苏州高价废钼回收价格多少
钼，是元素周期表上序号为42的一种过渡金属元素，它的化学符号是Mo。钼金属呈银白，硬而坚韧。它在常温下不受空气的侵蚀，跟盐酸或氢氟酸不起反应。
千呼万唤始出来
自然界中，钼主要以矿物辉钼矿（MoS2）形式存在。天然辉钼矿是一种软的黑矿物，尽管辉钼矿在古代就得到了应用，但辉钼矿和铅、方铅矿及石墨都很相似，不易区分。“molybdos”这个词在希腊文里就是铅的意思。18世纪末以前，欧洲市场上两者都以molybadenite（铅的古希腊名）名义出售。
1779年，舍勒（瑞典化学家，氧气的发现人之一）指出，铅或石墨与molybadenite是两种不同的物质。他发现，硝酸对石墨没有影响，而与molybadenite反应，获得一种白粉末；将它与碱溶液共同煮沸，结晶后析出一种盐。他认为，这种白粉末是一种金属氧化物（实际上是氧化钼）；它与木炭混合经高温加热后没有获得金属，但与硫共热后得到原来的molybadenite。
1782年，舍勒的好友、瑞典矿场主埃尔摩（又译作耶尔姆）用亚麻籽油调过的木炭和钼酸混合物密闭灼烧，从molybadenite中分离出金属，命名为molybdenum，元素符号定为Mo。中国将其译成“钼”。它得到了曾发现铈、硒、硅、钽、钍等元素的瑞典化学家贝齐里乌斯的承认。
钼金属在空气中灼烧，会放出金黄光芒；不同氧化态的钼离子有不同的颜。直到钼被发现100多年后的1893年，M.莫思森才在电炉里熔炼炭和三氧化钼的混合物，首次获得含钼92％～96％的铸态金属。
貌不惊人用途广
钼的发现虽然已有200多年历史，但大规模开发利用还是本世纪尤其近几十年的事。
钼及钼合金的用途十分广泛，这是因为它有许多特性，如强度高，热膨胀系数低，优良的导热与导电性能，对熔融玻璃、熔盐及熔融金属有较高的防腐性，还可提高薄涂料的耐磨性。
合金钢、不锈钢、工具钢及铸铁是钼的主要应用领域，其生产量决定着钼的需求。不锈钢中加入钼，能改善钢的耐腐蚀性。在铸铁中加入钼，能提高铁的强度和耐磨性能。含钼18％的镍基超合金具有熔点高、密度低和热胀系数小等特性，用于制造航空和航天领域的各种高温部件。金属钼在电子管、晶体管和整流器等电子器件方面得到广泛应用。纯钼丝用于高温电炉和电火花加工以及线切割加工。钼片用来制造无线电器材和X射线器材。钼在其他合金领域及化工领域的应用也不断扩大。合金钢中加钼，可以提高材料弹性限、抗腐蚀性能以及保持永久磁性等。氧化钼和钼酸盐是化学和石油工业中的优良催化剂。
二硫化钼是一种重要的润滑剂，用于航天和机械工业领域。除此之外，二硫化钼因其的抗硫性质，可以在一定条件下催化一氧化碳加氢制取醇类物质，是很有前景的化学催化剂。
钼金属还逐步应用于核电、新能源等领域。
钼也是植物所的微量元素之一，没有它，植物就无法生存。钼在农业上可用作微量元素化肥。
人体各种组织都含钼，体内铜的总量为9毫克，以肝、肾中含量高。钼-99是钼的放射性同位素之一，在医院里用于制备锝-99。锝-99是一种放射性同位素，病人服用后可用于内脏器官造影。用于该种用途的钼-99通常用氧化铝粉吸收后存储在相对较小的容器中，当钼-99衰变时生成锝-99。
沙场硬汉显身手
人们曾在14世纪的一把日本武士剑中发现含有钼，这是钼早发现被应用于军事用途。1891年，法国斯奈德公司率先把钼作为合金元素生产了含钼装甲板。他们发现，钼的密度仅是钨的一半。这样一来，在许多钢铁合金应用领域，钼有效取代了钨。次世界大战的爆发，导致了钨需求量的剧增和钨铁供应的度紧张，钼由此在许多高硬度和耐冲击钢中取代了钨。钼需求的增长促使了人们对钼的深入研究。当时，美国科罗拉多州的大型矿山克莱麦克斯矿随之开发，并于1918年投产。
因为钼的重要性，各国政府视其为战略性金属。由于其耐高温烧蚀，钼在20世纪初被大量应用于制造装备，主要用于火炮内膛、火箭喷口的制造。现代高、精、尖装备对材料的要求更高，如钼和钨、铬、钒的合金用于制造军舰、火箭、卫星的合金构件和零部件。
钼合金是以钼为基体加入其他元素而构成的有合金，主要合金元素有钛、锆、铪、钨及稀土元素。钼合金有良好的导热、导电性和较低的膨胀系数，在高温下（1100～1650℃）有较高强度，比钨容易加工，可用作电子管的栅和阳、电光源的支撑材料以及用于制作压铸和挤压模具、航天器的零部件等。
次世界大战的结束导致了钼需求锐减。要解决这个问题，就得开发新的应用领域。不久，新型低钼合金钢在汽车工业生产中得到了。从此，钼作为合金元素在钢铁和其他领域的开发研究进入了一个新的阶段。
20世纪30年代末，钼已经是被广泛使用的工业原料。“二战”战后重建，再一次刺激了人们对钼在工业领域应用的开发与研究，给许多含钼工具钢的应用开辟了广阔的市场。如今，合金钢、不锈钢、工具钢及铸铁依然是钼的主要应用领域。
资源待研发
钼在地壳中主要存在于花岗岩类岩石中，钼矿石比较单一，主要是硫化矿石。
由于钼在军工方面的用途，世界强国纷纷把钼列为需要实行战略储备的矿产资源。战略矿产储备或矿产品战略储备，主要是针对那些对国家有战略意义、国内又相对稀缺的矿种所建立的储备。目前，世界上有10个国家建立有战略矿产储备制度。
我国是钼矿资源国家，总储量达860万吨（以钼量计），其中，工业储量约350万吨，居世界第二位。我国钼矿资源具有储量大、分布广、大型矿床多、矿体埋藏浅等特点，对的钼市场有重要影响。
美国是世界第二大钼资源国。智利、加拿大、俄罗斯和亚美尼亚也是钼资源较为的国家。
为健全浑源县突发环境事件应对工作机制，增强区域及区域内企业环境风险意识，有效防范突发环境事件的发生，提高区域及区域内企业处置突发环境事件能力。事件发生时，能迅速有效的开展人员疏散施救、现场清洁净化、环境监测、污染跟踪、信息通报和生态环境影响评估与修复行动，将事故损失和社会危害减少到程度，保障人民群众生命健康和财产，保护环境，维护社会和谐稳定，促进社会经济全面、协调、可持续发展，保障人民群众生命财产和环境，制定本预案。
《中华人民共和国突发事件应对法》、《中华人民共和国环境保护法》、《中华人民共和国放射性污染防治法》、《国家突发环境事件应急预案》、《突发环境事件应急管理办法》、《突发环境事件信息报告办法》、《突发环境事件调查处理办法》、《山西省突发事件应对条例》、《山西省突发事件应急预案管理办法》、《山西省突发公共事件总体应急预案》、《大同市突发事件总体应急预案》、《大同市突发环境事件应急预案》等。
（1）以人为本、预防优先
建立环境事故风险防范体系，积预防、及时控制、消除隐患，提高防范和处理能力，尽可能地避免或减少突发环境事件的发生，大程度地保障公众健康，保护人民群众生命财产。
（2）统一领导、分级负责
在浑源县生态环境事件应急指挥部的统一领导下，建立健全应急机制，落实应急职责，各部门协同配合，做好应对突发环境事件的各项准备工作。
（3）属地为主、协调联动
依据国家现有的法律、法规、标准，建立健全分类管理、分级响应、条块结合的应急管理体制，使应急工作法制化、制度化、规范化。一旦发生突发环境事件，企业立即采取措施控制事态发展，实行企业自救与政府协助救援，并及时向地方政府和主管部门报告。
（4）反应、科学处置
突发环境事件发生时，各相关方应接受地方政府的统一领导，与地方政府协调合作，由地方政府动用社会救援力量，严谨、快捷、有序、冷静地应对突发环境事件。
（5）资源共享、保障有力
落实领导责任制，切实履行各部门监督、协调、服务职能，使措施与事故造成的危害范围和社会影响相适应。将日常管理工作和应急救援工作相结合，加强应急技能培训，提高应对突发环境事件的综合素质。建立健全区域联防、联动机制，当发生突发环境事件时能够对事发企业进行援助，大限度地发挥区域应急能力。
本预案适用于浑源县行政区域内各类突发环境事件，以及发生在本县行政区域外且本县受到影响的突发环境事件的防范和应急处置，具体类别如下:
（1）因自然灾害影响而导致的危及环境及人体健康的环境污染事故；
（2）在企业之外公共区域发生的危险化学品及其它有毒有害物品在生产、经营、贮存、运输、使用和处置过程中发生的爆炸、燃烧、大面积泄漏等造成的环境污染事故。
（3）影响地表及地下水体水质的突发性环境污染事故；
（4）各类工业企业生产过程中因意外事故造成的其它突发性环境污染事故；
（5）事件发生时带来的次生、衍生的环境事件。
县域范围内放射性物质丢失、被盗、失控，或者放射性物质造员受到意外的异常照射或环境放射性污染事件的应对工作，按照《大同市辐射事故应急预案》执行，待《浑源县辐射事故应急预案》发布后按照其要求执行。船舶污染事件的应对工作按照其他相关应急规定执行。重污染天气应对工作按照《浑源县重污染天气应急预案》执行。危险化学品事故应急事件应对工作按照《浑源县危险化学品事故应急预案》执行。符合《中华人民共和国消防法》规定的火灾事故应急处置工作按照《浑源县火灾事故应急预案》执行。
本预案规定了浑源县环境应急组织机构、危险源预防与预警措施及应急响应，为浑源县突发环境事件应急管理提出具体的要求。该应急预案以大同市突发环境事件应急预案为指导，在应急小组职责、预案内容以及预警程序等方面均与大同市应急预案有机衔接，确保该应急预案与大同市应急预案协调联动。
该应急预案作为浑源县处理突发环境事件指导性文件，对行政区域内各企业编制突发环境事件应急预案也具有指导作用，各企业在修编突发环境事件应急预案时，也应该在应急小组职责、预案内容以及预警程序等方面均与本应急预案有机衔接，确保企业应急预案与本应急预案协调联动。
突发环境事件发生时，应考虑应急过程中污染物的非正常排放对环境的影响及火灾爆炸隐患等情况。当发生事故，并且有环境污染的趋势时，须立即启动环境应急预案及消防应急预案，做好各专项应急预案的启动与衔接工作，明确各专项预案各自负责的应急工作范围，避免出现指令重复、遗漏或应急人员安排重叠。
按照事件严重程度，突发环境事件分为重大、重大、较大和一般四个等级。突发环境事件分级标准见附件。
按照以下步骤制定环境应急预案:
（1）成立环境应急预案编制组，明确编制组组长和成员组成、工作任务、编制计划和经费预算。
（2）开展环境风险评估和应急资源调查。
（3）编制环境应急预案。明确现场组织指挥机制、应急队伍分工、信息报告、监测预警、不同情景下的应对流程和措施、应急资源保障等内容。
（4）评审和演练环境应急预案。
（5）签署发布环境应急预案。
具体编制工作流程见图 1 1。
浑源县生态环境事件应急组织指挥体系由浑源县生态环境事件应急指挥部及其办公室组成。县政府成立县生态环境事件应急指挥部。
指挥长:浑源县政府分管副县长
副指挥长:政府办主任、市生态环境浑源分长、县应急管理长、县公安长、县消防救援大队队长
成员单位:宣传部、县发展和、县教育科技、县工业和信息化、县公安、县民政、县财政、县自然资源、市生态环境浑源分、县住房和城乡建设管理、县交通运输、县水务、县农业农村、县卫生健康和体育、县应急管理、县市场监督管理、县能源、县气象、县消防救援大队、县武装部、武警浑源中队、浑源供电公司、联通公司浑源分公司、移动公司浑源分公司、电信公司浑源分公司以及事发地乡镇人民政府等。
浑源县生态环境事件应急指挥部（以下简称“县指挥部”）下设办公室。办公室设在市生态环境浑源分，办公室主任由市生态环境浑源分长兼任。县指挥部及其办公室、成员单位职责见附件2。县指挥部设立综合组、污染处置组、应急监测组、医学救援组、应急保障组、调查评估组、社会稳定组、新闻宣传组、专家组等9个工作组。各工作组组成及职责见附件3。
浑源县人民政府根据突发环境事件应急处置的需要成立现场指挥部，负责现场组织指挥工作。一般突发环境事件现场指挥部由县指挥部成员单位、事发地乡镇人民政府、事发单位负责人与相关专家组成，现场指挥部职责如下:
（1）负责应急救援指挥工作的现场协调和管理，根据事件灾难情况和救援工作进展情况，及时向应急指挥部报告，同时告知应急指挥部办公室。
（2）与应急指挥部办公室保持联系，传达应急指挥部的命令。
（3）迅速确定应急救援的实施方案，警戒区域，并组织实施:
（4）调动应急救援现场的应急救援力量，合理调配应急救援资源。
（5）调用应急救援基础资料与信息。
（6）突发环境事件影响范围扩大或领域救援力量、资源不足时，协调相关救援力量及设备增援。
（7）完成应急指挥部交办的其它事项。
在县人民政府领导下，生态环境部门会同相关部门依法对行政区域、环境风险源进行调查、登记、风险评估，采取风险防范措施，建立环境污染监测预警机制，健全突发环境事件风险防制体系，防范化解一般突发环境事件风险。
以本应急预案为基础，督促行政区域内重点和主要环境风险企业编制或修订企业突发环境事件应急预案，并及时报送主管部门进行备案。不断建立健全环境风险隐患排查制度及日常监管制度等环境风险管理制度，加强对行政区域内重点风险源的巡检，从源头控制风险，减少突发环境事件的发生。
首先，从企业建设入手，指导企业高起点设计建设，组织专家评估企业建筑物及设备应对地震、滑坡、泥石流等自然灾害风险的能力，从而降低自然灾害可能引发的次生环境灾害风险。其次，将重金属、危险废物、持久性有机污染物、危险化学品等作为防范环境风险的重点，预先考虑企业建设及生产过程中环境保障问题，维护环境。
有关部门应加强事故管理，由于工业企业生产过程多使用危险化学品，在运输、储存、使用的过程中可能引发突发环境事件，要求企业应严格执行《公路危险货物运输规划》和《化学危险品管理条例》等规定。对危险化学品运输车辆及人员，从上路检查、途中运输、停车，直到事故处理各个环节，都要加强管理，预防危险化学品运输事故发生，控制突发环境事件事态的扩大。对企业危险化学品的储存、使用和废弃处理都要执行严格的监管。涉及危险化学品的企业须向有关部门备案，定期报告危险化学品的种类、数量、状态、储存方式、使用量、废物量、处置去向和危废转移联单执行情况等，防范泄漏、爆炸等事故的发生。生产过程中各企业严格按相关规程进行生产，由于操作不当导致设备故障引发突发环境事件。
有关部门应监督涉及危险化学品的生产企业应根据建筑格、物料性质及贮存方式、建筑耐火等级、建筑体积等，严格遵守《建筑设计防火规范》等有关规定，按照同一时间内火灾次数、灭火时间及大用水量确定消防用水量，设置容积的消防水收集池。按照当地暴雨强度强度特点，对初期雨水量进行合理计算，确定容积的初期雨水收集池。涉及危险化学品的风险工序应通过导流系统连接事故池，要求事故池平时是空置的。
生态环境主管部门负责对各水环境保护目标存在环境污染风险的污染源和危险物开展普查，掌握、筛选和确定对环境构成危害的重点污染源。定期开展对重点污染源生产工艺、厂区储运、危险化学品管理、废水收集、处理、排放等重点环节的事故隐患排查，结合重点污染源对水环境保护目标的影响程度进行风险评估，采取风险防控措施，储备必要的应急物资。对居民集中区、河流沿岸农业、林业、畜禽养殖业、渔业生产污染事故隐患和乡镇企业、饮用水源周边危化品运输单位和车辆建立应急信息档案，加强日常管理和防范工作，严防各种突发性环境事件的发生。
划定危险化学品运输路线及时段，严禁在非道路及时段内运输危险化学品，在环境风险敏感区域道路口设立醒目的告示牌，要求过境的载有危险品的车辆绕行，并标明绕行路线。在饮用水源地路口、主要路段、桥梁、水体周边危险点实施24小时视频监控，对违反禁行规定的危险化学品运输车辆实施记录，进行处罚。确需运输车辆须办理危险品准运，驾驶人员、装卸管理人员、押运人员需经合格，取得上岗，运输人员应了解所运输物品的危险特性及其包装物、容器的使用要求和出现危险情况时的应急处置方法，运输工具应安装卫星定位装置和通讯设备，根据运输物品的危险特性采取相应的防护措施，配备必要的防护用品和应急救援器材，车辆应设置明显标志，以便引起其它车辆重视，发生事故。
环境风险敏感区域周边道路应按规定要求建设防护栏、溢流沟、沉淀池等必要的污染防护设施。根据地形地势在道路两侧合理布置排水沟，每隔一定距离设置集水沉淀池，用于收集日常初期雨水进行适当沉淀以减少泥沙和污染物进入地表水环境，同时可作为危险化学品运输车辆事故情况下污染物储存池。穿越饮用水水源保护区、自然保护区、风景名胜区、重要湿地等水环境保护目标的桥梁应设置桥面径流收集设施和应急池，严防发生事故时污染物流入水环境保护目标。
对本行政区域内突发环境事件进行风险评估，有条件的情况下对环境风险管理相关数据进行集成管理，形成集成数据库。应急数据内容及集成数据库形式可参考以下内容:
（1）行政区域内企业基本情况、风险物质、重点风险源、移动风险源等动态管理信息库。
对行政区域内各企业生产经营情况进行定期统计；采取企业申报和不定期抽查等形式，对各企业风险物质的购入、生产、消耗、外售等环节进行动态管理。企业在涉及环境风险物质的生产经营活动之前，应向主管部门进行申报，对环境风险物质的名称、性质、数量进行登记；主管部门负责对企业环境风险物质的名称、数量、使用和储存情况以及企业环境风险源和移动风险源运行管理情况进行不定期抽查。
（2）按照《山西省企业事业单位突发环境事件应急预案备案行业名录（试行）》（晋环函〔2022〕300号）要求，建立行政区域内企业应急预案库。对企业预案编制时间、发布时间、生效时间、有效期等信息进行记录，各企业应急预案应按照有关规定定期更新。
（3）建立应急救援力量动态管理信息库。
对行政区域内各类应急救援力量（医疗救护、应急消防、治安和应急环境监测、社会救援队等）进行动态跟踪，对各类应急救援机构的联系方式、救援力量的储备状态进行动态管理。
（4）建立应急救援物资和设施（备）数据库。
对政府部门及各企业事业单位储备的应急救援物资和设施（备）分别进行统计并建立数据库，数据库应包括应急救援物资和设施（备）名称、数量、型号大小、存放地点、负责人和调动方式。在企业应急预案编制及应急预案演练过程中进行核查，采取不定期抽查等形式进行检查，落实应急救援物资和设施（备）数量及状态，并进行动态管理。
（5）建立主要风险源示意图。
调查行政区域内主要风险源分布情况，并在示意图中注明存放风险物质的地点，重大危险源的位置与周边地区的位置关系等。
县生态环境部门及其他有关部门要按照早发现、早报告、早处置的原则，加强日常生态环境监测，并对可能导致突发环境事件的风险信息进行收集、分析和研判。公安、规划和自然资源、住建、交通、水务、农业农村、卫生健康、应急管象等有关部门要按照职责分工，加强日常突发环境事件信息监测，发现可能导致突发环境事件的信息时，应及时向同级生态环境部门通报。各部门之间建立突发环境事件的信息获取及共享机制。
