段建造项目
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
淘汰类:
1、热处理铅浴炉（用于金属丝绳及其制品的有铅液覆盖剂和
负压抽风除尘设施的在线热处理铅浴生产线除外）
2、热处理氯化钡盐浴炉（高温氯化钡盐浴炉暂缓淘汰）
3、TQ60、TQ80 塔式起重机
4、QT16、QT20、QT25 井架简易塔式起重机
5、KJ1600/1220 单筒提升绞机
6、3000 千伏安以下普通棕刚玉冶炼炉
7、4000 千伏安以下固定式棕刚玉冶炼炉
8、3000 千伏安以下碳化硅冶炼炉
9、强制驱动式简易电梯
10、以氯氟烃（CFCs）作为膨胀剂的烟丝膨胀设备生产线
11、砂型铸造粘土烘干砂型及型芯
12、焦炭炉熔化有金属
13、砂型铸造油砂制芯
14、重质砖炉衬台车炉
15、中频发电机感应加热电源
16、燃煤火焰反射加热炉
17、铸/锻件酸洗工艺
18、位式交流接触器温度控制柜
19、插入电式盐浴炉
20、动圈式和抽头式硅整流弧焊机
21、磁放大器式弧焊机
22、无法安装保护装置的冲床
23、无磁轭（≥0.25 吨）铝壳中频感应电炉
24、无芯工频感应电炉
1、T100、T100A 推土机
2、ZP-II、ZP-III 干式喷浆机
3、WP-3 挖掘机
4、0.35 立方米以下的气动抓岩机
5、矿用钢丝绳冲击式钻机
6、БY-40 石油钻机7、直径 1.98 米水煤气发生炉
8、CER 膜盒系列
9、热电偶（分度号 LL-2、LB-3、EU-2、EA-2、CK）
10、热电阻（分度号 BA、BA2、G）
11、DDZ-I 型电动单元组合仪表
12、GGP-01A 型皮带秤
13、BLR-31 型称重传感器
14、WFT-081 辐射感温器
15、WDH-1E、WDH-2E 光电温度计，PY5 型数字温度计
16、BC 系列单波纹管差压计，LCH-511、YCH-211、LCH-311、
YCH-311、LCH-211、YCH-511 型环称式差压计
17、EWC-01A 型长图电子电位差计
18、XQWA 型条形自动平衡指示仪
19、ZL3 型 X-Y 记录仪
20、DBU-521，DBU-521C 型液位变送器
21、YB 系列（机座号 63～355mm,额定电压 660V 及以下）、
YBF 系列（机座号 63～160mm，额定电压 380、660V 或 380/660V）、
YBK 系列（机座号 100～355mm，额定电压 380/660V、660/1140V）
隔爆型三相异步电动机
22、DZ10 系列塑壳断路器、DW10 系列框架断路器
23、CJ8 系列交流接触器
24、QC10、QC12、QC8 系列起动器 25、JR0、JR9、JR14、JR15、JR16-A、B、C、D 系列热继电
器
26、以焦炭为燃料的有金属熔炼炉
27、GGW 系列中频无心感应熔炼炉
28、B 型、BA 型单级单吸悬臂式离心泵系列
29、F 型单级单吸耐腐蚀泵系列
30、JD 型长轴深井泵
31 、 KDON-3200/3200 型 蓄 冷 器 全 低 压 流 程 空 分 设 备 、
KDON-1500/1500 型蓄 冷器（管 式）全 低压流程 空分设 备、
KDON-1500/1500 型管板式全低压流程空分设备、KDON-6000/6600
型蓄冷器流程空分设备
32、3W-0.9/7（环状阀）空气压缩机
33、C620、CA630 普通车床
34、C616、C618、C630、C640、C650 普通车床
35、X920 键槽铣床
36、B665、B665A、B665-1 牛头刨床
37、D6165、D6185 电火花成型机床
38、D5540 电脉冲机床
39、J53-400、J53-630、J53-1000 双盘摩擦压力机
40、Q11-1.6×1600 剪板机
41、Q51 汽车起重机
42、TD62 型固定带式输送机43、3 吨直流架线式井下矿用电机车
44、A571 单梁起重机
45、断路器:DS3-10、DS3-30、DS3-50（1000、3000、5000A）、