企业事业单位和其他生产经营者应当落实环境主体责任，定期排查环境隐患，开展环境风险评估，健全风险防控措施，按照相关规定编制突发环境事件应急预案并向县生态环境部门报备。当出现可能导致突发环境事件的情况时，要立即报告县生态环境部门。
对于不同类型风险源可能发生的突发环境事件及其对应监控措施见表 4 1。
（1）危险化学品重大危险源监控分为储罐区（储罐）、库区（库）和生产场所三大类，主要进行工艺参数、现场可燃/有毒气体浓度、气象参数、音视频信号和人员出入情况、明火和烟气、防雷接地及供电状况。
（2）危险化学品运输车辆运输过程的主要危险来自交通事故或车载容器自身原因导致的化学品泄漏或爆炸事故。交通事故发生的主要原因包括司机违规行驶（如车辆未按照预定的行驶区域、线路行驶，车辆超载、超速及司机疲劳驾驶等）、意外的交通危难、抢劫盗窃和恐怖事件等。泄漏事故主要指由于车载容器破裂或阀门失灵造成的大量易燃易爆、有毒气体或易挥发可燃液体的外泄，而危险化学品泄漏的过程一般要经历一定的时间，因此，可以通过在容器关键部位安装传感器对泄漏事故进行预警报警，防患于未然。主要进行包括车辆实时位置、速度及车辆的安余状态（碰撞检测）以及运输危险化学品储存状态（温度、压力和易燃易爆、毒性气体）等监控。
（3）重点公共区域监测主要包括人员聚集区域、危险化学品运输车辆运输路线区域等的实时视频图像，事故发生时可能存在易燃易爆、有毒有害气体的重点区域的气体浓度，以及实时气象信息。
（1）开展污染源调查，建立环境风险源数据库。开展对生产、贮存、运输、销毁或处置废弃化学品、危险废物的普查，掌握浑源县范围内环境污染源的产生、种类、级别、数量及分布情况，建立环境污染源档案及数据库，并对重点单位、重点部位进行监测监控。了解国内外的有关技术信息、进展情况和形势动态，提出相应的对策和意见。
（2）完善应急预案体系。完善浑源县的环境事件应急预案体系，建立健全环境风险防范体系，及时消除环境隐患。
（3）建立健全环境风险评估机制。对行政区域内各生产企业主要环境风险源进行定量、定性分析，开展突发环境事件的假设、分析和风险评估工作，对事件发生的可能性和发生后的严重性进行认识及评价。
（4）加强重点河段、水源地、人群聚集区等环境敏感区周边企业风险源和交通运输的监管，划定防护范围，并在环境敏感区域设立地理界标和警示标志，减少突发环境污染事故的损失和影响。
（5）建立风险源监控预警平台，重点风险源周边道路设置视频监控设施及大气监测点。在各企业雨污排口设置视频监控设施，重点企业污水处理设施排口安装在线监测仪器。
若收集到的有关信息明突发环境事件即将发生或发生的可能性增大，应急指挥部办公室向指挥长汇报讨论后确定环境污染事件的预警级别，及时向有关部门通报相关情况，提出启动相应突发环境事件应急预警的建议，然后采取相应的预警措施。
对可以预警的突发环境事件，按照事件发生的可能性大小、紧急程度和可能造成的危害程度，将预警分为四级（对应事件分级），由高到低分别为一级、二级、三级和四级，依次用红、橙、黄和蓝表示。根据事态的发展情况和采取措施的效果，预警颜可升级、降级。县人民政府应当根据收集到的信息对突发环境事件进行预判，启动相应预警。预警级别的具体划分标准，按生态环境部相关规定执行。
县指挥部办公室根据环境监测信息或相关部门、单位的信息报告、通报，研判可能发生重、特、较大突发环境事件时，应及时向县指挥部汇报，由县指挥部向市指挥部报告相关情况，同时通报县指挥部相关成员单位。
可能发生一般突发环境事件时，应及时向县指挥部提出预警信息发布建议，同时通报县指挥部相关成员单位；县指挥部或其授权的相关部门，及时通过电视、广播、报纸、互联网、手机短信、当面告知等渠道或方式向本行政区域公众发布预警信息，并通报可能影响到的相关地区。
预警信息发布工作，按照国家、省、比照市级预警信息发布要求，结合本地区实际，进行确定。
县指挥部办公室要将监测到的可能导致突发环境事件的有关信息，及时通报可能受影响地区的乡镇人民政府。
预警信息发布后，县人民政府及其有关部门视情况采取以下措施:
（1）分析研判。组织有关部门和机构、技术人员及专家，及时对预警信息进行分析研判，预估可能的影响范围和危害程度。
（2）防范处置。迅速采取有效处置措施，控制事件苗头。在涉险区域设置注意事项提示或事件危害警告标志，利用各种渠道增加宣传频次，告知公众避险和减轻危害的常识、需采取的必要的健康防护措施。可能威胁饮用水时，应及时启动饮用水水源地应急预案，做好启动备用水源的准备工作。
（3）应急准备。提前疏散、转移可能受到危害的人员，并进行妥善安置。指令应急救援队伍、负有应急监测等特定职责的人员进入待命状态，动员后备人员做好参加应急救援和处置工作的准备，调集应急所需物资和设备，做好应急保障工作。对可能导致突发环境事件发生的相关企业事业单位和其他生产经营者加强环境监管。
（4）舆论引导。及时准确发布事态情况，公布咨询电话，组织专家解读。加强相关舆情监测，做好舆论引导工作。
发布突发环境事件预警信息的人民政府或有关部门，应当根据事态发展情况和采取措施的效果，适时调整预警级别；当判定突发环境事件危险已经消除时，宣布预警解除。
（1）应急指挥部办公室实行24小时应急值班制度，按月编排值班人员、出警人员和值班车辆、备用车辆。值班人员接到有关突发环境事件紧急报告后，要认真做好详细记录，记录内容包括:时间、地点、报告人、电话、事件类型及其状况、持续时间，迅速核实情况，值班人员核实事件后立即向应急指挥部报告。
应急指挥部在接到报告后，立即安排污染处置组到现场进一步核实情况，根据反馈情况，决定事件的预警和应急响应等级，是否启动突发环境应急预案。应急指挥部下达应急响应指令后，应立即将行动指令通知各应急小组和相关部门负责人。应急指挥部、全过程跟踪事态的发展，根据要求做好污染处置组和其他各组间的联络工作，各组和各相关部门接到行动指令后要立即集合，携带应急设备器材，在短的时间内赶赴事发现场，其他各组成员及时赶到应急指挥部集合。
突发环境事件发生后，涉事企业事业单位或其他生产经营者按照应急预案采取应对措施，并立即向县生态环境部门和相关部门报告，同时通报可能受到污染危害的单位和居民。
（2）县生态环境部门接到突发环境事件信息报告或监测到相关信息后，应当立即进行核实，对突发环境事件的性质和类别做出初步认定，并按以下要求进行报告:
①对初步认定为一般突发环境事件的，县生态环境部门应当在3小时内向县人民政府和市生态环境报告；
②对初步认定为较大突发环境事件的，县生态环境部门应当在1小时内向县人民政府和市人民政府生态环境部门报告。
③对初步认定为重大或者重大突发环境事件的，县生态环境部门应当在1小时内向县人民政府和省生态报告，同时上报生态环境部。
（3）发生下列情形之一时，对无法判明等级的突发环境事件，县生态环境部门应当按照重大或重大突发环境事件的报告程序上报:
①对饮用水水源保护区造成或者可能造成影响的；
②涉及居民聚居区、学校、医院等敏感区域和敏感人群的；
③涉及重金属或类金属污染的；
④有可能产生跨省影响的；
⑤因环境污染引发群体性事件，或者社会影响较大的。
（4）重大、重大、较大和暂时无法判明等级的突发环境事件发生后，县人民政府应当及时逐级上报，必要时可越级上报。
（5）突发环境事件处置过程中事件级别发生变化的，应当按照变化后的级别报告信息。
报告内容包括事件发生时间、地点、单位名称、信息来源、事件类别、主要污染物种类和数量、伤亡或者经济损失的初步评估，饮用水源地等环境敏感点受影响情况、影响范围，事件发展态势及处置情况等。
突发环境事件信息报告分为初报、续报和处理结果报告三类。初报从发现事件后立即上报；续报在查清有关基本情况后上报；处理结果在事件处理完毕后上报。
（1）初报在发现或得知突发环境事件后首次报告，应急指挥办公室在核实清楚后，填写突发环境事件信息初报表，报告内容包括事件发生地点、事件起因和性质，基本过程、主要污染物和数量，人员受害情况，事件发展趋势、处置情况拟采取的措施以及下一步工作建议等初步情况后，由应急救援总指挥部签发后，采用传真或者面呈的方式再上报。
（2）续报可通过网络或书面报告，在初报的基础上报告有关数据，事件发生的原因、过程、进展情况及采取的应急措施等基本情况。
（3）处理结果报告采用书面报告，处理结果报告在初报和确报的基础上，报告处理事件的措施、过程和结果，事件潜在或间接的危害、社会影响、处理后的遗留问题，参加处理工作的有关部门和工作内容，出具有关危害与损失的明文件等详细的情况。
县生态环境部门通过互联网信息监测、环境污染举报热线等多种渠道，加强对突发环境事件的信息收集，及时掌握突发环境事件发生情况，并通报同级相关部门。
因生产事故、危险化学品运输等交通事故、自然灾害等其他事件导致或可能导致突发环境事件的，公安、规划和自然资源、城市管理、交通运输、住建、水务、农业农村、卫生健康、应急管象等有关部门或其他负有监管职责的部门接报后，应当及时通报同级生态环境部门。应急指挥部其他成员单位在大气、水体、土壤监测过程中获得环境污染事件信息的，应当及时向同级生态环境部门通报，通报内容如下:
（1）事故单位，时间、地点、报警人和联系方式；
（2）事故类型（火灾、爆炸、大气污染等）；
（3）危害程度（是否污染大气、人员受伤情况、设施和财产损失情况等）、范围，向周边单位、居民通报事件信息，告知疏散的方向、路线、时限要求和注意事项；
（4）事故初步原因；
（5）周边情况、交通路线和对救援的要求等。
（6）应急物资的发放地点，并对情况者提供必要的帮助。
突发环境事件已经或可能涉及相邻行政区域的，县人民政府及其生态环境部门应当及时通报相邻县人民政府及其生态环境部门。接到已经发生或者可能发生跨县级行政区域突发环境事件信息时，县生态环境部门要及时通报相关区域县级生态环境部门，并向县人民政府提出向相关区域县级人民政府通报的建议。
生态环境事件应急指挥部根据突发环境事件的情况通知各应急处置工作组、有关企业事业单位及其应急机构、救援队伍。各应急机构接到事件信息通报后，应立即派出有关人员和队伍赶赴事发现场，在现场指挥部统一指挥下，按照各自的预案和处置规程，相互协同，密切配合，共同实施环境应急和紧急处置行动。现场指挥部成立前，各应急救援队伍在事发单位的协调指挥下坚决、迅速地实施先期处置，果断控制或切断污染源，全力控制事件态势，严防二次污染和次生、衍生事件发生。
应急状态时，专家组迅速对事件信息进行分析、评估，提出应急处置方案和建议，供应急指挥部决策参考。根据事件进展情况和形势动态，对突发环境事件的危害范围、发展趋势做出科学预测，提出相应的对策和意见；参与污染程度、危害范围、事件等级的判定，对污染区域的隔离与解禁、人员撤离与返回等重大防护措施的决策提供技术依据；指导各应急分队进行应急处理与处置。
发生环境事件的有关企业事业单位要及时、主动向现场指挥部提供应急救援有关的基础资料，有关部门提供事件发生前的监管检查资料，供现场指挥部研究救援和处置方案时参考。
应急指挥部指挥协调的主要内容包括:
（1）提出现场应急行动原则要求；
（2）协调有关专家和人员参与现场应急指挥工作；
（3）协调、指挥各企业、各应急力量实施应急救援行动；
（4）协调、指挥受威胁的周边地区危险源的监控工作；
（5）协调建立现场警戒区和交通管制区域，确定重点防护区域；
（6）根据现场监测结果，确定被转移、疏散群众返回时间；
（7）及时向上级报告应急行动的进展情况。
突发环境事件发生后，按照属地为主原则，县人民政府及其有关部门和事发单位要立即采取措施，组织处置，事件扩大。当事件态势超出处理能力时，报请市人民政府及相关部门。（突发环境事件应急处置流程见附件1）。
根据突发环境事件的严重程度和发展态势，应急响应由低到高设定为四级、三级、二级和一级四个等级。突发环境事件发生后，按照职责权限，启动相应等级的应急响应（各等级响应启动条件见附件4）。
突发环境事件发生在易造成重大影响的地区或重要时段时，可适当提高响应级别。应急响应启动后，可视事件损失情况及其发展趋势调整响应级别，避免响应不足或响应过度。
初判发生一般突发环境事件，县指挥部办公室向指挥长报告，由指挥长启动四级应急响应，并向县人民政府和市人民政府报告事件信息。按照下列程序和内容开展应急响应:
（1）立即赴事发现场，根据需要成立现场指挥部，组织开展应对工作；
（2）指导协调开展应急处置、应急监测、污染源调查等工作；
（3）组织协调相关应急队伍、物资、装备等应急资源，为应急处置提供支援和技术支持；
（4）统一组织事件信息发布、舆论引导和信息通报；
（5）必要时，县指挥部负责向市指挥部提出物资、技术、设备等支援请求。
初判发生较大突发环境事件，县指挥部指挥长向市指挥部报告，提出三级应急响应建议，由市指挥部启动Ⅲ级应急响应。各成员单位赶赴现场开展以下工作:
（1）立即赴事发现场，开展先期处置，配合市指挥部组织开展应对工作，并及时报告工作进展情况；
（2）配合市指挥部开展污染源调查、应急处置、应急监测等工作；
（3）配合市指挥部组织协调相关应急队伍、物资、装备等应急资源，为应急处置提供支援和技术支持；
（4）配合市指挥部组织事件信息发布、舆论引导和信息通报。
初判发生重大突发环境事件，县指挥部指挥长向市指挥部报告，由省重大生态环境事件应急指挥部启动Ⅱ级应急响应。各成员单位赶赴现场开展以下工作:
（1）立即赴事发现场，开展先期处置，配合省、市指挥部组织开展应对工作，并及时报告工作进展情况；
（2）配合省、市指挥部开展污染源调查、应急处置、应急监测等工作；
（3）配合省、市指挥部组织协调相关应急队伍、物资、装备等应急资源，为应急处置提供支援和技术支持；
（4）配合省、市指挥部组织事件信息发布、舆论引导和信息通报。
初判发生重大突发环境事件，县指挥部指挥长向市指挥部报告，在突发环境事件应急指挥机构指导下，由省重大生态环境事件应急指挥部启动Ⅰ级应急响应，各成员单位赶赴现场开展以下工作:
（1）立即赴事发现场，开展先期处置，配合各上级部门组织开展应对工作，并及时报告工作进展情况；
（2）配合各上级部门开展污染源调查、应急处置、应急监测等工作；
（3）配合各上级部门组织协调相关应急队伍、物资、装备等应急资源，为应急处置提供支援和技术支持；
（4）配合各上级部门组织事件信息发布、舆论引导和信息通报。
突发环境事件发生后，县人民政府、各有关部门和单位根据工作需要，遵循“控制污染源-研判污染范围-控制污染扩散-污染处置”的原则，组织采取以下措施。
涉事企业事业单位或其他生产经营者要按照“先控制、后处理”的原则，立即采取关闭、停产、封堵、围挡、喷淋、导截、收容、转移等措施，切断和控制污染源，污染蔓延扩散。做好有毒有害物质和消防废水、废液等的收集、清理和处置工作。当涉事企业不明时，在做好应急处置与应急监测的同时，县指挥部立即组织力量对污染来源开展调查，查明涉事单位，确定污染物种类和污染范围，协调应急处置队伍切断污染源。
县指挥部应组织制定综合治污方案，采用监测和模拟等手段追踪并分析污染气体扩散途径和范围；采取拦截、导流、疏浚等形式水体污染扩大；采取隔离、吸附、打捞、氧化还原、中和、沉淀、、去污洗消、临时收贮、微生物消解、调水稀释、转移异地处置、临时改造污染处置工艺或临时建设污染处置工程等方法处置污染物。必要时，要求其他排污单位停产、限产、限排，减轻环境污染负荷。
应急指挥部通知各应急小组在短的时间内赶赴现场，并按要求及时向应急指挥部报告事态发展趋势，各应急处置队伍按以下要求开展应急处置工作:
（1）污染处置组到达现场后，迅速展开现场调查，收集与事件发生有关的材料，包括实物取、摄影录像等，询问事件目击者及当事人，根据水系水流、风向等寻找排查污染源，判明事件发生的时间、地点、原因，初步判定污染物种类、性质、数量、污染范围、影响程度及事发地地理概况等，及时向应急指挥部报告。
（2）应急保障组取得指挥长同意及时调配应急物资及应急设施（备），并组织协调、调度应急物资及应急设施（备）。原则上距离事故发生地近，类似事故企业应急物资及应急设施优先调配。
（3）现场指挥部根据事故发生位置、事故类型和周边企业情况，紧急合理调配企业应急救援队伍，原则上距离事故发生地近，类似事故企业技术的单位应急救援队伍优先调配。
（4）污染处置组在现场指挥部的协调指挥和综合组、应急保障组的配合下，根据事故性质采取合理的应急措施，迅速进行现场控制，实施先期处置，控制或切断污染源，污染物扩散，全力控制态势，严防二次污染和次生、衍生事件发生。
（5）医学救援组积对受害人员进行救治并护送重伤人员至医院进一步治疗。
（6）应急监测组到达现场后，根据制定的应急监测方案，实施现场勘验，确定现场监测布点，进行现场采样和测试，确定污染物的类别、浓度、污染程度，测量水流转移、扩散速率，划定水源污染区域，提出处置措施，出具技术报告，及时向应急指挥部汇报，为应急指挥部决策提供依据。监测要根据污染物扩散情况和监测结果的变化趋势适当调整监测频次和监测点位，提出处置措施建议，及时向应急指挥部汇报。涉及大气污染事故的，现场监测要查阅事件发生地有关空气动力学数据（气温、气压、风向、风力、大气稳定度等），向应急指挥部提出是否需疏散群众的建议；涉及水污染事故，现场监测人员要测量水流转移、扩散速率，划定水源污染区域，为应急指挥部决策供依据。
（7）专家组对事件信息进行分析、评估，提出应急处置方案和建议，供应急指挥部决策参考，对突发环境事件的危害范围、发展趋势做出科学预测，对污染区城的隔离、人员的撤离、环境污染的清除等重大防护措施的决策提供技术依据。
5.4.1.1 易挥发有毒有害气体泄漏挥发事件处置措施
（1）发生有毒有害气体泄漏事件后，事发企业应及时启动企业应急预案，切断泄露源，控制事件的影响范围。
（2）气体泄漏量较大，可能挥发至企业外环境时，企业立即向应急指挥部办公室汇报发生事件的情况，包括泄漏气体的性质、泄漏量、严重程度、可控能力、影响范围等，应急指挥部办公室接收到企业报告的事件情况后立刻上报应急指挥部。
（3）应急指挥部根据企业报告情况评估事件等级，根据评估结果进行应急响应，现场指挥部协调各处置小组组长指挥各自成员按职责对突发环境事件进行应急处置，并通知应急救援队伍支援。在核实现场情况的基础上，向上级汇报突发环境事件的情况，有必要时请求上级政府部门支援。
（4）专家组根据事件情况、发生地风向风速以及大气稳定度针对泄漏的气体选用合适的预测模型，分析可能受影响的范围和程度。
（5）根据预测的范围和程度，确定需要疏散的人员和疏散路线。根据污染物的性质，事件类型、可控性、严重程度和影响范围，风向和风速，结合事发企业事业单位的环境应急预案做出应急响应工作。应急处置小组应迅速组织查明泄漏源和泄漏原因，采取措施切断泄漏源，尽量减少泄漏量。
（6）根据污染物的类型和泄漏量，采取相应降低污染物危害的措施。利用高压水枪，在向有害物喷射雾状水稀释并覆盖污染物，加速气体向高空扩散；对于可燃物，也可以在现场施放大量水蒸汽或氮气，破坏燃烧条件；对于液体泄漏，为降低物料向大气中的蒸发速度，可用泡沫或其它覆盖物品覆盖外泄的料，在其表面形成覆盖层，抑制其蒸发；对于部分遇湿易挥发的物质，消防人员需佩戴防毒面具、穿全身消防服，在上风向灭火。灭火剂:干粉、砂土。禁止用二氧化碳和酸碱灭火剂灭火。对于酸性物质的泄漏，用砂士、干燥石灰或苏打灰混合，也可用大量水冲洗，挥发的酸性气体应及时喷洒苏打水处理。
5.4.1.2 易燃物质火灾、燃烧、爆炸应急处置措施
（1）隔离事发地点周围易燃可燃物品控制火势，火灾蔓延扩大，周围人员疏散至区域；
（2）应急处置队伍穿戴好防护设备后利用公共区域的消防水带、消防车、灭火器等设施灭火，及时通知当地的消防部门进行灭火；
（3）就近利用企业的污水处理设施对消防废水进行处理，或利用槽罐车将消防废水运至其他污水处理设施处理达标后外排，将火灾过程中产生的沉渣进行清运无害化处理。
5.4.1.3 水污染事件应急处置措施
污染物进入雨水系统和附近地表水体视突发环境事件发展趋势采取的通用应急处置措施如下:
（1）应急处置人员应首先做好自身的防护工作，穿戴好相关的防护装置，时间切断突发环境事件产生污染物的污染源，尽可能减少物料流失，并对废水排放口、雨水排口进行封堵，必要时事发企业应紧急停产。
（2）应急指挥部宣布立即启动应急预案，现场指挥部协调各处置小组组长指挥各自成员按职责对突发环境事件进行应急处置。根据事发地点地形地貌、泄露物料的理化性质，依据污染扩散模型，确定合理警戒区域，划定紧急隔离带。
（3）根据泄漏污染物的去向，在污水流经途径的关键节点位置用沙包封堵，尽可能将泄漏的污染物拦截在地面上，减少污染物进入地表水的量。
（4）若污染物通过管网或地面漫流进入区域地表水系统，则应落实“南阳实践”要求，采取“以空间换时间，以时间保”的思路，在下游水体中采取筑坝的方式拦截受污染的河水，以减少污染物扩散范围，减轻对水体的污染。
（5）就近利用企业的污水处理设施对处理事故产生的污水进行处理，或利用槽罐车将污水运至其他污水处理设施处理达标后外排。
（6）在污染物进入地表水体断面的上下游进行水质环境监测。
（7）如地表水环境监测结果出现超标，应及时通知周边居民，禁止使用相关水资源，并在水体周边醒目位置设置临时警示牌。
（8）对应急处置过程中产生的污染物进行妥善处置。
（9）若饮用水水源被污染，应全面启动水源地防控措施，加密监测点和频次，采取隔离污水、治理污染、调水稀释、停止供水、启用备用水源等方法尽快消除污染威胁。同时与上下游水厂联系人取得联系，启动水厂应急预案，并通知相关居民停止取水、用水。通知下游供水企业停水或采取保护措施。
（10）若未经处理的废水进入雨水管网，可将截流在管网内的污水通过泵排放至相应的废水收集池内；若污水流出事发企业厂区外，估算进入雨水管网的污水总量，及时关闭下游距离近的市政雨水管网闸阀。
5.4.1.4 暴雨引发环境事件应急处置措施
（1）暴雨期间风险源责任单位应安排人员对库房内和原料堆场进行定期巡视，排水设施要完好并做好记录，发现渗、漏水等异常情况，立即向上级主管部门报告。
（2）专家组需及时分析和预测部暴雨可能带来的后果，预先采取有针对性地措施进行防范。
（3）启动对应的应急对策，必要时停止一切生产。
（4）保障雨水排水设施完好，雨水倒灌进入污水处理设施和用水设施，必要时关闭主要设施出水阀门，对低洼地段和积水区域及时安排用潜水泵抽水。
（5）环境监测人员负责事故单位雨水排放口和可能受影响水域，进行跟踪、采样、分析，及时掌握水质情况。
5.4.1.5 公路运输突发环境事件应急处置措施
应急指挥部办公室收到发生公路运输突发环境事件的报告后，值班员核实事件发生地点、事故类型及事故风险物质；事件确认后，值班员应立即电话报告应急指挥部主要成员，各应急处置队伍根据现场实际情况和事故的大小及发展态势分级启动应急响应程序，采取相应的现场处置措施；
（1）风险物质泄漏现场应急处置措施:
1) 确认发生风险物质泄漏事件后，根据泄漏风险物质性质、事故点地形地貌、气象条件，依据污染扩散模型，确定合理警戒区域，划定紧急隔离带。无关人员进入事发区域，实行交通管制。
2) 现场应急处理人员根据泄漏情况采取适当的切断泄漏源的措施，若为运输车辆侧翻导致的泄漏，应利用吊车将运输车辆扶正后采用木楔、外封式堵漏袋等方式进行堵漏。
3) 根据查明泄漏污染物的去向，对污水流经途径的关键节点位置进行截断，用沙包封堵污染物进入雨水系统周围的沟渠或雨水井，尽可能将污染物限制在事发地点附近低洼处或雨水管网内，或减少污染物进入地表水的量；
4) 环境风险物质及消防废水流入雨水管网，根据雨水分区情况和雨水进入区域地表水系统排放口分布情况，用沙袋堵住雨水进入区域地表水系统排放口，对污染物进行拦截；
5) 对截留在雨水系统的污染物进行应急处置，必要时利用槽罐车将污水送至污水处理厂或有处理资质的单位处理；
6) 如污染物进入市政污水管网系统，则通知污水处理厂，调整各污水处理厂工艺运行参数和剂投加量，直到调整系统运行出水达标。
7) 如未妥善处理污染物通过雨水管网流入到外环境水体，量少的可以自然稀释，如果污水泄漏量很大，则应及时通知下游等，并在地表水体布置处理措施，在下游不同距离多级设置污水拦截设施。
（2）火灾爆炸现场应急处置措施:
1) 确认发生火灾爆炸事件后，在事发点附近区域设立警戒区，无关人员进入事发区域；现场指挥部通知各应急处置队伍集结投入灭火行动，若事故现场继续蔓延扩大，按应急指挥人员要求，通知当地消防部门进行灭火，并派人接应支援；
2) 消防部门及时到达时，根据消防部门人员的指示和安排，企业有关人员配合开展灭火或污染防治行动，救援人员应佩戴正压式呼吸器，开展应急灭火行动。
3) 根据事故发生地地形地势，判断消防废水流动方向，将消防废水引至附近较低洼地带，待事后抽走处置。
5.4.1.6 饮用水水源地突发环境事件应急处置措施
饮用水水源地突发环境事件指饮用水水源地因固定源、流动源、非点源以及水华灾害等事件情景所导致的水源地突发环境事件的预防、预警、控制和应急处置。具体包括:
（1）固定源突发环境事件:可能发生突发环境事件的排放污染物企业事业单位，生产、储存、运输、使用危险化学品的企业，产生、收集、贮存、运输、利用、处置危险废物的企业，以及尾矿库等固定源，因自然灾害、生产事故、违法排污等原因，导致水源地风险物质直接或间接排入水源保护区或其上游连接水体，造成水质污染的事件。
（2）流动源突发环境事件:在公路或水路运输过程中，由于交通事故等原因，导致油品、化学品或其他有毒有害物质进入水源保护区或其上游连接水体，造成水质污染的事件。
（3）非点源突发环境事件:主要包括以下两种情形:一是暴雨冲刷畜禽养殖废物、农田或果园土壤，导致大量细菌、农、化肥等随地表或地下径流进入水源保护区或其上游连接水体，造成水质污染的事件；二是闸坝调控等原因，导致坝前污水短期内集中排放造成水源保护区或其上游连接水体水质污染的事件。
（4）水华灾害环境事件:封闭型或半封闭型的水域（湖泊、水库）在营养条件、水动力条件、光热条件等适宜情况下，浮游藻类大量繁殖并聚集，使得水体度发生变化、水体溶氧降低、藻类厌氧分解产生异味或毒性物质，导致水华灾害的事件。
（5）其它突发事件:因自然（如干旱、洪水、泥石流、季节性断流等）和人为破坏因素（如蓄意等）造成饮用水源污染，不能满足正常供水需求的突发性环境事件。
当饮用水水源地突发环境事件发生时，有关部门应及时、主动、有效地进行先期处置，果断切断污染源，污染蔓延，减轻或者消除污染危害，全力控制事态。不明污染源头的，各相关职能部门要立即开展污染来源排查，通过特征污染物筛查、风险源现场调查、重点监测、逆向溯源等方式，尽快确定污染来源，责任单位立即采取风险防范措施；通报可能受到污染危害的单位和居民，并及时报告事件和有关先期处置情况。各应急处置队伍按照以下要求开展先期处置:
（1）污染处置组查明基本情况（污染物种类、数量、泄漏源头、扩散范围、主要危害等），在确保自身的情况下，可选择采取隔离、堵漏、转移、吸附围拦、打捞、扰动、氧化、沉淀、投加菌群、、引流等方法进行处置，在短时间内完成污染物的削减工作，降低污染物浓度和影响程度。全面监控并妥善处置治污载体，发生二次污染。
（2）应急监测组开展应急现场监测工作，根据泄漏和扩散情况以及发展态势，并综合考虑溪流、沟渠分布，判断扩散方向和速度，在各关键控制点开展水质、土壤、大气采样监测，跟踪水质变化情况，作为应急指挥部决策的重要依据。根据监测数据和现场调查，向应急指挥部建议设立污染警戒区域（划定禁止取水区域或居住区域），并根据指挥部的指示向社会发布。
（3）污染处置组实施交通管制、疏散人群、保护高危人群等措施，保护公众生命与身体健康。若为化学品车辆泄漏事故，应迅速处置事故车辆，组织人员疏散，在事故现场划定隔离区域，并设立警戒线，无关人员及车辆进入。同时在水库或溪流的污染区岸边设置警示标志，附近村民误饮污染水和捞食死鱼、动物死尸。
（4）污染处置组根据应急监测组反馈的信息和县指挥部发布的指令，准备执行开放闸作业，控制污染水外流。如取水口水质受到污染，县指挥部应及时通知取水单位采取应急措施，采取吸附、、过滤消除等深度处理净化水质，停水、减压供水、改路供水，启用备用水源等应急处置措施，保障下游居民饮用水的。
（5）医学救援组到达后首先查明有无受伤或中毒人员，并对伤员进行现场紧急救护，对伤势较重者送到就近医院抢救，同时密切关注整个事件处置过程中现场人员出现的不良反应，一旦发现及时检查医治。
（6）应急保障组及社会稳定组根据事态发展和县指挥部要求，负责对自来水供应进行科学合理调度，对全区的桶装水、矿泉水、纯净水和备用水源进行统一调配，停止建筑、洗车、绿化、娱乐、洗浴等行业用水，限制直至关闭工业用水，优先居民生活及主要公共场所设施用水，并合理调配洒水车、消防车等车辆为居民送水；对取用井水等自备水源单位的供水，加强水质监测，确保饮用水；商务、市监等部门积组织瓶装水的生产和供应，物价、市场管理等部门加强市场监管、稳定物价，避免引起群众的恐慌。
（7）新闻宣传组根据县指挥部的意见向社会发布污染水源和应急处置进展情况，并作社会动员，恐慌，必要时通过各种媒体通知单位和居民及时做好应急储水工作，开展节水知识宣传。当有不良舆情扩散传播时，要及时发布正面宣传报道，安抚群众恐慌心理。在让社会知晓突发事件的情况下，联合公安等部门对散布网络不利舆情事件进行立案调查，对别有用心扰乱社会秩序的不法分子进行处罚，控制网络不利舆情扩散传播，维护社会稳定。
5.4.1.7 污水处理厂事故应急处置措施
污水处理厂事故主要包含出水水质超标和进水水量超量。
（1）出水水质超标事故
污水处理厂出水水质超标一般由于进水水质超标、处理工艺不达标等。解决方案一般是从工艺角度考虑，如增加废水的停留时间等。同时排查上游企业内部污水处理站运行情况，必要时要求相关企业减少排污或停止排污。
（2）进水水量超量
污水处理厂内建设事故缓冲池，超量废水排入事故缓冲池，同时通知相关企业降低废水排放量，必要时要求相关企业停止排污。
污水处理厂事故时的应急处置措施如下:
（1）切断污染源，控制污染物扩散
立即关闭污水处理厂排污口，停止废水事故排放，利用调节池对来水进行暂时收容，并通知上游排污企业加强废水监控和应急收容，减少污水处理厂来水量，通知各中水用户暂停取水。
（2）切断扩散途径、污染物的收集、污染物的处理
1）立即联系运营公司和维修单位对故障设施进行修理修复。
2）在排污口、排污口下游100m及下游1km等设置若干活性炭过滤坝（活性炭过滤坝可根据实际情况酌情增加），向排污口下游投加适量石灰和硫化钠，对废水中的重金属污染物进行处理；必要时周边湖泊、上游河流开闸放水、稀释排污口水质。
3）根据现场应急监测结果，如有必要时候委托有资质的环境修复单位对下游受污染的底泥进行清淤修复。
5.4.1.8 固废未妥善处理引发的次生污染突发环境风险应急处置措施
（1）对固废和污染的土壤进行清理，集中后送资质单位处理；
（2）对于固废运输、装卸、储存未妥善处理导致污染物进入雨水系统和地表水体的突发环境事件应急处置，按水污染事件应急处置要求进行。
5.4.1.9 复合型突发环境事件应急处置措施
当重大危险源发生泄漏、火灾、爆炸等情形结合端天气耦合条件下形成的复合突发环境事件情景，会对大气、地表水、土壤等造成污染。其应急措施如下:
（1）由污染处置组根据事故情景分为大气环境风险源控制小组、水环境风险源控制小组、土壤环境风险源控制小组，各控制小组进行针对性抢险救援；
（2）应急保障组向各控制小组提供的污染控制物资及人员防护用具；
（3）立即就各风险源位置拟定警戒区域，疏散人员；
（4）当风险事故超出可控制范围，立即上报应急救援指挥部，请求外部救援。
5.4.1.10 危险区、区的划定
发生一般的突发环境事件，以事故地为中心，将距事故点中心周边200m以内的区域划分为危险区，危险区边缘以外为区。
发生较大级的突发环境事件，以事故地为中心，将距事故点中心周边500m以内的区城划分为危险区，危险区边缘以外为区。
事故危险、危害核心区初步划定后，根据环境监测数据、现场调查情况和当时气象资料，由污染处置组确定扩大或缩小危险区范围，报指挥部批准后执行。
对划定的危险区，按边缘以黄黑带设置警戒隔离区域，并设警戒哨，限制人员、车辆进入。
对事故现场周边区域的道路实施交通管制，除救护车、消防车、抢险物资运输车、指挥车辆可进入事故隔离区内，其它车辆均不得进入事故隔离区内；对原停留在隔离区内的车辆实施疏导。
县指挥部根据突发环境事件影响及当时的气象、地理环境、人员密集度等，划定现场警戒、交通管制和重点防护区域，确定受威胁人员疏散的方式和途径，有组织、有秩序地及时疏散转移受威胁人员和可能受影响地区居民，确保生命。妥善做好转移人员安置工作，保障受事件影响人员的基本生活需求与必要医疗条件。
5.4.2.1 人员清点、撤离方式、方法
确定避难方式是就地避难还是疏散主要考虑两个因素:
（1）避难地所处区域空气中有毒物质浓度，如果避难地所处区域有毒物质浓度高于临界浓度值，则采取就地避难是危险的，应考虑应急疏散。
（2）允许的疏散时间和需要的疏散时间。
现场指挥部有权做出实施紧急疏散、撤离命令。突发环境事件影响区域内人员执行紧急疏散、撤离命令。企业应急救援对应设立警戒区域，在疏散和撤离的路线上可设立指示牌，指明方向，指导警戒区内的员工有序的离开。警戒区域内的负责人应清点撤离人员，检查确认区域内确人滞留后，向指挥部汇报撤离人数，进行撤离。人员不要在低洼处滞留；要查清是否有人留在泄漏区或污染区。如有没有及时撤离人员，应由配戴适宜防护装备的抢险队员两人进入现场搜寻，并实施救助。
5.4.2.2 撤离路线
应根据现场设施及周围情况、化学品的性质和危害程度，以及当时的风向等气象条件向应急指挥部作详细报告后确定疏散、撤离路线。疏散警报响起，首先判断风向，原则上往上风处疏散，若气体泄漏源为上风处时，宜向与风向垂直之方向疏散（以宽度疏散）。沿道路有序疏散，尽量选择主要交通干道通行，人员过多堵塞道路。
为使疏散计划执行期间人员能从容撤离灾区，警戒疏导人员要了解撤离人员状况，采取必要之应变措施，根据应急疏散路线按照指示迅速撤离、疏散至集合地点并清点人数。
5.4.2.3 撤离疏散后的报告
事故现场、非事故现场和周边区域的人员按命令撤离、疏散至地点集中后，由相关负责人清点、统计人数后，及时向指挥部报告。
县指挥部迅速组织当地医疗资源和力量，对伤病员进行诊断治疗，根据需要及时、地将重症伤病员转运到有条件的医疗机构加强救治。指导和协助开展受污染人员的去污洗消工作，提出保护公众健康的措施建议。视情况增派医疗卫生专家和卫生应急队伍，调配急需医物资，支持事发地医学救援工作，做好受影响人员的心理援助及安抚工作。做好受影响人员的心理援助及安抚工作。在医院急救人员到来之前，医学救援组应对受伤人员做以下基本救治:
（1）如吸入有毒气体，迅速脱离至空气新鲜处，保持呼吸道畅通。如呼吸困难，给吸氧。如呼吸停止，立刻进行人工呼吸。
（2）如接触到有毒物质，则迅速脱离至空气新鲜处，脱去被污染的衣着，用肥皂水和大量清水冲洗皮肤，眼睛接触应使用生理盐水和流动清水冲洗眼睛部位。
（3）若发生火灾后有人窒息或呼吸困难，要尽快清除堵塞于呼吸道中的异物。用手将泥土、血凝块等异物取出，紧急情况下可进行口对口吸痰。发生呼吸停止时，应立即进行人工呼吸。对胸部创伤伤员，禁止采用压胸人工呼吸法，急救时应用口对口（或口对鼻）人工呼吸法。对呼吸困难或有可能窒息的伤员，一般不宜采取平仰卧位。应根据伤情，采取半卧位或侧卧位，以防加重呼吸困难。对开放性气胸者，应立即用大纱布铺于伤口上，加压包扎，勿使漏气。
（4）抗休克处理:发生休克的人多会出现面苍白、四肢冰冷、额部出冷汗、脉搏细弱、呼吸浅快或失去知觉等症状。急救时，应迅速将伤员平卧、保暖，查看伤情，及时进行止血、包扎、固定伤肢、减少疼痛等处理。
（5）现场急救注意事项:选择有利地形设置急救点；做好自身及伤病员的个体防护；发生继发性损害；应至少2～3人为一组集体行动，以便相互照应。
（6）烧伤伤员转院过程中，对轻中度烧伤，一般可以及时转送，但对重度伤员，因伤后早期易发生休克，故对此类伤员，应首先及时建立静脉补液通道，给予有效的液体复苏，能有效预防休克的发生或及时纠正休克，减轻创面损伤程度，降低烧伤并发症的发生率。及时将伤者送到急救中心进行救治。
现场处置人员应根据环境事故的特点，配备相应的防护装备，采取防护措施，严格执行应急人员出入事发现场程序。具体防护措施如下:
（1）呼吸系统的防护:戴防毒面具；
（2）眼睛防护:戴防护镜；
（3）防护服:穿防护服；
（4）手防护:戴橡胶手套；
（5）参加救护、救援人员按规定着装，佩带戴好个人防护器具，并注意风向，在昏暗地区救援时，应配备有照明灯具。
县指挥部应加强大气、水体、土壤的应急监测工作。依据《突发环境事件应急监测技术规范》（HJ 589-2021）要求，结合突发环境事件污染物种类、性质以及自然、社会环境状况等，制定科学有效的应急监测方案。
5.4.5.1 应急监测工作原则
（1）及时性
接到应急响应指令时，应做好相应记录并立即启动应急监测预案，开展应急监测工作。
（2）可行性
突发环境事件发生后，应急监测队伍应立即按照相关预案，在确保的前提下，开展应急监测工作。突发环境事件应急监测预案内容包括但不限于总则、组织体系、应急程序、保障措施、附则、附件等部分，具体内容由生态环境监测机构根据自身组织管理方式细化。