DS10-10、DS10-20、DS10-30（1000、2000、3000A）
46、SX 系列箱式电阻炉
47、单相电度表:DD1、DD5、DD5-2、DD5-6、DD9、DD10、
DD12、DD14、DD15、DD17、DD20、DD28
48、SL7-30/10～SL7-1600/10、S7-30/10～S7-1600/10 配电变压
器
49、刀开关:HD6、HD3-100、HD3-200、HD3-400、HD3-600、
HD3-1000、HD3-1500
50、GC 型低压锅炉给水泵，DG270-140、DG500-140、DG375-185
锅炉给水泵
51、热动力式疏水阀:S15H-16、S19-16、S19-16C、S49H-16、
S49-16C、S19H-40、S49H-40、S19H-64、S49H-64
52、固定炉排燃煤锅炉（双层固定炉排锅炉除外）
53、L-10/8、L-10/7 型动力用往复式空气压缩机
54、8-18 系列、9-27 系列高压离心通风机
55、X52、X62W 320×150 升降台铣床
56、J31-250 机械压力机
57、TD60、TD62、TD72 型固定带式输送机
58、E135 二冲程中速柴油机（包括 2、4、6 缸三种机型），4146柴油机
59、TY1100 型单缸立式水冷直喷式柴油机
60、165 单缸卧式蒸发水冷、预燃室柴油机
61、含汞开关和继电器
62、燃油助力车
63、低于国二排放的车用发动机
64、机动车制动用含石棉材料的摩擦片
65、非定型竖井罐笼，Φ1.2 米以下（不含 Φ1.2 米）用于升降
人员的提升绞车，KJ 型矿井提升机，JKA 型矿井提升机，XKT 型
矿井提升机，JTK 型矿用提升绞车，带式制动矿用提升绞车，TKD
型提升机电控装置及使用继电器结构原理的提升机电控装置，专门
用于运输人员、油料的无轨胶轮车使用的干式制动器，无稳压装置
的中深孔凿岩设备
66、每小时 10 蒸吨及以下燃煤锅炉
67、国三及以下排放标准营运柴油货车，采用稀薄燃烧技术和
“油改气”的老旧燃气车辆
12
轻工
限制类:
1、聚氯乙烯普通人造革生产线
2、年加工生皮能力 20 万标张牛皮以下的生产线，年加工蓝湿
皮能力 10 万标张牛皮以下的生产线
3、以含氢氯氟烃（HCFCs）为制冷剂、发泡剂、灭火剂、溶
剂、清洗剂、加工助剂等受控用途的聚氨酯泡沫塑料生产线、连续
挤出聚苯乙烯泡沫塑料（XPS）生产线以及冰箱、冰柜、汽车空调
器、工业商业用冷藏、制冷设备生产线
4、聚氯乙烯（PVC）食品保鲜包装膜
5、普通照明白炽灯6、高转速低于 4000 针/分钟的平缝机（不含厚料平缝机）和
高转速低于 5000 针/分钟的包缝机
7、电子计价秤（准确度低于大称量的 1/3000，称量≤15 千
克）、电子皮带秤（准确度低于大称量的 5/1000）、电子吊秤（准
确度低于大称量的 1/1000，称量≤50 吨）、弹簧度盘秤（准确度
低于大称量的 1/400，称量≤8 千克）
8、电子汽车衡（准确度低于大称量的 1/3000，称量≤300 吨）、
电子静态轨道衡（准确度低于大称量的 1/3000，称量≤150 吨）、
电子动态轨道衡（准确度低于大称量的 1/500，称量≤150 吨）
9、玻璃保温瓶胆生产线
10、3 万吨/年及以下的玻璃瓶罐生产线
11、以人工操作方式制备玻璃配合料及秤量
12、未达到日用玻璃行业清洁生产评价体系规定的玻
璃窑炉
13、羰基合成法及齐格勒法生产的脂肪醇产品
14、热法生产三聚磷酸钠生产线
15、单层喷枪洗衣粉生产工艺及装备、1.6 吨/小时以下规模磺
化装置
16、100 万吨/年以下北方海盐项目；南方海盐盐场项目；60 万 吨/年以下矿（井）盐项目
17、单金属板胶印机
18、单条化学木浆 30 万吨/年以下、化学机械木浆 10 万吨/年以下、化学竹浆 10 万吨/年以下的生产线
19、原糖加工项目及日处理甘蔗 5000 吨（云南地区 3000 吨）、
日处理甜菜 3000 吨以下的项目
20、酒精生产线
21、糖精等化学合成甜味剂生产线
22、大豆压榨及浸出项目（黑龙江、吉林、内蒙古大豆主产区