（3）代表性
开展应急监测工作，应尽可能以的时空代表性的监测结果，尽快为突发环境事件应急决策提供依据。在污染态势初步判别阶段，应以时间确定污染物种类、监测项目、大致污染范围及程度为工作原则；在跟踪监测阶段，应以获取污染物浓度及其动态变化信息为工作原则。
5.4.5.2 监测机构
发生突发环境事件时，应急监测组人员应迅速联系环境监测中心或社会第三方监测机构请求应急监测，应急监测人员赶赴现场后根据实际情况，迅速按照拟定的监测方案（包括监测布点、频次、项目和方法等）开展针对突发环境事件的应急监测工作，监测过程中可根据事态发展情况适当调整监测点位。
5.4.5.3 监测项目确定
优先选择特征污染物和主要污染因子作为监测项目，根据污染事件的性质和环境污染状况确认在环境中积累较多、对环境危害较大、影响范围广、毒性较强的污染物，或者为污染事件对环境造成严重不良影响的特定项目，并根据污染物性质及污染趋势，按可行性原则进行确定。
对于已知污染物，根据已知污染物及其可能存在的伴生物质，以及可能在环境中反应生成的衍生污染物或次生污染物等确定主要监测项目。对固定污染源引发的突发环境事件，了解引发突发环境事件的位置、设备、材料、产品等信息，采集有代表性的污染源样品，确定特征污染物和监测项目。对移动污染源引发的突发环境事件，了解运输危险化学品或危险废物的名称、数量、来源、生产或使用单位，同时采集有代表性的污染源样品，确定特征污染物和监测项目。
对于未知污染物，可根据现场调查结果，结合突发环境事件现场的一些特征及感官判断，如气味、颜、挥发性、遇水的反应特性、人员或动植物的中毒反应症状及对周围生态环境的影响，初步判定特征污染物和监测项目。可通过事件现场周围可能产生污染的排放源的生产、运输、及记录，初步判定特征污染物和监测项目。可利用相关区域或流域的环境自动监测站和污染源在线监测系统等现有仪器设备的监测结果，初步判定特征污染物和监测项目。可通过现场采样分析，包括采集有代表性的污染源样品，利用检测试纸、检测管、便携式监测仪器、流动式监测平台等现场监测手段，初步判定特征污染物和监测项目。若现场监测方法的定性结果为检出，需进一步采用不同原理的其他方法进行确现场采集样品（包括有代表性的污染源样品）送实验室分析，确定特征污染物和监测项目。
5.4.5.4 监测方法的确定
可采用检测试纸、检测管、便携式监测设备、移动监测设备（车载式、无人机、无人船）及遥感等多手段监测技术方法；现有的空气自动监测站、水质自动监测站和污染源在线监测系统等在用的监测方法；现行实验室分析方法。针对突发环境事件处置过程中产生的各主要污染物推荐的应急监测方法见表 5 1。
5.4.5.5 布点原则
采样断面（点）的设置一般以突发环境事件发生地及可能受影响的环境区域为主，同时应注重人群和生活环境、事件发生地周围重要生态环境保护目标及环境敏感点，重点关注对饮用水水源地、人群活动区域的空气、农田土壤、自然保护区、风景名胜区及其他需要保护的区域的影响，合理设置监测断面（点），判断污染团（带）位置、反映污染变化趋势、了解应急处置效果。应根据突发环境事件应急处置情况动态及时更新调整布设点位。
对被突发环境事件所污染的地表水、大气、土壤和地下水应设置对照断面（点）、控制断面（点），对地表水和地下水还应设置削减断面（点），布点要确保能够获取的有代表性的信息，同时应考虑采样的性和可行性。
对突发环境事件固定污染源和移动污染源的应急监测，应根据现场的具体情况布设采样断面（点）。
5.4.5.6 监测频次
监测频次主要根据现场污染状况确定。事件刚发生时，监测频次可适当增加，待摸清污染变化规律后，可适当减少监测频次。依据不同的环境区域功能和现场具体污染状况，力求以合理的监测频次，取得具有时空代表性的监测结果，做到既有代表性、能满足应急工作要求，又切实可行。
5.4.5.7 应急监测计划
（1）大气环境应急监测计划
监测项目:事故发生后扩散到大气中的有毒有害物质，主要为NOx、SO2、CO、非甲烷总烃、氨、HCl、苯系物、VOCs等；
监测布点:根据事故发生时风向，在事故源周围500m~5000m范围进行布点；
监测时间:事故发生后对有毒有害物质进行连续监测，直到各监测点有毒有害物质达到相关环境标准。
（2）地表水环境应急监测计划
监测项目:事故发生后进入雨水、污水管线的有毒有害物质，主要为pH、SS、CODCr、NH3-N、石油类及其他特征污染物等；
监测布点:事故发生地附近河流、污水处理厂排放口、排放口下游水体；
监测时间:对污水团过境地点每2h监测一次，污水团上游每天监测2次，直到污水团过境地点有毒有害物质浓度达到相关环境标准。
（3）土壤环境应急监测计划
监测项目:事故发生后进入土壤的有毒有害物质，主要为pH、石油类、硫化物及其他特征污染物等；
监测布点:事故发生地未污染区域设置2~3个背景点，事故发生地土壤污染区域、该区域周边10米外的土壤随机布点（少5个监测点）。
采样深度:确定的受污染的深度1米以下范围内，根据实际情况可增加深度。
监测频次:不同深度垂直取样。
5.4.5.8 样品管理要求
（1）样品标识
样品应以一定的方法进行分类，如可按环境要素或其他方法进行分类，并在样品标签和现场采样记录单上记录相应的唯一性标识。样品标识至少应包含样品编号、采样点位、监测项目、采样时间、采样人等信息。有毒有害、易燃易爆样品是污染源样品应用标识（如图案、文字）加以注明。
（2）样品保存
除现场测定项目外，对需送实验室进行分析的样品，根据不同样品的性状和监测项目，应选择合适的存放容器和样品保存方法。尽量避免样品在保存和运输过程中发生变化。对易燃易爆及有毒有害的应急样品，应分类存放，。
（3）样品运送和交接
对需送实验室进行分析的样品，应及时送实验室进行分析，避免样品在保存和运输过程中发生变化。对含有易挥发性的物质或高温不稳定物质的样品，应低温保存运输。样品运输前应将样品容器内、外盖（塞）盖（塞）紧。装箱时应分隔以防样品破损和倒翻。每个样品箱内应有相应的样品采样记录单或送样清单，应有专门人员运送样品并填写样品交接记录单。对有毒有害、易燃易爆或性状不明的应急监测样品，是污染源样品，送样人员在送实验室时应告知接样人员样品的危险性，接样人员同时向实验室人员说明样品的危险性，实验室分析人员在分析时应注意。
（4）样品处置
样品应在保存期内留存。对含有剧毒或大量有毒、有害化合物的样品，是污染源样品，应按相关要求妥善处置。
5.4.5.9 评价标准或要求
突发环境事件应急监测按照相关生态环境质量标准、生态环境风险管控标准、污染物排放标准或其他相关标准进行评价。若所监测项目尚无评价标准，可参考国内外及组织的相关评价标准或要求，并在方案和报告中注明。
监测方案经应急指挥部同意后由应急监测组调配应急监测设备、车辆，及时准确监测，为突发环境事件应急决策提供依据。视污染物的扩散情况和监测结果的变化趋势，经咨询专家，可对监测方案进行适时调整。
5.4.5.10 监测结果报告
监测数据应及时向应急指挥部和大同市生态环境浑源分汇报，应急指挥部据此制定并实施各类应急措施，同时公开向社会发布环境应急监测数据。
突发环境事件应急监测报告应包括以下内容:
①标题名称。
②监测单位名称和地址，进行测试的地点。
③监测报告的唯一性编号和每一页与总页数的标志。
④事故发生的时间、地点，监测断面（点位）示意图，发生原因，污染来源，主要污染物质，污染范围，必要的水文气象参数等。
⑤所用方法的标志（名称和编号）。
⑥样品的描述、状态和明确的标志。
⑦样品采样日期、接收日期、检测日期。
⑧检测结果和结果评价（必要时）。
⑨审核人、授权签字人签字（已通过计量认/实验室的监测项目）等。
⑩计量认/实验室标志（已通过计量认/实验室的监测项目）。
5.4.5.11 应急监测终止
当应急指挥部终止应急响应或批准应急监测终止建议时，方可终止应急监测。凡符合下列情形之一的，可向应急组织指挥机构提出应急监测终止建议:
（1）对于突发水环境事件，近一次应急监测方案中，监测点位特征污染物的48h连续监测结果均达到评价标准或要求；对于其他突发环境事件，近一次应急监测方案中监测断面（点位）特征污染物的连续3次以上监测结果均达到评价标准或要求；
（2）对于突发水环境事件，近一次应急监测方案中，监测点位特征污染物的48h连续监测结果均恢复到本底值或背景点位水平；对于其他突发环境事件，近一次应急监测方案中监测断面（点位）特征污染物的连续3次以上监测结果均恢复到本底值或背景点位水平；
（3）专家组认为可以终止的情形。
县指挥部密切关注受事件影响地区市场供应情况及公众反应，加强对重要生活品等商品的市场监管和调控。禁止或限制受污染食品和饮用水的生产、加工、流通和食用，防范因突发环境事件造成的集体中毒等。
县指挥部负责发布一般突发环境事件的信息。通过发新闻稿、接受记者采访、举行新闻发布会、组织专家解读等方式，借助电视、广播、报纸、互联网等媒介，主动、及时、客观向社会发布突发环境事件和应对工作信息，回应社会关切，澄清不实信息，正确引导社会舆论。信息发布内容包括事件原因、污染程度、影响范围、应对措施、需要公众配合采取的措施、公众防范常识和事件调查处理进展情况等。发生跨县突发环境事件时，应向邻县通报应急处置情况，同时上报市生态环境，及时按要求和权限发布信息。新闻信息发布按照当地人民政府的信息发布办法执行，并做好舆论引导和舆情分析工作。
县指挥部要加强受影响地区社会治安管理，严厉打击借机传播谣言制造社会恐慌、哄抢救灾物资等违法犯罪行为；加强转移人员安置点、救灾物资存放点等重点地区治安管控；做好受影响人员与涉事单位，与县人民政府及有关部门矛盾纠纷化解和法律服务工作，出现群体性事件，维护社会稳定。
符合下列条件之一的，即满足响应终止条件:
（1）事件现场得到控制，事件条件已经消除。
（2）污染源的泄漏或释放已降至规定限值以内。
（3）事件造成的危害已经被消除，无继发可能。
（4）事件现场的各种应急处置行动已无继续的必要。
（5）采取必要的防护措施以保护公众免受再次危害，并使事件可能引起的中长期影响趋于合理且尽量低的水平。
（1）现场指挥部确认终止时机，或事件责任单位提出，经应急指挥部指挥长批准；
（2）现场指挥部向所属各应急救援队伍下达响应终止命令；
（3）新闻宣传组通知各救援力量、相关部门、企业（或事业）单位、周边社区、村镇、社会关注区及人员事件危险已解除，救援行动结束。
（4）应急救援办公室按指挥部指示，向上级主管部门和当地政府报告救援结束及应急处置结果，撰写信息通报稿并在指挥部授权下发布。
（5）污染处置组对事故救援现场进行清理，协助企业（或事业）单位对现场中暴露的工作人员、应急行动人员和受污染设备进行清洁净化，将应急物资集中并入库；
（6）应急保障组负责归还并统计应急物资的使用情况。
（7）综合组撤销警戒区域，取消警戒标识，通知并组织疏散的群众回归。
（8）医学救援组继续照顾并抚慰事故过程中受伤的群众或救援人员，直至伤员康复出院。
（9）调查评估组对事故企业和地区进行跟踪调查。
（10）应急监测组配合监测单位进行跟踪监测，直到其它补救措施无需继续进行为止，并撰写此次事故应急监测报告。
（1）通知事件影响区域内各企业以及附近居民，环境事件已经得到控制，事件的威胁已解除。
（2）对事件处置过程中暴露的人员、应急行动人员和受污染设备进行清洁净化。
（3）对于此次发生的环境事件，事故责任主体对起因、过程和结果进行总结，并由事故责任主体分别向浑源县人民政府和大同市生态环境浑源分做详细报告。
应急响应终止后，按照原环境保护部制定的《突发环境事件损害评估办法》、《突发环境事件调查处理办法》，重大突发环境事件和重大突发环境事件由省重大生态环境事件应急指挥部组织有关部门及专家，市、县（区）级人民政府积配合组织实施。较大突发环境事件和一般突发环境事件由市生态环境事件应急指挥部组织有关部门及专家，会同事发地县（区）级人民政府组织实施；根据环境应急过程记录、现场各应急救援队伍的总结报告、现场应急救援指挥部掌握的应急情况、环境应急救援行动的实际效果及产生的社会影响、公众的反应等，客观、公正、全面、及时地开展突发环境事件应急处置工作评估，并编写评估总结报告。评估总结报告应包括以下主要内容:
（1）环境事件等级、发生原因及造成的影响；
（2）环境应急任务完成情况；
（3）是否符合保护公众、保护环境的总要求；
（4）采取的重要防护措施与方法是否得当；
（5）出动环境应急队伍的规模、仪器装备的使用、环境应急程度与速度是否与任务相适应；
（6）环境应急处置中对利益与代价、风险、困难关系的处理是否科学合理；
（7）发布的公告及公众信息的内容是否真实，时机是否得当，对公众心理产生了何种影响；
（8）需要得出的其他结论等。
突发环境事件应急处置工作结束后，县指挥部各成员单位配合各级相关部门开展事件调查工作，确定突发环境事件的因和性质，评估污染事件的危害范围和危险程度，查明人员伤亡情况、影响和损失评估、遗留待解决的问题等。
县人民政府要组织专家对受影响地区进行科学评估，及时制定补助、补偿、抚慰、抚恤、安置和生态环境恢复等善后工作方案并组织实施。
（1）做好受灾人员及家属的救治抚恤工作，做好精神安抚工作，对受伤严重人员继续治疗，以人心稳定，投入正常生产。
（2）对周围单位及群众受伤人员，妥善救治受伤人员、妥善安置死亡人员，做好家属抚恤工作，及时做好伤害赔偿工作。
（3）协调社会力量，恢复正常生产、生活秩序。
（1）组织物资供应部门对调用物资进行及时清理。
（2）清查事故造成的环境损失，对环境损失进行补偿，对进行环境治理与恢复所需费用进行支付。
（3）清查事故造成的经济损失，根据国家进行补偿。
（1）整理救助财务，制定补偿发放方案，及时发放。
（2）协调保险公司，及时对损失者进行保险理赔。
（3）制定恢复生产方案，核算并筹集恢复生产所需资金。
环境恢复是指通过适宜的手段、采取正确的措施，将被污染的土壤、水体、植被、设备等污染承载体的污染物去除，达到环境本底值要求的一系列活动的总称。
环境恢复遵循以下原则:迅速、彻底的清除现场设施、土壤、水体内残留的污染物，且不增加新的污染，不产生二次污染。
对于物质泄漏后的清洁净化和恢复的方法通常有以下几种:
（1）稀释，用水或其他物质稀释现场和环境中的物料，稀释后的溶液应回收至污水处理站处理。
（2）处理，主要是针对应急人员在应急行动工作人员使用过的衣服、工具、设备进行处理。当应急人员从受污染区撤出时，他们的受污染的衣物或其他物品要集中储藏，作为危险废物处理。
（3）吸附，可使用活性炭吸收污染物，但吸附剂使用后要回收后以适当的方式进行处理。
根据事故发生地点、污染物的性质和当时气象条件，明确事故泄漏物污染的环境区域。由应急监测组对污染区域进行现场检测分析，明确环境中涉及的污染物、污染的程度、气象条件和当地的人口等因素，制定、有效、对环境影响小的恢复方案。通过环境恢复方案的实施，使污染物浓度降低至可接受水平。
根据现场实际情况，对受污染的区域进行隔离，组织有关人员按照洗消程序和标准结合污染物的理化性质进行洗消。
对液体物质泄漏，可用吸附垫、活性炭等具有吸附能力的物质进行物理处置；
对污染的空气可暂时封闭污染区，依靠日晒、雨淋、通风等措施使有毒有害气体挥发或降解。
对被污染的土壤可将表层土壤剥离装入容器，并按照危险废物管理处置要求进行合理处置，若环境不允许挖掘或清除大量土壤时，可使用物理、化学或生物方法消除，具体如下:
（1）对地表干封闭处理；
（2）地下水位高的地方使用注水法使水位上升，收集从地表溢出的水；
（3）让土壤保持休闲或通过翻耕促进蒸发的自然降解法。
县环境应急监测队伍、县消防救援大队、各国有企业应急救援队伍及其他相关方面应急救援队伍等力量，要积参加突发环境事件应急监测、应急处置与救援、调查处理等工作。县指挥部办公室要建立县级环境应急专家库，发挥专家组作用，为一般突发环境事件应急处置方案制定提供决策建议。县人民政府应加强环境应急管理机构和应急救援队伍能力建设，加强环境应急专家队伍建设和管理，加强应急监测培训，定期组织应急演练，提高突发环境事件响应及应急处置能力。
县指挥部成员单位按照职责分工，组织做好环境应急救援物资紧急生产、储备调拨和紧急配送工作，保障支援突发环境事件应急处置和环境恢复治理工作的需要。
县人民政府及其有关部门要加强应急物资储备，制定环境应急物资储备计划，建立应急物资储备库，组织应急物资的监管、生产、储存、更新、补充、调拨和紧急配送等工作。鼓励支持社会化应急物资储备。县生态环境主管部门要加强对当地环境应急物资储备信息的动态管理。
突发环境事件应急处置所需经费首先由事件责任单位承担。县政府对突发环境事件应急处置工作提供资金保障。
县门对突发环境事件财政应急保障资金的使用进行监管和评估。
县人民政府要建立健全突发环境事件应急通信保障体系，确保应急期间通信联络和信息传递需要。交通运输、铁路等部门要健全公路、水路、铁路紧急运输保障体系，负责组织提供应急响应所需的公路、水路、铁路运输保障。公安部门要加强应急交通管理，保障运送伤病员、应急救援人员、物资、装备、器材车辆的优先通行。
应急指挥部办公室负责落实与地方医疗卫生、职业病防治部门的应急医疗救援合作，落实急救箱品，急救器材的配备与更新。督促各企业事业单位落实急救箱品，急救器材的配备与更新。落实组织对应急队伍中的现场应急人员、对风险企业应急处置人员与医疗急救人员定期的医疗急救知识与技术的培训。
县人民政府要支持突发环境事件应急处置和监测技术、装备的研发，建立科学有效的环境应急指挥技术平台，实现信息综合集成、分析处理、污染评估的智能化和数字化，确保决策的科学性。有关监测机构应当按照应急需要加强技术保障建设，确保监测数据信息完整。
县指挥部各成员单位和县人民政府要对应急管理人员、执法人员和人民群众开展环境应急教育，宣传突发事件的预防、避险、自救、互救等常识，增强公众的防范意识，提高防范能力。
县指挥部各成员单位和各类环境风险源单位要制订落实环境应急救援及管理人员日常培训计划，提高其技能及应急处置能力。开展对社会应急救援者的招募、组织、培训，形成应急队伍、企业专兼职救援队伍和社会者共同参与的应急救援体系。
县指挥部及各成员单位、县人民政府、重点环境风险源单位应结合实际，有计划、有重点地按照应急预案及相关专项预案，组织不同类型的突发环境事件应急演练，加强各部门间的协同应对能力，提高防范和处置突发环境事件的技能，增强实战能力。县指挥部办公室每年至少组织一次预案演练，企业事业单位应急预案每两年至少演练一次。
县指挥部应明确区域分包责任制负责人，严格落实隐患排查与整改制度，将环境危险源监控监测、隐患排查、隐患整改等内容纳入考核制度，制定考核方案，切实增强负责人的责任意识与重视程度，降低突发环境事件的发生概率。
定期展开应急培训、应急救援教育宣传，并完善应急救援责任追究和奖惩等制度，应急人员按要求培训、演练，加强应急组织机构成员的应急能力，提高应急救援技术。
奖惩和责任追究制度:在事故应急救援工作中表现突出的人员，依据有关规定给予奖励；在事故应急救援工作中有不服从命令等行为的，按照有关规定，对有关责任人员，视情节和危害后果，对其行政处分。
（1）对应急救援队员进行统一的培训。培训的主要内容:
①了解、掌握突发环境事件应急救援预案内容；
②熟悉使用各类防护、救援器具，有针对性的培训各应急设备的使用方法；
③掌握如何展开突发环境事件现场抢救、救援及处置；
④掌握突发环境事件现场自我防护及监护措施。
⑤掌握如何疏散人群等。
采取的方式:课堂教学、综合讨论、现场讲解、模拟事故发生等。
培训时间:每季度不少于6小时。
（2）对应急监测人员等进行培训。培训的主要内容是:
①环境监测技术规范；
②应急监测的基本方法；
③便携式现场应急检测仪器的使用方法；
④特征污染物和常见污染物的监测方法；
⑤监测布点和频次基本原则；
⑥现场监测人员自身防护的要求；
⑦应急监测设备、耗材和试剂的日常维护和保养等。采取的方式:课堂教学、综合讨论等。
培训时间:每季度不少于6小时。
邀请应急救援相关领域专家，就突发环境事件应急指挥、决策、各部门配合等内容进行培训。
采取的方式:综合讨论、专家讲座等。
培训时间:每年1-2次。
定期对公众培训有关逃生、避难、个体防护的常识，加强与公众的交流，如发生突发环境事件，可以的组织疏散和应急救援。
针对疏散、个体防护等内容，向周边群众进行宣传，使事故波及到的区域对突发环境事件应急救援的基本程序、应该采取的措施等内容有全面了解。
采取的方式:口头宣传、应急救援知识讲座等。
培训时间:每年不少于2次。
通过预案的演练，充分明确相关部门与人员的职责，进一步缩短响应时间，提高应急指挥、协调和支援能力。
（1）组织指挥演练:由应急指挥部指挥长和各应急处置小组负责人分别按应急救援预案要求，以组织指挥的形式组织实施应急救援任务的演练。
（2）单项演练:由各应急处置小组各自开展的应急救援任务中的单项科目的演练；
（3）综合演练:由应急指挥部按应急救援预案要求，开展的全面演练；
结合实际情况，在确保演练效果的前提下，可采取多种形式，如推演、实战等。
（1）突发环境事件现场应急处置措施；
（2）大气污染事件保护目标的应急措施
（3）水污染事件保护目标的应急措施。
（4）通信及报警信号的联络；
（5）急救及医疗；
（6）及洗消处理；
（7）受污染空气监测与化验；
（8）防护指导，包括人员的个人防护及员工的自我防护；
（9）各种标志、设置警戒范围及人员控制；
（10）划定的隔离区内交通控制及管理；
（11）污染区域内人员的疏散撤离及人员清查；
（12）向上级报告情况及向周边通报情况；
（13）事故的善后工作。
（1）组织指挥演练由应急指挥部每年组织2次；
（2）单项演练由各应急处置小组每半年组织1次；
（3）综合演练由应急指挥部指挥长每年组织2次，一次为现场演练，一次为办公室推演。
应急指挥部和各部门经预案演练后应进行讲评和总结，及时发现事故应急救援预案中的问题，并从中找到改进的措施。
评估的内容有:
（1）通过演练发现的主要问题；
（2）对演练准备情况的评估；
（3）对预案有关程序、内容的建议和改进意见；
（4）在训练、防护器具、抢救设置等方面的改进意见；
（5）对演练指挥中心的意见等。
在突发环境事件应急救援工作中有下列表现之一的部门和个人，应给予表彰奖励；
（1）出完成突发环境事件应急处置任务，成绩显著的；
（2）对或挽救突发环境事件有功，使财产免受或者减少损失的；
（3）对事件应急准备与响应提出重大建议，实施的；
（4）有其他贡献的。
在突发环境事件应急工作中，有下列行为之一的，按照有关法律和规定，对有关责任人员视情节和危害后果，给予行政处分；构成犯罪的，依法追究刑事责任:
（1）不按突发环境事件应急预案进行救援，拒履行应急准备义务；
（2）不及时报告事件事实情况，延误处置时机；
（3）不服从应急救援指挥部的命令和指挥，在应急响应时临阵脱逃，借故逃避、逃匿，擅离职守，情节恶劣的；
（4）阻碍、干涉事件调查工作，拒调查取或者伪造、恶意破坏现场，作伪或指使他人作伪的；
（5）盗窃、贪污、挪用环境事件应急工作资金、装备和物资的；
（6）阻碍环境事件应急工作人员依法执行职务或者进行破坏活动的；
（7）散布谣言，扰乱社会秩序的；
（8）有其他对环境事件应急工作造成危害行为的。
突发环境事件:指由于污染物排放或自然灾害、生产事故等因素，导致污染物或放射性物质等有毒有害物质进入大气、水体、土壤等环境介质，突然造成或可能造成环境质量下降，危及公众身体健康和财产，或造成生态环境破坏，或造成重大社会影响，需要采取紧急措施予以应对的事件，主要包括大气污染、水体污染、土壤污染等突发性环境污染事件和辐射污染事件。
危险物质:指《危险化学品名录》和《剧毒化学品名录》中的物质和易燃易爆物品。
危险废物:指列入《国家危险废物名录》或者根据危险废物鉴别标准和危险废物鉴别技术规范认定的具有危险特性的固体废物。
环境风险源:指可能导致突发环境事件的污染源，以及生产、贮存、经营、使用、运输危险物质或产生、收集、利用、处置危险废物的场所、设备和装置。
环境敏感区:根据《建设项目环境影响评价分类管理名录》规定，指依法设立的各级各类自然、文化保护地，以及对建设项目的某类污染因子或者生态影响因子敏感的区域。
环境保护目标:指在突发环境事件应急中，需要保护的环境敏感区域中可能受到影响的对象。
环境事件:指由于违反环境保护法律法规的经济、社会活动与行为，以及由于意外因素的影响或不可抗拒的自然灾害等原因致使环境受到污染，生态系统受到干扰，人体健康受到危害，社会财富受到损失，造成不良社会影响的事件。
次生衍生事件:某一突发环境事件所派生或者因处置不当而引发的突发环境事件。
应急救援:指突发环境事件发生时，采取的消除、减少事件危害和事件恶化，大限度降低事件损失的措施。
应急监测:指在环境应急情况下，为发现和查明环境污染情况和污染范围而进行的环境监测，包括定点监测和动态监测。
恢复:指在突发环境事件的影响得到初步控制后，为使生产、生活和生态环境尽快恢复到正常状态而采取的措施或行动。
应急预案:指根据对可能发生的突发环境事件的类别、危害程度的预测，而制定的突发环境事件应急救援方案。要充分考虑现有物质、人员及环境风险源的具体条件，能及时、有效地统筹指导突发环境事件应急救援行动。
分类:指根据突发环境事件的发生过程、性质和机理，对不同突发环境事件划分的类别。
分级:指按照突发环境事件严重性、紧急程度及危害程度，对不同突发环境事件划分的级别。
应急演练:为检验应急预案的有效性、应急准备的完善性、应急响应能力的适应性和应急人员的协同性而进行的一种模拟应急响应的实践活动。根据所涉及的内容和范围的不同，可分为单项演练、综合演练和指挥中心、现场应急组织联合进行的联合演练。
本预案自发布之日起实施。2016年11月20日浑源县人民政府印发的《浑源县2016年突发环境事件应急预案》（浑政发〔2016〕59号）同时废止。
本预案由大同市生态环境浑源分负责解释。
附件:
1. 浑源县突发环境事件应急响应程序示意图
2. 浑源县生态环境事件应急指挥部组成及职责表
3. 浑源县生态环境事件应急指挥部工作组组成及职责表
4. 突发环境事件响应条件及应急措施表
5. 突发环境事件分级标准表
6. 突发环境事件应急保障一览表
7. 浑源县突发环境事件应急处置专家组名单
废钼回收的技术流程与关键环节
废钼回收的技术流程通常包括预处理、化学提纯和熔炼三个核心环节。预处理阶段通过磁选、破碎和筛分去除杂质；化学提纯采用酸浸或碱浸法溶解钼化合物，再通过沉淀或电解获得纯钼粉；最后经高温熔炼制成钼锭或钼合金。其中，催化剂废料的回收技术要求较高，需采用焙烧-氨浸工艺提取钼酸铵。技术难点在于杂质控制（如镍、铁）和回收率提升，部分企业已引入自动化分选系统和绿色浸出技术以优化效率。
1900年初，一个名叫Greenleaf whittier pickard的人制作了世界上台矿石收音机，随后RAC（美国无线电公司）进行工业化生产，至今已超过100年。（以上文字摘自网络）时至今日虽然无线电技术已飞速发展，却仍有许多人对矿石机“情有独钟”。现介绍几种可以检波的矿石，同一名称的矿石由于产地不同，形成的条件不同，所含其它物质种类和比例不同，也就造成了形状、颜及电性能等大差异。本帖仅供参考。
一、中自然铜:虽然在中医里称做自然铜，也叫方块铜或石髓铅，实际上是天然硫化铁矿石。外观多为规则的方块形，大小不一表面平坦，亮黄具金属光泽；有时表面呈棕褐，质坚硬但易砸碎。使用效果:检波点较少，灵敏度一般，稳定性一般。
二、方铅矿石:方铅矿是一种灰的硫化铅，晶体呈立方体，有时为八面体和立方体的聚形。强金属光泽，具弱导电性和良检波性。五、六十年代销售的活动矿石和固定矿石多为方铅矿石。使用效果:检波点较多，灵敏度较高，稳定性较好。
三、黄铁矿石:因其浅黄铜和明亮的金属光泽常被人误为黄金，故又称为“愚人金”。黄铁矿分布广泛，一般呈立方体、八面体、五角十二面体及其聚形。硬度较高小刀刻不动。使用效果:检波点一般，灵敏度一般，稳定性一般。
四、黄铜矿石:是一种铜铁硫化物矿物，常含微量金、银等。正方晶系，晶体相对少见，多呈不规则粒状及致密块状结合体，也有肾状、葡萄状集合体。黄铜黄，硬度低于黄铁矿，是一种较常见的矿石。使用效果:检波点少，灵敏度一般，稳定性一般。
五、辉钼矿石:是钼的硫化矿物。分别属于三方和六方晶系，呈铅灰、强金属光泽，通常多以片状、鳞片状或细小颗粒状产出。辉钼矿比指甲还软，摩氏硬度为1-1.5。使用效果:检波点较多，灵敏度高，稳定性较好。
六、红锌矿石:橙黄，带暗红光，六方晶系，成致密块状体。相应有锰-红锌矿、铅-红锌矿和铁-红锌矿。自然界不常见。使用效果:检波点多，灵敏度很高，稳定性较高。
七、钛铁矿石:是铁和钛的氧化矿物，是提炼钛的主要矿石。三方晶系，晶体一般为板状，晶体集合到一起为块状或粒状。灰到黑，有一点金属光泽。使用效果:检波点很少，灵敏度很低。稳定性一般。
八、镜铁矿石:赤铁矿变种，与石英伴生。复三方偏三角面体晶类，块状、鳞片状。红棕、钢灰、铁黑。使用效果:检波点少，灵敏度一般，稳定性一般。
九、软锰矿石:主要成份为二氧化锰，颜由浅灰到黑，具有金属光泽。软锰矿软，用手摸会像煤一样弄黑你的手。一般为块状、肾状或土状，有时具有放射纤维状形态。使用效果:检波点少，灵敏度低，稳定性差。
十、锡石矿石:是常见的锡矿物，硬度高，比重大。复四方双锥晶系，常呈双锥状、双锥柱状。颜由无至黑，透明至不透明。富铁锡石可具电磁性。使用效果:检波点不多，灵敏度高，稳定性好。
十一、斑铜矿石:是一种铜铁的硫化物矿物。多呈致密块状集合体。新鲜断面呈古铜，表面易氧化呈蓝紫斑状的锖。在地表易风化成孔雀石和蓝铜矿。使用效果:检波点少，灵敏度低，稳定性差。
十二、磁铁矿石:氧化物类铁矿石，属等轴晶系。晶体呈八面体和菱形十二面体，集合体呈粒状或块状。半金属光泽，颜铁黑。使用效果:检波点少，灵敏度很低，稳定性一般。
十三、金属硅:旧称“矽”，又称结晶硅或工业硅，其主要用途是做为非铁基合金的添加剂。使用效果:检波点多，灵敏度高，稳定性好。
几种在资料中介绍有检波功能的矿石，而本人在测试中无法检波。也许您手中有同样名称的矿石却可以使用，这并不奇怪。
一、金红石:金红石就是较纯的二氧化钛，在地壳中储量较少。四方晶系，常具完好的四方柱状或针状晶形。颜暗红、褐红，黄或桔黄，富铁者呈黑。透明至不透明。性脆。使用效果:缘体，不能检波。
二、褐铁矿:褐铁矿呈多种调的褐，一般为钟乳壮、葡萄状，致密的或梳松的块状甚至土状。也有像黄铁矿那样的晶体形状（称为假像）。使用效果:缘体，不能检波。
三、闪锌矿:锌的硫化物矿物。纯闪锌矿近似于无、通常因含其它物质而呈浅黄、红褐、棕甚至黑。透明至不透明，晶体形态呈四面体或菱形十二面体，通常成粒状集合体产出。使用效果:缘体，不能检波。
四、菱铁矿:菱铁矿一般为晶体颗粒状或致密块状、球状或凝胶状。颜一般为黄白或灰白，风化后变成褐或褐黑。使用效果:正反向电阻很小，不能检波。
五、辉锑矿:辉锑矿是锑的硫化物，属正交斜方晶系，晶体常见呈尖顶的长柱型。铅灰、金属光泽不透明。使用效果:缘体，不能检波。
六、钼铅矿:钼铅矿是一种铅钼酸盐矿物，具有松脂光泽或金刚光泽，颜为黄到橙红或褐。四方晶系四方双锥晶类，板状、薄板状晶体，少数锥状、柱状，单形常见，集合体粒状。使用效果:缘体，不能检波。
七、铬铁矿:铬铁矿是铬和铁的氧化物矿物，相当坚硬，黑半金属光泽。使用效果:缘体，不能检波。
八、白铅矿:白铅矿是方铅矿遇到含碳酸盐的水后发生化学反应而形成的。像这样一种矿经化学作用成为另一种矿，称为次生矿物。晶体为透明至半透明。以白、无为主，亦有灰、黄、红棕或蓝绿。使用效果:缘体，不能检波。
九、毒砂:铁、砷的硫化物，又称砷黄铁矿。中国从毒砂（旧称白砒石）中制取砒霜，历史悠久。单斜或三斜晶系，晶体呈柱状，集合体成粒状或致密块状。锡白至钢灰，金属光译。敲击时发出蒜臭味。使用效果:良导体，不能检波。
十、锑:银白有光泽硬而脆的金属。有磷片状晶体结构。使用效果:良导体，不能检波。
十一、铋:铋在自然界以游离金属和矿物的形式存在。矿物有硫化物辉铋矿、氧化物铋华等。铋为银白至粉红金属，质脆易粉碎。在2003年，发现了铋有其微量放射性。使用效果:良导体，不能检波。
十一、自然铜:铜红，表面常出现棕黑氧化被膜。密度大延伸性强，常与赤铁轨、孔雀石、蓝铜矿伴生。使用效果:良导体，不能检波。
实验室教育
一、实验目的
1.
了解实验室管理制度
2.
主要掌握化学品使用、危险废物处置和应急救援
二、实验室典型隐患及教育案例
1.
试剂瓶放在桌面边缘
2.
做完实验盖子不及时盖好拧紧
3.
废液桶与废弃物存放点无警戒标识
4.
典型事故、事例
8
·
12
天津滨海新区爆炸事故——高校实验室管理的分水岭；
2015
年
8
月
12
日，天津市滨海新区发生火灾爆炸事故造成
165
人遇难 、
8
人失踪，
798
人受伤 ，造成直接经济损失
68.66
亿元。瑞海公司集装箱内的硝化棉在高温等
因素的作用下自燃， 引起相邻集装箱内的硝酸铵等危险化学品发生爆炸。
8
月
14
日紧急《关于深入开展危险化学品和易燃易爆物品专
项整治的紧急通知》
三、一般
1.
应熟悉实验室环境: 水、 电阀门以及通道的位置。 熟悉各类灭火和
应急设备的位置和使用方法。
2.
开展实验时要密切关注实验进展情况， 不得擅自离岗，进行危险实验时至
少
2
人在场。 严禁将实验室内物品私自带出实验室。
3.
实验结束后， 一个离开实验室的人员检查并关闭整个实验室的
水、 电、 气、 门窗。
4.
进入实验室要做好必要的个人防护， 不得在实验室内穿露脚趾的鞋子。
5.
严禁穿着实验室防护服离开实验室， 如就餐或去办公室、休息室和卫生间
等。
6.
禁止在实验室工作区域进食、 饮水、 吸烟、 化妆和处理隐形眼镜。
7.
禁止在实验室储存食品和饮料。
8.
处理性实验材料和动物后， 以及离开实验室前都应洗手。
9.
实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。
四、消防
1.实验室火灾隐患
1)
加热设备引起火灾
2)
违反操作规程引起火灾
不规范的蒸馏、 回流等操作
3)
易燃易爆危险品引起火灾
4)
化学废弃物易引起火灾
5)
用电不规范或电路老化引起火灾
6)
违规吸烟， 乱扔烟头引起火灾
2.
火灾初起的紧急处理
3.
消防器材使用方法
4.
火场自救与逃生常识
生命重要 ！
五、化学品
1.
危险化学品是指具有毒害、腐蚀、爆炸、燃烧、助燃等性质，对人体、环
境具有危害的剧毒化学品和其他化学品。
2.
采购受公安机关管控， 应通过院系申请、 学校等相关部门审批， 由管理
人员登录“危险化学品治安管理信息系统”
进行网上备案，
获得公安机关审批
后， 统一采购。
3.
化学品保存的一般原则:保持整洁、
通风、
隔热、
，
远离热源、
火
源、 电源和水源， 避免阳光直射。
4.
危险品分类存放要求 :如还原剂、 有机物等不能与氧化剂、硫酸、 硝酸
混放；
5.
强酸不能与强氧化剂的盐类混放；
6.
遇酸可产生有害气体的盐类（如: 氰化钾等）不能与酸混放。
六、化学品使用规范
1.
进行实验之前应先阅读使用化学品的技术说明书，了解化学品特性、
影响因素与正确处理事故的方法，采取必要的防护措施。
2.
实验人员穿着适合的实验工作服，长衣长裤，不得穿短裤短裙以及露趾凉鞋。
3.
严格按实验规程进行操作，在能够达到实验目的和效果的前提下，尽量减少
品用量，或者用危险性低的品替代危险性高的品。
4.
不可直接接触品、品尝品味道、把鼻子凑到容器口嗅闻品的气味。
5.
使用剧毒化学品、 爆炸性物品或强挥发性、 刺激性、 恶臭化学品时， 应
在通风良好的条件下进行。
七、危险废物处置
:
1.
破损的玻璃仪器（试管、量筒、烧杯等）应专门存放，不得与实验垃圾混放。
2.
废试剂瓶倒尽残液后应使用纸箱包装存放。
3.
化学实验废液不得直接倒入下水道。液桶盛放不得超过大容量的
80%
。收
集废液后应盖紧盖子（含内盖），存放位置要阴凉并远离热源、 火源。
4.
运送实验废物时，
至少需两人同行，
并穿着实验服，
佩戴口罩和手套，
做
好防护。 配合管理人员检查并称重， 填写入库记录， 粘贴危险废物标签。
八、应急救援:
发生化学事故， 应立即报告老师， 并积采取措施进行应急救援， 然
后送医院治疗。
1.
化学烧灼伤
应立即脱去沾染化学品的衣物，迅速用大量清水长时间冲洗，避免扩大烧伤
面。处理时，应尽可能保持水疱皮的完整性，不要撕去受损的皮肤。
2.
化学
应迅速脱离低温环境和冰冻物体，用
40
℃左右温水将冰冻融化后将衣物脱
下或剪开，然后对部位进行复温，并尽快就医。
3.
吸入化学品中毒
果断措施切断毒源，并打开门、
窗，
降低毒物浓度。迅速将伤员救离现场，
搬至空气新鲜、 流通的地方，松开领口、 紧身衣服和腰带， 以利呼吸畅
通， 使毒物尽快排出。
.
上学期实验:
实验一 蛋白质浓度的测定(1)—— Folin-酚法
一、实验目的
1.