除外）；东、中部地区单线日处理油菜籽、棉籽 200 吨及以下，花 生 100 吨及以下的油料加工项目；西部地区单线日处理油菜籽、棉
籽、花生等油料 100 吨及以下的加工项目
23、年加工玉米 45 万吨以下、干收率在 98%以下玉米淀粉
（蜡质玉米、高直链玉米等特种玉米年加工规模 1 万吨以下）
24、年屠宰生猪 15 万头及以下、肉牛 1 万头及以下、肉羊 15
万只及以下、活禽 1000 万只及以下的屠宰建设项目（少数民族地
区除外）
25、3000 吨/年及以下的西式肉制品加工项目
26、年产 2000 吨（折干）及以下酵母制品
27、冷冻海水鱼糜生产线
28、铅酸蓄电池生产中铸板、制粉、输粉、灌粉、和膏、涂板、
刷板、配酸灌酸、外化成、称板、包板等人工作业工艺
29、采用外化成工艺生产铅酸蓄电池
30、年产 5 万吨以下柠檬酸生产线
31、10 万吨/年及以下赖氨酸、苏氨酸生产线；20 万吨/年及以下谷氨酸生产线
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
淘汰类:
1、汞电池（氧化汞原电池及电池组、锌汞电池）
2、含汞糊式锌锰电池、含汞纸板锌锰电池、含汞圆柱型碱锰
电池、含汞扣式碱锰电池
3、含汞浆层纸、含汞锌粉
4、开口式普通铅蓄电池、干式荷电铅蓄电池
5、含镉高于 0.002%的铅蓄电池
6、含砷高于 0.1%的铅蓄电池
7、民用镉镍电池
8、直排式燃气热水器
9、螺旋升降式（铸铁）水嘴
10、用于凹版印刷的苯胺油墨
11、进水口低于溢流口水面、上导向直落式便器水箱配件
12、铸铁截止阀
13、半自动（卧式）工业用洗衣机
14、开启式四氯乙烯干洗机和普通封闭式四氯乙烯干洗机，分
体式石油干洗机和普通封闭式石油干洗机
15、烷基酚聚氧乙烯醚（包括壬基酚聚氧乙烯醚、辛基酚聚氧
乙烯醚和十二烷基酚聚氧乙烯醚等）的生产和使用
16、一次性发泡塑料餐具、一次性塑料棉签（2020 年 12 月 31
日）；含塑料微珠的日化用品（到 2020 年 12 月 31 日禁止生产，到2022 年 12 月 31 日禁止销售）；厚度低于 0.025
毫米的超薄型塑料袋、厚度低于 0.01 毫米的聚乙烯农用地膜
17、用于电子显示的冷阴荧光灯和外置电荧光灯:（1）长度较短（≤500 毫米）且单支含汞量超过 3.5 毫克；（2）中等长度（＞500
毫米且≤1500 毫米）且单支含汞量超过 5 毫克；（3）长度较长（＞1500 毫米）且单支含汞量超过 13 毫克（2020 年 12 月 31日）
18、化妆品（含汞量超过百万分之一），包括亮肤肥皂和乳霜，
不包括以汞为防腐剂且无有效替代防腐剂的眼部化妆品（2020 年 12 月 31 日）
19、生产含汞的气压计、湿度计、压力表、温度计（体温计除
外）等非电子测量仪器（无法获得适当无汞替代品、安装在大型设备中或用于高精度测量的非电子测量设备除外）（2020 年 12 月 31日）
20、含汞体温计和含汞血压计（2025 年 12 月 31 日）
21、含汞电池，不包括含汞量低于 2%的扣式锌氧化银电池以
及含汞量低于 2%的扣式锌空气电池（2020 年 12 月 31 日）
22、用于普通照明用途的不超过 30 瓦且单支含汞量超过 5 毫
克的紧凑型荧光灯（2020 年 12 月 31 日）
23、用于普通照明用途的直管型荧光灯:（1）低于 60 瓦且单
支含汞量超过 5 毫克的直管型荧光灯（使用三基荧光粉）；（2） 低于 40 瓦（含 40 瓦）且单支含汞量超过 10 毫克的直管型荧光灯
（使用卤磷酸盐荧光粉）（2020 年 12 月 31 日）
24、用于普通照明用途的高压汞灯（2020 年 12 月 31 日）
25、以一氟二氯乙烷（HCFC-141b）为发泡剂生产冰箱冷柜产
品、冷藏集装箱产品、电热水器产品
26、含二甲苯香的日用香精
1、汞电池（氧化汞原电池及电池组、锌汞电池）
2、含汞糊式锌锰电池、含汞纸板锌锰电池、含汞圆柱型碱锰
电池、含汞扣式碱锰电池
3、含汞浆层纸、含汞锌粉
4、开口式普通铅蓄电池、干式荷电铅蓄电池
5、含镉高于 0.002%的铅蓄电池