学
Folin-
酚试剂法测定蛋白质含量的原理及方法
2.
学绘制标准曲线
3.
掌握用标准曲线求待测物质含量的方法
二、实验原理
1921 年，Folin 首创，利用蛋白质分子中酪氨酸残基（酚基）还原酚试剂
（磷钨酸
-
磷钼酸）起蓝反应。
1951
年，
Lowry
对此法进行了改进，先在标本
中加碱性铜试剂，再与酚试剂反应，提高了灵敏度。
Folin-酚试剂在碱性条件下不稳定，其磷钼酸盐-磷钨酸盐易被酚类化合
物还原而呈蓝反应(钼蓝和钨蓝的混合物)。由于蛋白质中含有带酚羟基的酪
氨酸(Tyr) ，故有此显反应。该反应分两步进行，首先在碱性溶液中，蛋白质
分子中的肽键与碱性铜试剂中的 Cu2+作用生成紫红的蛋白质- Cu2+复合物，然
后，蛋白质- Cu2+复合物中所含的酪氨酸残基还原酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸，
生成蓝的化合物。
在一定浓度范围内，蓝的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系，故可根据预先
绘制的标准曲线求出未知样品中蛋白质的含量。
三、实验试剂及仪器
1. 实验试剂
（
1
） 待测样品
（
2
） 酪蛋白标准品
（
3
）
Folin-
酚试剂甲:
（
4
）
Folin-
酚试剂乙:
（
5
）酪蛋白标准溶液母液（
500
μ
g/ml
）:
2. 实验仪器
（
1）722N 型可见分光光度计
（
2）试管 7 支、试管架
（
3）移液枪
（
4）水浴锅
四、实验步骤
1
、标准曲线的绘制:
取六支干净试管编号，按下表加入试剂:（单位毫升）
2.
待测样品:
准确吸取待测样液
0.5ml
于
7
号试管内，加入蒸馏水
0.5ml
、
Folin-
试剂甲
5.0ml
、
Folin-
试剂乙
0.5ml
，重复上步操作，测样品
A500
。
五
、
实验结果与分析
1.
标准曲线绘制
C
X
:为根据待测样品的吸光值查标准曲线所得的蛋白质浓度
编号
(
标准溶液
浓度
)
酪蛋白标准
溶液母液
(500
μ
g/ml)
ml
去离子水
(ml)
Folin-
酚甲
(ml)
Folin-
酚乙
(ml)
A500
1
0.0
1.0
5.0
0.5
0.000
2
0.2
0.8
5.0
0.5
X.XXX
3
0.4
0.6
5.0
0.5
X.XXX
4
0.6
0.4
5.0
0.5
X.XXX
5
0.8
0.2
5.0
0.5
X.XXX
6
1.0
0.0
5.0
0.5
X.XXX
7(?)
待测样液
0.5ml
0.5
5.0
0.5
X.XXX2.
计算待测样品浓度
根据图中数值，计算出待测样品的浓度。
六、实验注意事项
（一）实验操作注意事项
1. Folin-
酚乙试剂在碱性条件下不稳定，当
Folin-
酚试剂加到碱性的铜
-
蛋白质溶
液中后，立即混匀（加一管混匀一管），使还原反应发生在磷钼酸
-
磷钨
酸试剂被破坏之前
;
2.
尽量减少各管之间的反应时间误差；
3.
一定要注意实验的时间，因为溶液的光密度值是随着时间在不断增大的，如
果时间超过了
30
分钟，则测得的光密度值就不准确了；
4.
在使用分光光度计时，拿比皿是要拿它的毛面，不可以用手接触它的光滑
面，自己手上的油污是测量值不准确；
5.
在擦拭比皿时，要顺着一个方向擦；
6.
在比皿中装入的液体量大约要是比皿体积的三分之二
.
（二）标准曲线制作注意事项
1.
作一条标准曲线至少要
5
个点
2.
被测物与标准物应在相同条件下测定
3.
尽量使未经过线上的实验点均匀分布在曲线或直线两侧
4.
标准曲线中标准物浓度有一定的线性范围，应使标准曲线范围在被测物质浓
度的
1/2
～
2
倍之间，并使吸光度在
0.05
～
1.0
范围为宜
（三）移液枪使用注意事项
1.
量程选择:
35%-100%
范围内佳
2.
大体积→小体积
顺时针
;
小体积→大体积 逆时针
3.
将移液枪端垂直插入吸头，左右微微转动，上紧即可
4.
吸液
:
垂直吸液，枪头尖端需浸入液面
2-4mm
以下。慢吸慢放，控制好弹
簧的伸缩速度。吸液速度太快会产生反冲和气泡，导致移液体积不准确。
5.
放液
:
将吸嘴口贴到容器内壁并保持
10-40
°倾斜。平稳地把按钮压到一档，
停约一秒钟后压到二档，排出剩余液体。压住按钮，同时提起移液枪
;
松开
按钮。 按弹射器除去移液嘴。
6.
使用完毕
:
至大量程
,
让弹簧恢复原形，挂至移液枪架上。
七、思考题
1.
试述
Folin-
酚试剂法的优点？
2.
应用本方法有哪些干扰作用？为什么？应如何注意？
3.
什么叫标准曲线？ 绘制标准曲线有何实用意义？
实验二 蛋白质浓度测定(2)-紫外线（UV）吸收法
一、实验目的
1.
学紫外线（
UV
）吸收法测定蛋白质含量的原理
2.
了解紫外分光光度计的构造原理
3.
掌握它的使用方法。
二、实验原理
由于蛋白质分子中酪氨酸和氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此蛋白质具
有吸收紫外线的性质，吸收高峰在
280nm
波长处。在此波长范围内，蛋白质溶
液的光吸收值（
A280
）与其含量呈正比关系，可用作定量测定。
利用紫外线吸收法测定蛋白质含量的优点是迅速、简便、不消耗样品，低浓
度盐类不干扰测定。因此，在蛋白质和酶的生化制备中（是在柱层析分离中）
广泛应用。
此法的缺点是:（
1
）对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和氨酸含量差
异较大的蛋白质，有一定的误差；（
2
）若样品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外线的
物质，会出现较大的干扰。 不同的蛋白质和核酸的紫外线吸收是不相同的，即
使经过校正，测定结果也还存在一定的误差。但可作为初步定量的依据。
三、实验试剂及仪器
1. 实验试剂
（
1
）标准蛋白质溶液（
1mg/ml
）
（
2
）待测蛋白质溶液，浓度需稀释至
1mg/ml
附近。
2. 实验仪器
紫外分光光度计、微量移液器、枪头、试管和试管架等
四、实验步骤
1.
标准曲线法:
取
8
支试管，按下表加入试剂（单位
ml
），并进行操作，绘制标准曲线，
A280
值为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标（蛋白质浓度为
mg/ml
）。
2.
取待测蛋白质溶液
2.0 ml
于
5
号试管中
,
加入蒸馏水
2.0 ml
，摇匀，按上述方
法测定
A280
，在标准曲线上查出待测蛋白质浓度。
五
、
实验结果与分析
1
． 原始数据
:
记录各管的
OD
值
2
． 绘制出标准曲线:要求规范作图
（
1
）用铅笔作图、
（
2
）标出横、纵坐标名称及单位
（
3
）标出日期、作者 、曲线名称
（
4
）曲线上体现出待测样品的
OD
值及浓度值。
3.
计算:蛋白质含量。
（
1
）要求: 写出公式、代入数据、写出结果。
(2
）根据标准曲线
R
2
值判断实验结果是否，分析可能造成实验误差
的原因有哪些？
六、实验注意事项
1.
比皿使用时注意不要沾污或将比皿的透光面磨损，应手持比皿的毛
面。
2.
待测液制备好后应尽快测量，避免有物质分解，影响测量结果。
3.
测得的吸光度
A
好控制在
0.2~0.8
之间，超过
1.0
时要做适当稀释。
4.
开关试样室盖时动作要轻缓。
5.
不要在仪器上方倾倒测试样品，以免样品污染仪器表面，损坏仪器。
6.
比皿在盛装样品前，应用所盛装样品冲洗两次，测量结束后比皿应用
蒸馏水清洗干净后倒置晾干。若比皿内有颜挂壁，可用无水乙醇浸泡
清洗。
七、思考题
1.
紫外吸收法与
Folin-
酚比法测定蛋白质含量相比，有何缺点及优点？
2.
若样品中含有核酸类杂质，应如何校正？
3.
分析实验误差产生的原因
4.
为什么吸光度
A
好控制在
0.2~0.8
之间？
实验三 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
一、实验目的
1.
了解电泳的一般原理
2.
掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作技术
3.
掌握醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白的方法
二、实验原理
血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于
pH7.4
。它们在
pH8.6
的缓冲
液中均解离带负电荷，在电场中向正移动。
血清中含有清蛋白，
α
-
球蛋白、
β
-
球蛋白、
γ
-
球蛋白和各种脂蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构
象、分子大小、形状及所带的电荷量不同，因而在醋酸纤维素薄膜上电泳的速
度也不同，因此可以将它们分离。
在相同碱性
PH
值缓冲体系中，
分子量小、
等电点低、带负荷电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度较快。
醋酸纤维素薄膜电泳是采用醋酸纤维素薄膜作为支持物的一种电泳方法。
醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯，该膜具有均一的泡
沫状结构，厚度约为
120
μ
m
，通透性好，对分子移动阻力少，是一种良好的
电泳支持物。具有微量、、简便、区带清晰、灵敏度高、便于摄影和保存
等优点。常用于科学实验、生化产品分析和临床化验，如血浆蛋白、血红蛋白、
球蛋白、脂蛋白、糖蛋白、甲胎蛋白、同工酶等的分离鉴定。
三、实验试剂及仪器
1.
实验试剂、材料
巴比妥
-
巴比妥钠缓冲溶液，染液，漂洗液，血清
:
医院采血
2.
实验仪器
常压电泳仪、水平电泳槽、点样器、滤纸、醋酸纤维素薄膜、培养皿、镊子等
四、实验步骤
1.
准备和点样 :
将醋酸纤维素薄膜（
2cm
×
8cm
）浸入缓冲溶液中，待浸透用镊子轻轻取出，夹在两层粗滤纸内吸干多余的缓冲液，然后将无光泽面朝上平放于滤纸
上。点样器在血清上蘸一下，再将点样器轻印在加样线上，使血清成一条状点
于醋酸纤维素薄膜一端
1.5
厘米处，将薄膜无光泽面朝下，点样端为阴，进
行电泳。
2.
电泳条件:
电压
80-90V
，恒压，
1h
，电流与薄膜多少相关。
3.
染、漂洗:
电泳完毕，将薄膜浸于染液中
10
分钟，取出，置漂洗液中漂洗
2-3
次至
背景无，再浸于蒸馏水中观察。
五
、
实验结果与分析
以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清在
PH8.6
的缓冲体系中电泳
1h
左
右，染后可显示
5
条区带。清蛋白泳动快，其余依次为
α
1-
、
α
2-
、
β
-
及
γ
-
球蛋白，如下图所示。
对照各自电泳结果，分析各将条带是否成功分离，存在的问题及原因有哪些？
六、实验注意事项
1 .
薄膜的浸润与选膜是电泳成败的关键之一。
2.
应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸吸去，吸水量以不干不湿为宜。
3.
分清薄膜的点样面，点样应点在薄膜的毛面上。
4.
点样要细窄、均匀、集中；点样量要适量，不宜过多或过少； 动作要轻、
稳，用力不能太大。
5.
注意薄膜放置的方向。电泳时应将薄膜的点样端置于电泳槽的负端，且
点样面向下。
6.
勿使点样处与电泳槽接触。
7.
应控制染时间。时间长，薄膜底不易脱去；时间太短，着不易区分，
或造成条带染不均匀，必要时可进行复染。
七、思考题
1
．电泳时，点样端置于电场的正还是负？为什么？
2
．电泳后，泳动在前面的是何种蛋白质？各谱带为何种成分？请分析原因。
3 .
电泳图谱清晰的关键是什么？如何正确操作？
实验四 维生素 C 的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法 ）
一、实验目的
1.
学用
2,6
—二氯酚靛酚滴定法测定维生素
C
含量的原理及方法。
2.
掌握滴定法的一般过程及操作技术
二、实验原理
维生素
c
又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料
2,6-
二氯酚靛酚钠盐，本身
则氧化成脱氢抗坏血酸。
2,6-
二氯酚靛酚在碱性溶液中呈深蓝
,
被还原后变为
无，在酸性介质中呈浅红。因此可用蓝的碱性染料
2,6-
二氯酚靛酚标准
溶液滴定样品，对含维生素
C
的酸性浸出液进行氧化还原滴定
,
染料被还原为无
,
当到达滴定终点时
,
多余的染料在酸性介质中则表现为浅红
,
由染料用量计
算样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验试剂及器材
1. 实验试剂:
（
1
）
0.1% 2,6-
二氯酚靛酚
（
2
）
1%
、
2%
草酸溶液
（
3
）标准抗坏血酸溶液（
0.2mgVc/ml
）
（
4
）样液
2. 实验器材:
碱式滴定管、铁架台、蝴蝶夹、锥形瓶、微量移液器、枪头等
四、实验步骤
1.
标准滴定:
取标准
Vc 1.0ml
（含
0.2
毫克抗坏血酸）与空锥形瓶中，加入
9.0ml 1%
草酸，
用
2,6-
二氯酚靛酚滴定至淡红，并保持
15
秒不变即为终点。用所用染料计算
1ml
染料相当于多少毫克抗坏血酸。滴定开始时，染料要迅速加入，直到红不
立即消失，才一滴一滴加入，并不断摇动锥形瓶，直至淡红
15
秒不退。滴定
过程一般不超过
2
分钟。
2.
样液滴定:
取两份样液各
10ml
，分别放入
100ml
锥形瓶中，滴法同前，但不加草酸
计算样品抗坏血酸含量。
五、实验结果与分析
1.
根据标准
V
C
的量及滴定所需的染料，计算出每毫升染料可以滴定到少
V
C
2.
根据待测样液滴定所需的染料体积计算样液中
V
C
的含量
试分析测定的结果与实际是否相符，造成结果误差的原因有哪些？
六、实验注意事项
1.
注意滴定管的正确使用
首先加标准溶液到
0
刻度以上
2-3ml
处，排净尖嘴内的气泡。然后调整液面
高度到
0
刻度或
0
刻度以下。
2.
滴液时先快后慢，接近所取体积时逐点滴入。
3.
读取刻度是目光平视刻度线，刻度线对准液体凹面。
七、思考题
1.
实验过程中，要测得准确的还原型维生素
C
值，实验过程中应注意哪些操作
步骤，为什么？
2.
在测定过程中，样品的草酸提取液为什么不能暴露在光下？
3.
试简述维生素
C
的生理意义。
实验五 从动物组织中提取脱氧核糖核酸
一、实验目的
1.
学和掌握用浓盐法从动物组织中提取
DNA
的原理和技术
2.
了解分离提取
DNA
的一般原理。
二、实验原理
1.
动物细胞中的核糖核酸（
RNA
）与脱氧核糖核酸（
DNA
）与蛋白结合形成核
蛋白。分别表示为
RNP
和
DNP
。
RNP
和
DNP
在不同浓度氯化钠溶液中的溶
解度有显著差别。在
0.14M NaCl
中，
DNP
溶解度低，
RNP
溶解度高；在
1-2M
NaCl
溶液中，
DNP
溶解度高，
RNP
溶解度低。故调整
NaCl
溶液的浓度可将
RNP
和
DNP
从样本中逐步分离出来。
2.
加变性剂
SDS
可使蛋白质变性，与
DNA
分离。 核酸本身带负电荷，结合正
电荷的蛋白质，用于核酸提取的去垢剂，一般都是阴离子去垢剂。去垢剂的作用:
1
）溶解膜蛋白及脂肪，使细胞膜破裂；
2
）溶解核糖体上面的蛋白质，使其解聚，将核酸释放出来；
3
）对
RNase
、
DNase
有一定的抑制作用。如:
SDS
、脱氧胆酸钠、
4-
氨基水杨
酸钠、萘
-1.5-
二磺酸钠、三异丙基萘磺酸钠
3.
用有机溶剂沉淀，去除蛋白。本实验所用的有机溶剂为:氯仿
-
异丙醇混合液
（
24:1
）； 氯仿:使蛋白变性并加速有机相和水相的分层，增加核酸得率，同
时去除脂类。 异丙醇:减少泡沫，也能促使有机相和水相分离。
4. DNA
不溶于乙醇等有机溶剂，因此可用乙醇沉淀法来纯化和浓缩
DNA
。
DNA
分离提取的原则
1
）
DNA
结构的完整
2
）排除其他分子的污染
a.
核酸样品中不应存在对其有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子
b.
将其他生物大分子如蛋白、脂类分子的污染应降到
c.
排除
RNA
的污染
三、实验试剂及器材
1.
试剂:
1
） 新鲜猪肝
2
）
0.14M NaCl-0.15M EDTA Na2
溶液
3
）
25% SDS
4
）
5M NaCl
5
）
氯仿
-
异丙醇混合液
6
）
95%
乙醇
2.
器材:
离心机、恒温水浴箱、托盘天平、烧杯、玻棒、微量移液器等
四、实验步骤
1.
将猪肝用
0.14M Nacl-0.15M EDTANa2
溶液洗去血液，剪碎，置匀浆机中研
磨成糊状。
2.
取
50 mL
猪肝糜离心
6min
，
3500rpm
。（离心机已经调整到位，直接操作即可）
3.
弃去上清液，剩余沉淀用
20mL 0.14M Nacl-0.15M EDTA
溶液洗涤，离心
6min
。
重复以上操作一遍。
目的是尽量除去
RNP
。所得沉淀为
DNP
粗品。
4.
向上述沉淀中加入
0.14M Nacl-0.15M EDTA
溶液，使总体积为
44mL
，然后
滴加
25% SDS
溶液约
3mL
（此步骤由老师把关），边加边搅拌。加毕，于
60℃
水浴保温
10min
，其间不停搅拌，取出冷却至室温。
目的是使核酸与蛋白质分
离。
5.
加入
5M Nacl
溶液
10mL
，此时
Nacl
的浓度正好为
1M
，
DNA
的溶解度是水
中的两倍，搅拌
10min
，加入约一倍体积的氯仿
-
异丙醇（
40ml
）混合液，
充分混匀，离心
6min
，
3500rpm
。
6.
取出离心管，内容物分为三层，上层为
DNA
溶液，中间是变性蛋白质凝胶，
底部为有机相。小心取出上清液，置于烧杯中。
有机相回收！
7.
由老师加入
1.5
倍体积
95%
冷乙醇，边加边轻挑，可观察到
DNA
丝状物缠
绕在玻棒上。
由老师打分。
五、实验注意事项（补充一下）
1.
各操作步骤要轻柔
,
尽量减少
DNA
的人为降解。
2.
取各上清时
,
不应贪多
,
以防非核酸类成分干扰。
3.
异丙醇、乙醇等要预冷
,
以减少
DNA
的降解
,
促进
DNA
与蛋白等的分相及
DNA
沉淀。
4.
提取
DNA
过程中所用到的试剂和器材要进行无核酸酶化处理。
5.
试剂均用高压灭菌双蒸水配制。
实验六 核酸浓度测定——紫外吸收法
一、实验目的
1.
了解
Denovix
的基本原理并掌握其使用方法；
2.
掌握使用紫外分光光度法测定核酸含量的原理和方法。
二、实验原理
核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键，具有紫外吸收。
RNA
和
DNA
的
紫外吸收峰为
260nm
。一般在
260 nm
波长下，每毫升含
1mg DNA
溶液的光吸
收值约为
0.020
，每毫升含
1mgRNA
溶液的光吸收值为
0.022
。故测定待测浓度
RNA
或
DNA
溶液
260nm
的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。
蛋白质由于含有芳香氨基酸，因此也能吸收紫外光。通常蛋白质的吸收高峰
在
280nm
处，在
260nm
处的吸收值仅为核酸的十分之一或更低，故核酸样品中
蛋白质含量较低时对核酸的紫外测定影响不大。
纯净的
RNA
溶液，其
A260/A280
≥
2
；纯净的
DNA
溶液，其
A260/A280
≥
1.8
。如果小于
1.8
或
2.0
，表示存在蛋白质或酚类物质的影响。
A230
表示表示样
品中存在一些污染物，如碳水化合物、多肽、苯酚等。
Denovix
核酸蛋白测定仪采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列
分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过待测试的样品后，部分被吸收，
计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
dsDNA
的消光系数为
50
，核酸的浓度
ng/ul=A260
╳
50
RNA
的消光系数为
40
ssDNA
的消光系数为
33
三、实验试剂及器材
（
1）
Denovix
核酸蛋白分析仪（微量）
（
2）微量移液枪、微量枪头、1.5ml 离心管、
ddH2O
、吸水纸、擦镜纸
四、实验步骤
1.