6、含砷高于 0.1%的铅蓄电池
7、民用镉镍电池
8、直排式燃气热水器
9、螺旋升降式（铸铁）水嘴
10、用于凹版印刷的苯胺油墨
11、进水口低于溢流口水面、上导向直落式便器水箱配件
12、铸铁截止阀
13、半自动（卧式）工业用洗衣机
14、开启式四氯乙烯干洗机和普通封闭式四氯乙烯干洗机，分
体式石油干洗机和普通封闭式石油干洗机
15、烷基酚聚氧乙烯醚（包括壬基酚聚氧乙烯醚、辛基酚聚氧
乙烯醚和十二烷基酚聚氧乙烯醚等）的生产和使用
16、一次性发泡塑料餐具、一次性塑料棉签（2020 年 12 月 31
日）；含塑料微珠的日化用品（到 2020 年 12 月 31 日禁止生产，到
2022 年 12 月 31 日禁止销售）；厚度低于 0.025 毫米的超薄型塑料
袋、厚度低于 0.01 毫米的聚乙烯农用地膜17、用于电子显示的冷阴荧光灯和外置电荧光灯:（1）长
度较短（≤500 毫米）且单支含汞量超过 3.5 毫克；（2）中等长度
（＞500 毫米且≤1500 毫米）且单支含汞量超过 5 毫克；（3）长度
较长（＞1500 毫米）且单支含汞量超过 13 毫克（2020 年 12 月 31
日）
18、化妆品（含汞量超过百万分之一），包括亮肤肥皂和乳霜，
不包括以汞为防腐剂且无有效替代防腐剂的眼部化妆品（2020 年 12 月 31 日）
19、生产含汞的气压计、湿度计、压力表、温度计（体温计除
外）等非电子测量仪器（无法获得适当无汞替代品、安装在大型设
备中或用于高精度测量的非电子测量设备除外）（2020 年 12 月 31
日）
20、含汞体温计和含汞血压计（2025 年 12 月 31 日）
21、含汞电池，不包括含汞量低于 2%的扣式锌氧化银电池以
及含汞量低于 2%的扣式锌空气电池（2020 年 12 月 31 日）
22、用于普通照明用途的不超过 30 瓦且单支含汞量超过 5 毫
克的紧凑型荧光灯（2020 年 12 月 31 日）
23、用于普通照明用途的直管型荧光灯:（1）低于 60 瓦且单
支含汞量超过 5 毫克的直管型荧光灯（使用三基荧光粉）；（2）
低于 40 瓦（含 40 瓦）且单支含汞量超过 10 毫克的直管型荧光灯
（使用卤磷酸盐荧光粉）（2020 年 12 月 31 日）
24、用于普通照明用途的高压汞灯（2020 年 12 月 31 日）25、以一氟二氯乙烷（HCFC-141b）为发泡剂生产冰箱冷柜产
品、冷藏集装箱产品、电热水器产品
26、含二甲苯香的日用香精
13
纺织
限制类:
1、单线产能小于 20 万吨/年的常规聚酯（PET）连续聚合生产
装置
2、常规聚酯的对苯二甲酸二甲酯（DMT）法生产工艺
3、半连续纺粘胶长丝生产线
4、间歇式氨纶聚合生产装置
5、常规化纤长丝用锭轴长 1200 毫米及以下的半自动卷绕设备
6、粘胶板框式过滤机
7、单线产能≤1000 吨/年、幅宽≤2 米的常规丙纶纺粘法非织
造布生产线
8、25 公斤/小时以下梳棉机
9、200 钳次/分钟以下的棉精梳机
10、5 万转/分钟以下自排杂气流纺设备
11、FA502、FA503 细纱机
12、入纬率小于 600 米/分钟的剑杆织机，入纬率小于 700 米/
分钟的喷气织机，入纬率小于 900 米/分钟的喷水织机
13、采用聚乙烯醇浆料（PVA）上浆工艺及产品（涤棉产品，
纯棉的高支高密产品除外）
14、吨原毛洗毛用水超过 20 吨的洗毛工艺与设备
15、双宫丝和柞蚕丝的立式缫丝工艺与设备
16、绞纱染工艺17、亚氯酸钠漂白设备
18、普通涤纶载体染
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
淘汰类:
1、使用时间达到 30 年的棉纺、毛纺、麻纺设备、机织设备
2、辊长 1000 毫米以下的皮辊轧花机，锯片片数在 80 以下的
锯齿轧花机，压力吨位在 400 吨以下的皮棉打包机（不含 160 吨、
200 吨短绒棉花打包机）
3、ZD647、ZD721 型自动缫丝机，D101A 型自动缫丝机，ZD681
型立缫机，DJ561 型绢精纺机，K251、K251A 型丝织机等丝绸加工
设备
4、Z114 型小提花机
5、GE186 型提花毛圈机
6、Z261 型人造毛皮机
7、未经改造的 74 型染整设备
8、蒸汽加热敞开无密闭的印染平洗槽9、R531 型酸性粘胶纺丝机
10、4 万吨/年及以下粘胶常规短纤维生产线
11、湿法氨纶生产工艺
12、二甲基甲酰胺（DMF）溶剂法氨纶及腈纶生产工艺
13、硝酸法腈纶常规纤维生产工艺及装置
14、常规聚酯（PET）间歇法聚合生产工艺及设备
15、常规涤纶长丝锭轴长 900 毫米及以下的半自动卷绕设备
16、使用年限超过 15 年的国产和使用年限超过 20 年的印
染前处理设备、拉幅和定形设备、圆网和平网印花机、连续染机
17、使用年限超过 15 年的浴比大于 1:10 的棉及化纤间歇式
染设备
18、使用直流电机驱动的印染生产线
19、印染用铸铁结构的蒸箱和水洗设备，铸铁墙板无底蒸化机，
汽蒸预热区短的 L 型退煮漂履带汽蒸箱
20、螺杆挤出机直径小于或等于 90mm，2000 吨/年以下的涤纶
再生纺短纤维生产装置
14
烟草
限制类:
1、烟草制品加工项目
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
15
民爆 产品
限制类:
1、非人机隔离的非连续化、自动化雷管装配生产线
2、非连续化、自动化炸生产线
3、高污染的起爆生产线
4、高能耗、高污染、低性能工业粉状炸生产线
5、危险等级为 1.1 级的危险品生产厂房现场操作人员总人数大
于 5 人的炸生产线
6、危险等级为 1.1 级的危险品生产厂房现场操作人员人数大于
9 人的炸制品生产线
7、与雷管近距离接触的作业人员数量（含原材料和半成品作
业人员，不含成品运送人员）大于 5 人的基础雷管装填生产线
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
淘汰类:
1、不满足国内公共全生命周期管控标准要求的工业雷管
2、导火索
3、铵梯炸
4、纸壳雷管1、不满足国内公共全生命周期管控标准要求的工业雷管
2、导火索
3、铵梯炸
4、纸壳雷管
16
其他
限制类:
1、用地红线宽度（包括绿化带）超过下列标准的城市主干道
路项目:小城市和重点镇 40 米，中等城市 55 米，大城市 70 米（200
万人口以上特大城市主干道路确需超过 70 米的，城市总体规划中
应有专项说明）
2、用地面积超过下列标准的城市游憩集会广场项目:小城市
和重点镇 1 公顷，中等城市 2 公顷，大城市 3 公顷，200 万人口以上特大城市 5 公顷
3、别墅类房地产开发项目
4、高尔夫球场项目
5、赛马场项目
6、4 档及以下机械式车用自动变速箱（AT） 7、排放标准国三及以下的机动车用发动机
8、不符合《大气污染防治法》《水污染防治法》《固体废物污
染环境防治法》《节约能源法》《生产法》《产品质量法》《土地
管理法》《职业病防治法》等国家法律法规，不符合国家、环
保、能耗、质量方面强制性标准，不符合环境公约等要求的工
艺、技术、产品、装备
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
淘汰类:
1、含有毒有害氰化物电镀工艺（电镀金、银、铜基合金及予
镀铜打底工艺除外）
2、含氰沉锌工艺
3、实体坝连岛技术
4、超过生态承载力的旅游活动和材等林产品采集
5、不符合国家现行城市生活垃圾、医疗废物和工业废物焚烧相关污染控制标准、工程技术标准以及设备标准的小型焚烧炉
6、不符合《大气污染防治法》《水污染防治法》《固体废物污
染环境防治法》《节约能源法》《生产法》《产品质量法》《土地
管理法》《职业病防治法》等国家法律法规，不符合国家、环
保、能耗、质量方面强制性标准，不符合环境公约等要求的工
艺、技术、产品、装备
1、59、69、72、TF-3 型防毒面具
2、ZH15 隔式化学氧自救器，一氧化碳过滤式自救器
3、不符合《大气污染防治法》《水污染防治法》《固体废物污
染环境防治法》《节约能源法》《生产法》《产品质量法》《土地
管理法》《职业病防治法》等国家法律法规，不符合国家、环
保、能耗、质量方面强制性标准，不符合环境公约等要求的工