清洗样品台:
2μl
灭菌的
ddH2O
点在样品台上，放下悬臂，
10s
后抬起悬臂，
用干净的无尘纸擦掉即可。
2.
使用溶解样品的缓冲液
1-1.5μl
点在样品台上，放下悬臂，点击
Blank
，测完
之后擦掉即可。
3.
混匀样品后，
1-1.5μl
点在样品台上，放下悬臂，点击
Measure
，出现下图的
界面。
4.
测量完样品后请及时擦掉样品。
五、实验结果
记录核酸的浓度，并分析纯度
六、实验注意事项
1.
首次使用，请先清洁样品台。抬起悬臂，滴
1-2ul
灭菌蒸馏水于样品台上，
放下悬臂使上下界面接触，再用无尘纸或擦镜纸擦去上下表面液滴。
2.
打开测量应用，在样品台上滴加
1ul
溶解样品的
buffer
，注意观察液滴中
不能有气泡。
3.
测量结束后，立即擦掉样品，样品干在样品台上，造成污染。
实验七 血清谷丙转氨酶的测定（King 氏法）
一、实验目的
1.
掌握血清谷丙转氨酶活力测定的原理和方法；
2.
进一步熟练标准曲线的制作和分光光度计的使用。
二、实验原理
1.
生物机体内转氨基作用是
α
-
氨基酸的氨基通过酶促作用转移到
α
－酮酸的
酮基位置上，生产相应的酮酸和氨基酸的化学反应。催化这反应的酶称为转
氨酶，其辅酶为磷酸吡哆醛。转氨酶广泛存在于机体的各种组织中，在肝、
心、肾等组织中的谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性较高。在正常的新陈代谢过
程中，血清内维持一定水平的转氨酶活性（即正常值）。
当肝、心、肾等组织发生病变时，由于组织细胞肿胀，坏死导致大量的酶释
放至血流中，从而引起血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性显著升高。因此测定
这些酶的活性对某些疾病的临场诊断具有重要的参考价值。
2.
血清中的谷
-
丙转氨酶（
ALT
），在
37
℃、
pH7.4
的条件下，可催化基质（底
物）液中的丙氨酸与
α
-
酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸。
3.
生成的丙酮酸可与起终止和显作用的
2,4
二硝基苯肼发生加成反应，生成
丙酮酸
-2,4-
二硝基苯腙，进而在碱性环境中生成红棕的苯腙硝醌化合物，
其颜的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量，亦即与
ALT
活性的高低成正
比关系。据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过标准曲线
查出血清中
ALT
的活性。
King
氏法谷丙转氨酶活性单位:每毫升血清在
37℃
与
pH7.4
的基质液
作用
60min
，生成
1μmol
丙酮酸为一个单位。临床检验取血清量为
0.1mL
，
报告数据以
100mL
血清计算，因此实际测得结果乘
1000
即可。例如
0.1mL
丙酮酸标准液中丙酮酸含量为
0.2μmol
，即相当
GPT200U/100mL
。
三、实验试剂及器材
1.
试剂:
1
）
pH7.4
磷酸缓冲溶液
2
）
L-
丙氨酸和
α
-
酮戊二酸混合液
3
）丙酮酸标准液
4
）
2
，
4 -
二硝基苯肼溶液
5
）
0.4mol/L NaOH
溶液
2.
器材:
722
分光光度计、微量移液器、枪头、恒温水浴锅、试管、试管架等
四、实验步骤
1.
取
4
支干燥试管，按下表加入试剂:
管号
血 清
（
mL
）
基质液
（
mL
）
标准丙酮酸
（
mL
）
磷酸缓冲液
（
mL
）
1
（空白管）
0.6
2
（对照管）
0.1
0.5
3
（标准管）
0.5
0.1
4
（样品管）
0.1
0.5
2.
加毕摇匀，置
37
℃水浴中保温
30
分钟，取出冷却至室温。各加
0.5mL 2,4 -
二硝基苯肼溶液，准确作用
5
分钟。各加
0.4mol/L NaOH
溶液
5mL
，摇匀，
10
分钟后比。以
1
号管调零，测
2
、
3
、
4
号管
A530
，按下式计算丙酮酸生
成量（注意单位）:
五、实验注意事项
1.
为溶血及其他因素对酶活性测定的影响，实验过程所用的一切器皿（注
射器、试管等）应清洗干净，干燥后方能使用。
2.
为操作结果，测定酶活性时应恒定
pH
，保温时间，选用固定的比
计，比杯以减少误差。
3.
吸量准确，严格控制反应时间和温度。
实验八 基于口腔拭子 PCR 基因组 DNA 扩增实验
一、 实验目的
1.
了解
PCR
基因扩增的一般原理
2.
掌握
PCR
基因扩增操作技术
二、 实验原理
PCR
（
Polymerase Chain Reaction
）是聚合酶链式反应的简称，指在引物指导下由
酶催化的对特定模板
(
克隆或基因组
DNA)
的扩增反应，是模拟体内
DNA
复制
过程，在体外特异性扩增
DNA
片段的一种技术，在分子生物学中有广泛的应
用，包括用于
DNA
作图、
DNA
测序、分子系统遗传学等。
1. PCR
扩增的基本特征及要素如下:
（
1
）
PCR
技术的基本原理类似于
DNA
的天然复制过程
（
2
）是以单链
DNA
为模板，
4
种
dNTP
为底物，在模板
3'
未端有引
物存在的情况下，用酶进行互补链的延伸，多次反复的循环能使微量
的模板
DNA
得到大程度的扩增。
（
3
）
PCR
反应需要在一定的条件下才能完成，只有这些条件协调作
用时才能达到很好的效果
: (1)
缓冲液
; (2)
脱氧三磷酸核苷
(dNTP) ;(3)
引物
;(4)
模板
; (5) DNA
聚合酶。
2.
根据
DNA
的半保留复制，以及
DNA
分子在体外不同的温度下双
链和单链可相互转变的机制，在体外人为地控制反应系统的温度，使
双链
DNA
变性
(denature)
、退火
(annealing)
、延伸
(extension),
实现
DNA
的扩增。
（
1
）变性:模板
DNA
通过加热至
95
℃左右，使
DNA
双螺旋的氢键断裂，
形成单链
DNA,
作为反应的模板；
（
2
）退火:模板
DNA
经加热变性成单链后，温度降至引物的
Tm
值
左右或以下
(
比
Tm
低
5
°
C
，通常为
55~65
°
C)
，引物与模板
DNA
单链的互补序列配对结合；
（
3
）延伸:
DNA
模板
-
引物结合物在
DNA
聚合酶
(
一种耐热的
DNA
聚合酶
)
的作用下，于
70~74
℃下，以引物
3'
端为起始点按
5'
→
3'
方向
使
DNA
新链延伸。
三、试验试剂及器材
1.
仪器:
（
1
）
PCR
仪
（
2
）移液枪、涡旋仪、离心机
2.
样品及试剂:
（
1
）样品:口腔拭子
（
2
）样本稀释液
（
3
）亚甲基四氢叶酸还原酶（
MTHFR
）
C677T
试剂盒
四、实验步骤
1.
口腔拭子样本采集
（
1
）取样前
30
分钟，不要吃东西，吸烟，饮酒等。准备一杯清水，
饮入约
50ml
清水充分洗漱口腔约
10
秒，吐掉；
（
2
）重复上述步骤
2-3
次。取样推荐漱口后半个小时 。
（
3
）撕开口腔拭子外包装，小心取出口腔拭子（注意:整个取样过
程中手不能接触拭子部分）；
（
4
）用拭子刮拭脸颊内部
20-30
次，尽量避免接触牙齿跟舌头；
（
5
）将拭子伸入采样管，根据不同型号的拭子采用推入或折断采样头；
（
6
）旋转采样管，采样完成。
2.
样品的处理
（
1
）取拭子样本涡旋混匀
(30s
左右
)
，再以
1
:
2
吸取拭子样液与样
本稀释液涡旋混匀，反应
2
分钟后，作为模板进行
PCR
实验。
（
2
）
PCR
体系准备:
每人份需做两个反应，取两个
0.2ml PCR
管，在
PCR
管盖上标记
M
、
WT
；在标有
M
的管中加入
44μl M
扩增液，在标有
WT
的管中加入
44μl
WT
扩增液；分别向以上的
M
和
WT
管中个加入
1μl
反应液，盖紧管盖，涡旋混匀，离心待用；在标有
M
和
WT
的管中分别加入
5μl
待测样本
(
已用样本
稀释液处理过
)
，盖紧管盖，涡旋混匀，瞬时离心。
3. PCR
扩增
将
PCR
管放入
PCR
仪中，按如下程序扩增:
50
℃
2 min
；
95
℃
3min30sec
；
94
℃
5sec
、
60
℃
10sec
、
65
℃
30sec
（
31Cycles
）；
65
℃
10min
；
4
℃
Hold
。
取出
PCR
产物，
2~8
℃保存。
五、结果分析
1.
从密封袋中取出检测卡，将待测样本
M
与
WT
管中的
PCR
产物（用
手动或者自动化加样平台）滴加在检测卡对应的样品垫处，待
2~5 min
对结果
进行判读，
20min
后结果不。
2.
将待测样本
M
与
WT
管中的
PCR
产物分别滴加在检测卡对应的样品垫
上，根据在检测线（
T
线）是否出现条带判读
C677T
位点的基因型。若
M
管
产物在试纸条上
T
线处不出现条带而
WT
管产物出现条带，则为野生型
（
677CC
型）；反之则为纯合突变型（
677TT
型），若两管产物均在试纸条
T
线
处出现条带则判读为杂合突变型（
677CT
型）；无效判定:质控线（
C
线）不
出现条带，可能为操作不正确或试纸条已变质损坏。
六、注意事项
实验室应该遵循
PCR
实验规范的要求分区操作，各区物品均为，不得
交叉使用，加模板和引物的移液器不能混用，每次加样后均需更换吸头。
1
．隔离不同操作区
;
2
．分装试剂
;
3
．严格实验操作
;
4
．严格按无菌操作的原则进行
PCR
操作等。
七、思考题
1.
循环次数是否越多越好
?
为何？
2.
如何根据实验结果优化
PCR
体系？
下学期实验:
实验一 核酸浓度测定——定磷法
一、实验目的
1.
掌握定磷法测定核酸含量的原理和方法
2.
熟练掌握分光光度计的使用方法
二、实验原理
1.
核酸分子中含有一定比例的有机磷，一般为
9.2%
左右
(RNA
含磷量约
9.0%
，
DNA
含磷量约为
9.2%)
，若测得某一核酸样品中有机磷的含量，即可推算其
核酸的含量。
2.
用强酸使核酸分子中的有机磷消化成无机磷
3.
酸性环境中，无机磷再与钼酸铵结合成磷钼酸铵。
PO
4 3-
+ 3NH
4 +
+ 12MoO
4 2-
+ 24H
+
(NH
4
)
3
PO
4
·
12MoO
3
·
6H
2
O
↓
(
黄
)+6H
2
O
4.
当有还原剂存在时，
Mo
6+
被还原成
Mo
4+
，此
4
价钼再与试剂中的其它
MoO
4 2
－
结合成
Mo(MoO
4
)
2
或
Mo
3
O
8
呈兰，称为钼兰。
钼兰在一定浓度范围内
(
无
机磷含量在
1
—
25
μ
g),
兰的深浅和磷酸的含量成正比
,
可用比法测定其
光吸收值。
(NH
4
)
3
PO
4
·
12MoO
3
·
6H
2
O +
还原剂（抗坏血酸）
钼兰
Mo(MoO
4
)
2
或
Mo
2
O
8
三、实验试剂及器材
1.
试剂:
1
） 硫酸
2
）标准磷溶液（
20
微克磷
/
毫升）、
3
）定磷试剂（在使用前将上述试剂按以下比例混合
,
蒸馏水
:17% H
2
SO
4
:
2.5%
钼酸铵
: 10%
抗坏血酸
= 2
:
1
:
1
:
1
（
V/V
））
4
）样液
2.
器材:
通风橱、消化仪、容量瓶、移液器、试管、
722
分光光度计等
四、实验步骤
1.
磷标准曲线的绘制:取
6
只试管，按下表加入试剂
管号
标准磷溶液
(mL)
去离子水
(mL)
定磷试剂
(mL)
1
0
3
3
2
0.2
2.8
3
3
0.4
2.6
3
4
0.6
2.4
3
5
0.8
2.2
3
6
1
2
3
7
总磷
3mL
0
3
8
无机磷
3mL
0
3
加毕摇匀，于
45℃
水浴中保温
10
分钟（注意保温时间相同），冷却，测
A660
，
以磷含量为横坐标，
A660
为纵坐标作图。
2.
总磷的测定:
取样液
1.0 mL
于克氏烧瓶中，加入
2.5mL 27% H2SO4 ,
烧瓶口放一小漏斗，
于通风橱中加热消化，浓烟散尽溶液基本无透明即表示消化完成。冷却，将消
化液移至
100mL
容量瓶中，用少量去离子水冲洗烧瓶两次，洗涤液一并倒入容
量瓶，定容，摇匀后取
3.0mL
置于
7
号试管中，加入定磷试剂
3.0mL
，摇匀，
45℃
水浴保温
10
分钟，测
A660
。
3.
无机磷的测定:
取样液
1.0mL
于
100mL
容量瓶中，加去离子水至刻度，摇匀后取
3.0mL
置
于
8
号试管中，加入
3mL
定磷试剂，摇匀，
45℃
水浴保温
10
分钟，测
A660
。
4.
计算:
有机磷
=
总磷
-
无机磷
由标准曲线查得有机磷微克数（
X
）
,
按下式计算样品中核酸百分含量。
样品重量（
2000
微克）
五、实验注意事项
1.
消化溶液定容后务必上下颠倒混匀后再取样。
2. 1-8
号管
同时
加入定磷试剂后再放入
45
度水浴。
3.
分光光度计的使用:不用的时候要开着盖，注意比皿毛面。
顺序为
1-4
；
1 5-7
；
1 8
。个不要动，用于调零。
4.
标准曲线的绘制
:
得到
1-8
号管的吸光度后，写在实验报告表格的右侧。进
里面的电脑，用
excel
拟合曲线，得到
R
方值，写在大家的实验报告纸上。要
求
R
方大于
0.995
，回去写实验报告时需要用坐标纸。
5.
废液盆里
只能
倒
1-8
号管中的溶液。枪头、擦镜纸扔在一次性杯子里。
6.
试剂及器皿清洁，不含磷；研究生检查试管内水珠不挂壁才能走。
实验二 胍盐-
β
巯基乙醇法提取 RNA
一、实验目的
1.掌握胍盐/ß-巯基乙醇法提取 RNA 的原理和方法。
2.掌握链 cDNA 合成的原理和方法。
二、实验原理:
RNA 的提取方法:
1.异硫氰酸胍/苯酚法（TRIZOL）
2.胍盐/ß-巯基乙醇法
胍盐裂解样本，抑制 Rnase 的活性，
β
-巯基乙醇变性蛋白，离心柱上用 DNA
和蛋白酶消化基因组 DNA 和蛋白，然后漂洗纯化的方法。
3.介质吸附法
RNA 的鉴定分析
纯度: OD260/OD280 1.9—2.1 ,说明有部分降解荧光光谱
链 cDNA 的合成:
以 RNA 为模板，反转录为 cDNA，由逆转录酶催化，该酶合成 DNA 时需要引
物引导，常用引物是 oligo dT、随机引物或基因特异引物（GSP）维生素 B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，
对热稳定。维生素 B2 溶液在 430～440 nm 蓝光的照射下，发出绿荧光，荧
光峰在 535 nm。维生素 B2 在 pH=6～7 的溶液中荧光强度大，在 pH=11 的碱
性溶液中荧光消失，所以可以用荧光光度法测维生素 B2 的含量。
三、试剂与仪器:
总 RNA 提取试剂盒（天根 RNAprep Pure Cell/Bacteriit）；链 cDNA
合成试剂盒（Tara PrimeScript™ RT Master Mix）；无菌，无ＲＮＡ酶离心
管无菌，无 RNA 酶枪头低温离心机等
四、实验操作:
1.提取总 RNA
1） 裂解细胞:确定细胞数量，吸除细胞培养基上清，加入 PBS 后吸除，加入
600ul 裂解液 RL（胍盐/ß-巯基乙醇）5min。
2） 将溶液转移至过滤柱 CS 上(过滤柱 CS 放在收集管中)，12,000 rpm 离
心 2 min，收集滤液。
3） 向滤液中加入 1 倍体积 70%乙醇，混匀，得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱
CR3 中， 12,000 rpm 离心 60 sec，倒掉收集管中的废液。
4） 向吸附柱 CR3 中加入 350
μ
l 去蛋白液 RW1，12,000 rpm 离心 60 sec，倒掉
收集管中的废液，将吸附柱 CR3 放回收集管中。
5） 向吸附柱 CR3 加入 80
μ
l 的 DNase I 工作液（10
μ
l DNase I 储存液
+70
μ
l RDD 溶液），室温放置 15 min。
6）向吸附柱 CR3 中加入 350
μ
l 去蛋白液 RW1，12,000 rpm 离心 60 sec，倒掉
收集管中的废液，将吸附柱 CR3 放回收集管中。
7）向吸附柱 CR3 中加入 500
μ
l 漂洗液 RW ，室温静置 2 min，12,000 rpm 离心
60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CR3 放回收集管中。再重复一次。
8）12,000 rpm 离心 2 min，倒掉废液。将吸附柱 CR3 置于室温放置 10 分钟，以
彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
9）将吸附柱 CR3 转入一个新的 RNase-Free 离心管中，加入 30-100
μ
l
RNase-Free ddH2O 室温放置 2 min，12,000 rpm 离心 2 min，得到 RNA 溶液。
10）RNA 鉴定分析（浓度，纯度）。2. 采用 TaRa PrimeScript RT Master Mix 进行 cDNA 链合成:
1）按下列组分配制 RT 反应液
5X PrimeScrip Mix 2
μ
l
Total RNA (50
μ
M) -- ul
RNase free H2O up to 10
μ
l
2）反转录反应条件如下
37℃ 15min （反转录反应）
85℃ 5sec （反转录酶失活反应）
五、实验注意事项
1. 严格控制外源性 RNA 酶的污染:外源性的 RNA 酶存在于操作人员的手汗、唾
液等，也可存在于灰尘中，造成器械、玻璃制品、塑料制品、电泳槽、研究人
员的手及各种试剂的污染。
2. 大限度地抑制内源性的 RNA 酶:而各种组织和细胞中则含有大量内源性的
RNA 酶。
3. 戴手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致 RNase 污染。
4. 使用无 RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
5. RNA 在裂解液 RL 中时不会被 RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不
含 RNase 的塑料和玻璃器皿。
6. 配制溶液应使用无 RNase 的水。
实验三 real-time PCR 测端粒酶 mRNA 表达
一、实验目的
1.掌握 RT-PCR 基因扩增的原理和过程
2.了解端粒酶的结构与功能
二、实验原理:
1. 实时定量 PCR 技术:
利用荧光信号的变化实时检测 PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，
通过 Ct 值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。
Ct 值的定义:PCR 扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数。
Xn = X0 × （
1＋En）Ct
lg Xt ＝lg X0 ＋ Ct lg（
1＋En）
Ct = -k lg X0 ＋ b
X0 :起始模板数量
En:扩增效率
Xt:荧光扩增信号达到阈值时扩增产物的量，在阈值设定以后，它是一个常数
Log 模板起始浓度与 Ct 值呈线性关系。
模板 DNA 量越多，荧光达到阈值的循环数越少，即 Ct 值越小。
2.常用荧光标记方法:
特异性荧光标记 TaqMan Probe
非特异性荧光标记 SYBR Green I:是一种结合于 dsDNA 双螺旋小沟区域
的具有绿激发波长的染料。
问题点:
SYBR Green I 与双链 DNA 进行结合后散发荧光，因此如果反应体系
中有非特异性扩增或引物二聚体的产生，也将同时被检测，从而可能导致检测
结果不准确。
关键点:
设计合适引物，非特异性扩增！
端粒酶:通过识别并结合富含胞嘧啶 C 的端粒末端，以自身 RNA 为模板， TER
催化，合成端粒的 DNA 重复序列，从而阻止随着 DNA 复制和细胞分裂所
造成的端粒的不断缩短， 进而稳定染体的长度，避免细胞因端粒丢失
所导致的凋亡。因此，端粒酶在细胞永生化和肿瘤发生中起着重要作用。
相对定量分析——2 -
∆ ∆
Ct 法
三、试剂与仪器:
1. LightCycler 480 SYBR Green I Master
2. LightCycler 8-Tube Strips (white)
3. 无菌，无ＲＮＡ酶离心管
4. 无菌，无ＲＮＡ酶枪头
四、实验操作:
1. 加样:试剂 体积
模板（稀释 5 倍） 2µl
Master mix，2×conc. 10µl
正向引物 1µl
反向引物 1µl
水，PCR 级别 6µl
总体积 20µl
2.PCR 程序设定:SYBR Green I 选择“SYBR Green I /HRM Dye”，反应总体积
20 ul。
3.设定每个程序中对应步骤的①温度(Target)、②信号获取模式(Acquisition
Mode)及 ③时间(Hold)。
4.设定完成后，放入样板，窗口右下方的“Start Run” 按钮将由灰变为蓝，
此时即可点击之，开始运行实验。
5.运行完毕后，点击界面左侧“Sample Editor”，对样本详细信息进行编辑。
6.点击界面左边的“Analysis”，进入分析界面，进行 Tm 分析 (Tm Calling) 分
析和相对定量 (Relative Quantification) 分析
五、结果分析
2 - △△Ct 法:假设目的基因和参照基因扩增效率都接近 100%
△Ct（第 n 组）＝16－17＝-1 △Ct（组）＝18－17.4=0.6
△△Ct=△Ct（第 n 组）－△Ct（组）＝-1－0.6＝－1.6
比率（癌细胞组/正常细胞组）=2－△△Ct＝2－（－1.6） = 3
所以 TERT 基因在癌细胞的表达水平是正常细胞的 3 倍。
要求实验报告分析出自己组对比组的结果
六、实验注意事项
1、能标准的使用微量移液器，使重复样本得到相同的结果。2、学会分析溶解曲线，得到循环 CT 值后学会如何分析结果。
实验四 蛋白分子量测定——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
一、实验目的
1.