艺、技术、产品、装备
17
铁路
淘汰类:
1、G60 型、G17 型罐车
2、P62 型棚车
3、K13 型矿石车4、U60 型水泥车
5、N16 型、N17 型平车
6、L17 型粮食车
7、C62A 型、C62B 型敞车
8、轨道平车（载重 40 吨及以下）
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
18
船舶
淘汰类:
1、废旧船舶滩涂拆解工艺2、船长大于 90 米的海洋钢质船舶以及船长大于 120 米的内河
钢质船舶的整体建造工艺1、采用整体造船法建造的钢制运输船舶
2、不符合规范的改装船舶和已到报废期限的船舶
3、单壳油船
4、挂桨机船及其发动机
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
19
消防
淘汰类:
1、二氟一氯一溴甲烷灭火剂（简称 1211 灭火剂）
2、三氟一溴甲烷灭火剂（简称 1301 灭火剂）（原料及必要用
途除外）
3、简易式 1211 灭火器
4、手提式 1211 灭火器
5、推车式 1211 灭火器
6、手提式化学泡沫灭火器
7、手提式酸碱灭火器
8、简易式 1301 灭火器（必要用途除外）
9、手提式 1301 灭火器（必要用途除外）
10、推车式 1301 灭火器（必要用途除外）
11、管网式 1211 灭火系统
12、悬挂式 1211 灭火系统
13、柜式 1211 灭火系统
14、管网式 1301 灭火系统（必要用途除外）
15、悬挂式 1301 灭火系统（必要用途除外）
16、柜式 1301 灭火系统（必要用途除外）
17、PVC 衬里消防水带1、火灾探测器手工插焊电子元器件生产工艺
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
20
印刷
淘汰类:
1、铅排、铅印工艺
2、铅印机及相关辅机
3、照像制版机
4、ZD201、ZD301 型系列单字铸字机
5、TH1 型自动铸条机、ZT102 型系列铸条机6、ZDK101 型字模雕刻机
7、KMD101 型字模刻刀磨床
8、AZP502 型半自动汉文手选铸排机、ZSY101 型半自动汉文
铸排机、TZP101 型外文条字铸排机、ZZP101 型汉文自动铸排机
9、QY401、2QY404 型系列电动铅印打样机，QYSH401、2QY401、
DY401 型手动式铅印打样机
10、YX01、YX02、YX03 型系列压纸型机，HX01、HX02、
HX03、HX04 型系列烘纸型机
11、PZB401 型平铅版铸版机，YZB02、YZB03、YZB04、YZB05、
YZB06、YZB07 型系列铅版铸版机
12、JB01 型平铅版浇版机
13、RQ02、RQ03、RQ04 型系列铅泵熔铅炉
14、BB01 型刨版机，YGB02、YGB03、YGB04、YGB05 型圆
铅版刮版机，YTB01 型圆铅版镗版机，YJB02 型圆铅版锯版机，
YXB04、YXB05、YXB302 型系列圆铅版修版机
15、P401、P402 型系列四开平压印刷机，P801、P802、P803、
P804 型系列八开平压印刷机
16、PE802 型双合页印刷机
17、TE102、TE105、TE108 型系列全张自动二回转平台印刷
机
18、TY201 型对开单一回转平台印刷机，TY401 型四开单
一回转平台印刷机19、TY4201 型四开一回转双印刷机
20、TT201、TZ201、DT201 型对开手动续纸停回转平台印刷
机
21、TT202 型对开自动停回转平台印刷机，TT402、TT403、
TT405、DT402 型四开自动停回转平台印刷机，TZ202 型对开半自
动停回转平台印刷机，TZ401、TZS401、DT401 型四开半自动停回
转平台印刷机
22、TR801 型系列立式平台印刷机
23、LP1101、LP1103 型系列平板纸全张单面轮转印刷机，
LP1201 型平板纸全张双面轮转印刷机，LP4201 型平板纸四开双
轮转印刷机
24、LSB201（880×1230 毫米）及 LS201、LS204（787×1092
毫米）型系列卷筒纸书刊转轮印刷机
25、LB203、LB205、LB403 型卷筒纸报版轮转印刷机，LB2405、
LB4405 型卷筒纸双层二组报版轮转印刷机，LBS201 型卷筒纸书、
报二用轮转印刷机
26、K.M.T 型自动铸字排版机，PH-5 型汉字排字机
27、球震打样制版机（DIA PRESS 清刷机）
28、1985 年前生产的手动照排机、国产制版照相机
29、离心涂布机
30、J1101 系列全张单胶印机（印刷速度每小时 5000 张及以
下）31、J2101、PZ1920 系列对开单胶印机（印刷速度每小时 4000
张及以下），PZ1615 系列四开单胶印机（印刷速度每小时 4000
张及以下），YPS1920 系列双面单胶印机（印刷速度每小时 4000
张及以下）
32、W1101 型全张自动凹版印刷机、AJ401 型卷筒纸单面四
凹版印刷机
33、DJ01 型平装胶订联动机，PRD-01、PRD-02 型平装胶订联
动机，DBT-01 型平装有线订、包、烫联动机
34、溶剂型即涂覆膜机、承印物无法降解和回收的各类覆膜机
35、QZ101、QZ201、QZ301、QZ401 型切纸机
36、MD103A 型磨刀机
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
21
采矿
淘汰类:
1、集中铲装作业时人工装卸矿岩
2、未安装捕尘装置的干式凿岩作业
3、主要无轨运输巷道及露天采场采用人力或畜力运输矿岩
4、地下矿山使用非阻燃电缆、风筒和输送带
5、地下矿山主要井巷使用木支护
6、地下矿山采用空场法采矿（无底柱采矿法）采场内人工装
运作业
7、地下矿山采用横撑支柱采矿法
8、露天矿山采用扩壶爆破
9、露天矿山采用掏底崩落、掏挖开采、不分层的“一面墙”开采
10、露天矿山使用爆破方式对大块矿岩进行二次破碎
发展委修订发布《产业结构调整指导目录（2019年本）》（中华人民共和国国家发展和委员会令第29号）
市发改及有关职能部门
（一）
有毒物质
1
一氧化碳
30
2
一甲胺
5
3
乙醚
500
4
乙腈
3
5
二甲胺
40
6
二甲苯
100
7
二甲基甲酰胺
10
8
二甲基二氯硅烷
2
9
二氧化硫
15
10
二氧化（石西）
0.1
11
二氯丙醇（皮）
5
12
二硫化碳（皮）
10
13
二异氰酸甲苯酯
0.2
14
丁烯
100
15
丁二烯
100
16
丁醛
10
17
三乙基氯化锡（皮）
0.01
18
三氧化二砷及五氧化砷
0.3
19
三氧化铬、镉酸盐、重铬酸盐（换算成CrO3）
0.05
20
三氯氢硅
3
21
己内酰胺
10
22
五氧化二磷
1
23
五氯酚及其钠盐
0.3
24
六六六
0.1
25
丙体六六六
0.05
26
丙酮
400
27
丙烯腈（皮）
2
28
丙烯醛
0.3
29
丙烯醇（皮）
2
30
甲苯
100
31
甲醛
3
32
光气
0.5
有机磷化合物
33
内吸磷（皮）
0.02
34
对硫磷（皮）
0.05
35
甲拌磷（皮）
0.01
36
马拉硫磷（皮）
2
37
甲基内吸磷（皮）
0.2
38
甲基对硫磷（皮）
0.1
39
乐戈（乐果）（皮）
1
40
敌百虫（皮）
1
41
敌敌畏（皮）
0.3
42
吡啶
4
43
金属汞
0.01
44
升汞
0.1
45
有机汞化合物（皮）
0.005
46
松节油
300
47
环氧氯丙烷(皮)
1
48
环氧乙烷
5
49
环己酮
50
50
环己醇
50
51
环己烷
100
52
苯（皮）
40
53
苯及其同系物的一硝基化合物（硝基苯及硝基甲苯等）（皮）
5
54
本及其同系物的二及三硝基化合物（二硝基苯、三硝基苯等）（皮）
1
55
苯的硝基及二硝基氯化物（一硝基氯苯、二硝基氯苯等）（皮）
1
56
苯胺、甲苯胺、二甲胺（皮）
5
57
苯乙烯
40
58
五氧化二钒烟
0.1
59
五氧化二钒粉尘
0.5
60
钒铁合金
1
61
苛性碱（换算成NaOH）
0.5
62
氟化氢及氟化物（换算成F）
1
63
氨
30
64
臭氧
0.3
65
氧化氮（换算成NO2）
5
66
氧化锌
5
67
氧化镉
0.1
68
砷化氢
0.3
69
铅烟
0.03
70
铅尘
0.05
71
四乙基铅（皮）
0.005
72
硫化铅
0.5
73
铍及其化合物
0.001
74
钼（可溶性化合物）
4
75
钼（不容性化合物）
6
76
黄磷
0.03
77
酚（皮）
5
78
萘烷、四氢化萘
100
79
氰化氢及氢氰酸盐（换算成HCN）（皮）
0.3
80
联苯-联苯醚
7
81
硫化氢
10
82
硫酸及三氧化硫
2
83
锆及其化合物
5
84
锰及其化合物(换算成MnO2)
0.2
85
氯
1
86
氯化氢及盐酸
15
87
氯苯
50
88
氯萘及氯联苯(皮)
1
89
氯化苦
1
90
二氯乙烷
15
91
三氯乙烯
30
92
四氯化碳(皮)
25
93
氯乙烯
30
94
氯丁二烯(皮)
2
95
溴甲烷(皮)
1
96
碘甲烷(皮)
1
97
溶剂汽油
350
98
滴滴涕
0.3
99
羧基镍
0.001
100
钨及碳化钨
6
101
醋酸甲酯
100
102
醋酸乙酯
300
103
醋酸丙酯
300
104
醋酸丁酯
300
105
醋酸戊酯
100
106
甲醇
50
107
丙醇
200
108
丁醇
200
109
戊醇
100
110
糠醛
10
111
磷化氢
0.3
（二）
生产性粉尘
1
含有10%以上游离二氧化硅的粉尘(石英、石英岩等)
2
2
石棉粉尘及含有10%以上石棉的粉尘
2
3
含有10%以下游离二氧化硅的滑石粉尘
4
4
含有10%以下游离二氧化硅的水泥粉尘
6
5
含有10%以下游离二氧化硅的煤尘
10
嘉兴长期回收废钼收购厂家
1. 市场:近年来，金属钼市场持续增长。主要需求来自于钢铁、有金属、化工、电子和机械制造等行业。中国是金属钼主要的生产和消费国，市场份额超过 50%。
2. 生产情况:金属钼的生产主要分为钼矿石提炼、钼铁炼钼和钼精炼三个阶段。近年来，随着和能源成本的上升，一些小型矿山逐渐退出市场，行业集中度和生产技术水平不断提高。
3. 消费结构:金属钼的消费结构相对稳定。在主要应用领域中，钢铁行业是大的消费领域，其次是化工、有金属和电子行业。随着和能源的推进，高能耗行业的钼消费量可能会进一步下降。
4. 价格波动:金属钼的价格受供求关系、、贸易等因素影响，具有较大的波动性。价格波动对行业内的企业、投资者和消费者都会产生影响。
1. 钼矿石资源:钼是一种稀有的金属元素，主要分布于俄罗斯、中国、加拿大和美国等地。中国是大的钼资源国之一，主要钼矿石产地包括河南、吉林、内蒙古和山东等地。随着资源的开发，新的钼矿资源不断被发现和开采。
2. 采选冶炼:钼矿石的采选和冶炼是金属钼生产的重要环节。这一环节需要较高的技术和设备投入，目前国内外的钼业公司和技术服务商都在积提高技术和设备水平，以降低成本和提高生产效率。
3. 深加工产品:金属钼经过深加工，可以生产出各种钼制品，如钼板、钼棒、钼管、钼带、钼合金等。这些产品广泛应用于各行各业，如钢铁、有金属、化工、石油、医疗等。随着科技的发展，新的应用领域也在不断出现。
4. 销售渠道:金属钼的销售渠道包括直销、经销商和电商平台等。企业应根据自身情况和市场需求，选择合适的销售渠道。同时，建立稳定的客户关系，也是提高销售效率和客户满意度的重要手段。
5. 与能源:随着和能源的推进，金属钼行业的和能源投入越来越大。企业应积采用技术和设备，降低生产过程中的污染和能耗，以适应日益严格的环境保护要求。
6. 技术:技术是金属钼行业发展的关键。企业应加大研发投入，积引进和吸收技术，以提高生产效率、降低成本、提高产品质量和市场竞争力。
7. 支持:政府对金属钼行业的支持，包括税收优惠、资金、产业规划等，对行业的发展具有重要影响。企业应关注动向，充分利用支持，促进企业的发展。
总结:金属钼行业是一个具有较大发展潜力的行业。在发展过程中，企业应关注市场变化、动向和技术，不断提高自身竞争力，以适应市场变化和行业发展的需要。同时，行业内的相关机构和投资者也应关注金属钼行业的动态，以做出正确的投资决策。