学
SDS-PAGE
测定蛋白质分子量的基本原理
2.
掌握
SDS-PAGE
垂直板电泳的操作方法
二、实验原理
聚丙烯酰胺凝胶（
PAGE
）是由丙烯酰胺（
Acr
）和交联试剂
N,N
’
-
甲叉双丙
烯酰胺
(Bis)
在有引发剂（如过硫酸铵）和增速剂（如
N,N,N
’
,N
’
-
四甲基乙二胺，
TEMED
）的情况下聚合而成的。在一定浓度范围内，改变聚合体系中
Acr
和
Bis
的比例，可得到不同网眼大小的凝胶，由于凝胶的三维网状结构，对在凝胶中泳
动的不同分子量的质点有着选择和阻碍，因此具有分子筛效应，决定着聚丙烯酰
胺凝胶的有效分离笵围。
SDS-
聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进了十二烷基硫酸
钠（
sodium dodecyl sulfate
，简称
SDS
），
SDS
是一种阴离子去污剂，它能破坏
蛋白质分子之间以及与其他物质分子之间的非共价键，使蛋白质变性而改变原有
的空间构象。是在强还原剂，如巯基乙醇存在下，由于蛋白质分子内的二硫
键被还原剂打开，不易再氧化，这就了蛋白质分子与
SDS
充分结合，形成
带负电荷的
SDS-
蛋白质复合物。
带负电荷的蛋白质
-SDS
复合物由于结合了大量的
SDS
，使蛋白质丧失了原有的电荷状态，形成了仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除
了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异。
蛋白质
-SDS
复合物在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒。不同蛋
白质的
SDS
复合物的短轴长度都一样，约为
1.8nm
，而长轴则随蛋白质的分子
量成正比变化。这样的蛋白质
-SDS
复合物在凝胶中的迁移率，受蛋白质原
有电荷和形状的影响，而只是椭圆棒的长度，也就是蛋白质分子量的函数。
lgMw = -bRm + K
Mw
:蛋白质的分子量；
Rm
:相对迁移率
b
: 斜率
;
K
:截距
当条件一定时，
b
，
K
均为常数，即此时
lgMw
与
Rm
的关系为线性关系，
如以
lgMw
对
mR
作图，应得到一条直线，如上图。
若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量的对数作图，可获得一条标
准曲线。未知蛋白质的相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲
线上求得分子量。
三、实验试剂及仪器
1.
实验试剂
（
1
）
30%
丙烯酰胺（
Acr
）:
Acr/
甲叉双丙烯酰胺
(Bis)=29:1
（
2
）
10%SDS
（十二烷基磺酸钠）
（
3
）
10%
过硫酸铵
(AP)
（
4
）
TEMED
（四甲基乙二胺）
（
5
）
2
×上样缓冲液:
10%SDS
（
4ml
）
+
巯基乙醇（
1ml
）
+0.2%
溴酚蓝（
2ml +
甘油
2ml +1M pH6.8Tris-HCl
（
1ml
）
（
6
） 浓缩胶缓冲液（
1M Tris-Cl
缓冲液
pH6.8
）
（
7
） 分离胶缓冲液（
1.5M Tris-Cl
缓冲液
pH8.8
）
（
8
） 电泳缓冲液
: (SDS 20g
，
Tris 60g,
甘氨酸
282.2g, pH8.3
）加蒸馏水使其溶
解后定容至
2L
。
（
9
） 固定液:乙醇
500ml
，冰乙酸
100ml
混匀，
（
10
） 染液:考马斯亮蓝
R250 1.25g
，甲醇
225ml
，冰乙酸
50ml
，蒸馏水定
溶至
1L
。
（
11
） 脱液:冰乙酸
80ml
，乙醇
250ml
，加蒸馏水定容至
1L
。
2.
实验仪器
（
1
）垂直板电泳装置、电泳仪、制胶架
（
2
）移液枪、移液管
（
3
） 烧杯、培养皿
（
4
） 离心机
四、实验步骤
1.
装板
将垂直板型电泳装置内的板状凝胶模子取出，将玻璃片洗净、凉干、嵌入
凹槽中，形成一个“夹心”凝胶腔，
把装好的凝胶腔置于仰放的电上槽。将电泳槽、凝胶模子串成一体的垂
直板型电泳装置，垂直放置在水平台面上，灌注胶液。
2.
分离胶的配制（
12%
）
试剂
体积
H2O
3.35
（
ml
）
凝胶贮备液
2.5
（
ml
）
分离胶缓冲液
(pH8.8)
2.5
（
ml
）
10% SDS
0.1
（
ml
）
TEMED
5
（
ul
）
10%
过硫酸铵
50
（
ul
）
总体积
10
（
ml
）
3.
分离胶的灌注和聚合
用移液管将所配制的分离胶缓冲液沿着凝胶腔的长玻璃板的内面缓缓注
入，留出梳齿的齿高加
1cm
的空间以便灌注浓缩胶，然后加满蒸馏水。待分离胶凝固后，倒出蒸馏水，用滤纸吸干。
4.
浓缩胶的配制（
5%
）
试剂
体积
H2O
2.92
（
ml
）
凝胶贮备液
0.8
（
ml
）
分离胶缓冲液
(pH6.8)
1.25
（
ml
）
10% SDS
0.05
（
ml
）
TEMED
5
（
ul
）
10%
过硫酸铵
25
（
ul
）
总体积
5.05
（
ml
）
5.
浓缩胶的灌注和聚合
用移液管将所配制的浓缩胶缓冲液沿着凝胶腔的长玻璃板的内面缓缓
加入，将梳子插入胶液顶部，放置室温下待其聚合。
6.
样品的准备
在低分子量标准蛋白质和待测样品中分别加入适量还原缓冲液，放入沸水
中加热
3-5min
，取出冷至室温。
7.
加样
加入电缓冲液，小心拔出梳齿，用微量注射器向凝胶梳孔内加样。同时加
入
Marker
。
8.
电泳
上槽接负，下槽接正，打开直流电源，刚开始时，电压控制在不高于
100V
，
电流恒定在
10mA
；样品进入分离胶后，电压控制在不高于
140V
，电流恒定在
20mA
。待指示剂染料（溴酚蓝）迁移至凝胶下沿
1.0cm
处停止电泳。
9.
染和脱
电泳结束后，撬开玻璃板， 小心将胶取出，放入一大培养皿中。
染:加入染液，置于摇床上染
2h
。
脱:染完毕，倒出染液，加入脱液，置于摇床上脱，数小时更换
一次脱液，直至背景清晰，拍照。
10.
相对分子质量的计算
量出分离胶顶端距溴酚蓝间的距离
(cm)
以及各蛋白质样品区带中心与分离
胶顶端的距离
(cm)
，按下式计算相对迁移率
:
蛋白质样品距分离胶顶端迁移距离
(cm)
Rm =
溴酚蓝区带中心距分离胶顶端距离
(cm)
以标准蛋白质分子量的对数对相对迁移率作图，得到标准曲线，根据待测样
品相对迁移率，从标准曲线上计算出其分子量。
五
、
实验结果与分析
1.
根据凝胶结果，依据标准蛋白条带，判断各个蛋白质样品区带大概分子量。
2.
测量样品中各种蛋白质分子的相对迁移率
Rm
值，然后根据标准曲线计算
出各自分子量
3.
对实验操作及结果中不足之处进行分析。
六、实验注意事项
1
．丙烯酰胺和双丙烯酰胺具有很强的神经毒性并容易吸附于皮肤，操作时应免
避沾在脸、手等皮肤上。好戴一次性塑料手套操作。
2
．
10%
过硫酸铵现用现配，
4
℃冰箱贮存不超过
48
小时。
3
．灌制凝胶时，应避免产生汽泡，因为汽泡会影响电泳分离效果。
4.
蛋白加样量要合适。加样量太少，条带不清晰
;
加样量太多则泳道超载，条带
过宽而重叠，甚至覆盖至相邻泳道。
5
．刚灌注分离胶混合溶液后，应在分离胶液面上加
1-2cm
高的水层，以阻隔空
气。胶液面上加水层时要小心，缓缓叠加，以免冲坏凝胶的胶面。
七、思考题
1.
在不连续体系
SDS-PAGE
中，当分离胶加完后，需在其上加一层水，为什么
?
2.
电缓冲液中甘氨酸的作用
?
3.
在不连续体系
SDS-PAGE
中，分离胶与浓缩胶中均含有
TEMED
和
AP
，试述
其作用
?
4.
样品液为何在加样前需在沸水中加热几分钟
?
实验五 糖酵解中间产物的鉴定
一、实验目的
1
．掌握糖酵解中间产物的鉴定方法和原理。
2
．熟悉通过酶的抑制作用调节代谢途径。
3
．了解使中间产物堆积的方法在研究中间代谢中的意义。
二、 实验原理
在细胞质中，一分子葡萄糖通过一系列反应转化为两分子丙酮酸，并伴随着
ATP
生成的一系列反应是有机体获得化学能的原始的途径，也是原核生物和真
核生物糖类物质分解代谢的共同途径。利用碘乙酸对糖酵解过程中的
3-
磷酸甘油
醛脱氢酶特异地且不可逆地抑制作用，使
3-
磷酸甘油醛向前变化而积累。硫
酸肼作为稳定剂，用来保护
3-
磷酸苷油醛使其不自发分解。然后用
2,4-
二硝基苯
肼与
3-
磷酸甘油醛在碱性条件下形成
2,4-
二硝基苯肼
-
丙糖的棕复合物，其棕
程度与
3-
磷酸甘油醛含量成正比。从而明糖的分解代谢过程中，含有
3-
磷
酸甘油醛的中间产物。
三、实验试剂及器材
1.实验材料
新鲜酵母
2. 仪器:
离心管、移液枪；恒温水浴；离心机
3.试剂:
1
）
2,4-
二硝基苯肼
: 0.1 g 2,4-
二硝基苯肼溶于水
100 ml 2 mol/L
盐酸溶液中，储
于棕瓶中备用。
2
）
0.56 mol/L
硫酸肼溶液
:
称取
7.28 g
硫酸肼溶于
50 ml
水中，这时不会溶
解，当加入
NaOH
使
pH
值达
7.4
时则溶解。
3
）
5%
葡萄糖溶液。
4
）
10%
三氯乙酸溶液。
5
）
75 mol/L NaOH
溶液。
6
）
0.002 mol/L
碘乙酸溶液。
四、实验步骤
1．取小烧杯 3 支，编号，分别加入新鲜酵母 0.3 g，并按表 1 分别加入各试剂，
混匀。
2．将各杯混合物分别放入 37℃水浴中保温 1.0 小时，观察发酵管产生气泡的量
有何不同。
3．在 2 号和 3 号杯中按表 2 补加各试剂，摇匀后放 5-10 分钟
4. 将三支离心管中的上清液分别进行离心或者过滤，3000rpm, 3min。
5．取 3 支试管，分别加入上述滤液 0.5 ml，并按表 3 加入试剂和处理。
（取上清液 0.5 ml，加入 0.75 mol/L NaOH 0.5 ml，混匀后在 37℃水浴保温
10 分钟，然后分别向上述试管中加入 0.5 ml 2,4-二硝基苯肼，混匀后在 37℃
水浴保温 10 分钟，然后加入 0.75 mol/L NaOH 3.5 ml，观察实验结果。）
表 1 糖酵解中间产物的鉴定——发酵产生气泡观察
编号
5%
葡萄糖溶
液 （
ml
）
10%
三氯乙
酸（
ml
）
碘乙酸
（
ml
）
硫酸肼
（
ml
）
发泡量
1
10
（
ml
）
2
1
1
2
10
（
ml
）
0
1
1
3
10
（
ml
）
0
0
0
表 2
补加试剂
编号
10%
三氯乙酸
（
ml
）
碘乙酸
（
ml
）
硫酸肼
（
ml
）
发泡量
2
2
0
0
3
2
1
1
表 3 糖酵解中间产物的鉴定——二硝基苯肼反应
五、结果与分析
实验中哪一发酵管生成的气泡多?哪一管生成的颜深? 为什么?
描述观察到得实验现象并对实验结果加以分析。包括保温后的气泡量及的
显效果。
六、注意事项
1. 本实验虽为定性鉴定，但量取体积等人要求相对准确 ；
2. 注意试剂的添加顺序，编号不要弄混 ；
3. 每步反应前注意要充分混匀 。
七、思考与讨论
1. 实验鉴定的是哪种中间产物？
2. 实验中三氯乙酸、碘乙酸、硫酸肼三种试剂分别起什么作用？
3. 实验中的气泡是什么气体? 如何产生的？
编号
滤液
（ml）
0.75 mol/L
NaOH（ml）
摇
匀
，
室
温
放
置
5
分
钟
2，4-二硝基
苯肼 （ml）
摇
匀
，
室
温
放
置
5
分
钟
0.75 mol/L
NaOH（ml）
1
0.5
0.5
0.5
3.5
2
0.5
0.5
0.5
3.5
3
0.5
0.5
0.5
3.5
实验六 荧光分光光度法测定维生素 B2 的含量
一、实验目的
1．学荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素 B2 的分析原理；
2．掌握荧光分光光度计的使用方法；
3．了解分子荧光产生的机理.
二、 实验原理
维生素 B2 易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光
照易分解，对热稳定。 维生素 B2 在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为
光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测 VB2 的荧光时溶液要控制在
酸性范围内，且在避光条件下进行。
核黄素
(V
B2
)
光黄素
多维葡萄糖中含有维生素 B1、B2、C、D2 及葡萄糖，其中维生素 C 和葡萄糖
在水溶液中不发荧光，维生素 B1 本身无荧光，在碱性溶液中用铁氰化钾氧化后
才产生荧光，维生素 D2 用二氯乙酸处理后才有荧光，他们都不干扰维生素 B2
的测定。
维生素 B2 溶液在 430～440 nm 蓝光的照射下，发出绿荧光，其峰值波长为
545 nm。VB2 的荧光在 pH=6～7 时强，在 pH=11 时消失。
三、实验试剂及器材
1. 试剂:
100
μ
g/mlVB2 标准溶液（4%冰醋酸配制，置阴暗处保存）；冰乙酸；
多维葡萄糖粉试样
2. 器材:
岛津 RF5301PC 荧光分光光度计 ；微量移液器 ；容量瓶；石英比皿
四、实验步骤
1、打开氙灯，再打开主机，然后打开计算机启动工作站并初始化仪器。
2、仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目
设置适当的仪器参数:激发波长 Ex= 435 nm，发射波长 Em=545nm。
3、标准曲线测定，样品测定。
4、制作标准曲线，由标准曲线计算样品中维生素 B2 的含量。
5、 退出主程序，关闭计算机，先关主机，关氙灯。
五、结果与分析
1、 原始数据:标准曲线以及样本的荧光值。
测量 1-6 号标准曲线荧光值:VB2 的含量:0.0ug/ml、0.1ug/ml、0.2ug/ml、
0.3ug/ml、0.4ug/ml、0.5ug/ml。
测量 7 号样品荧光值
2、绘制出标准曲线:要求规范作图
铅笔作图；
横、纵坐标名称及单位；
日期、作者 、曲线名称；
曲线上体现出待测样品的荧光值及浓度值。
3、计算:样品中维生素 B2 的量。
要求: 写出公式、代入数据、写出结果。
实验八 pH 值和温度对酶促反应速度的影响
一、实验目的
1
．了解不同
pH
和温度对淀粉水解和唾液淀粉酶活性的影响。
2
．学会测定酶适
pH
和温度的方法。
二、实验原理
酶都是蛋白质，它的活性受环境 pH 的影响为显著。通常各种酶只有在一
定的 pH 范围内才表现它的活性，一种酶表现其高活性时 pH 的值，称为该酶的适 pH。本实验以唾液淀粉酶在不同的温度和 pH 下对淀粉的作用为例观察温度
和 pH 对酶活性的影响，淀粉的水解程度用其与碘液的呈反应加以区别。
三、实验试剂及器材
1. 试剂:
淀粉；碘；碘化钾；磷酸氢二钠；柠檬酸
2. 器材:
试管 吸量管 试管架 吸耳球
四、实验步骤
1. 溶液配制:
0.5%淀粉溶液（含 0.3%氯化钠）（新鲜配置），碘-碘化钾溶液（4 g 碘及碘化
钾 6 g 溶于 100 ml 蒸馏水中，于棕瓶中保存），0.2 mol/L 磷酸氢二钠溶液，
0.1 mol/L 柠檬酸溶液。
2. 样品收集
每人取一个干净的小烧杯，先用自来水漱口，将口腔内的食物残渣清除干净，
然后去蒸馏水约 20ml 含入口中，做咀嚼动作 3-4min,以分泌较多的唾液。将
口腔中的蒸馏水吐入干净的小烧杯中，此即为稀释的唾液淀粉酶液。
3. pH 对酶活性的影响
（
1）缓冲液的配制
编号
0.2mol/L
磷酸氢二纳（
ml
）
0.1mol/L
柠檬酸（
ml
）
缓冲液（
ml
）
1
5.15
4.85
5.0
2
6.16
3.39
6.2
3
7.72
2.28
6.8
4
9.08
0.92
7.4
5
9.72
0.28
8.0
（
2）底物的准备
6 支干燥的试管编号，依次加入不同 pH 的缓冲液各 3 ml，第 6 号试管与第
3 号相同。再向每个试管中添加 0.5%淀粉溶液 2 ml，摇匀。
（
3）酶促反应时间测定
向第 6 号试管加入稀释 100 倍的唾液 2 ml，摇匀后放入 37 ℃恒温水浴中保
温。每分钟取 1 滴混合液于离心管中或反应板上，加 1 滴碘化钾-碘溶液，呈橙
黄时取出试管，记录时间。
（
4）适 pH 测定
以 1 min 的间隔，依次向 1～5 号试管中加入稀释 200 倍的唾液 2 ml，摇匀，
同样以 1 min 间隔，将 5 只试管放入 37 ℃恒温水浴中保温，反应至所需时间。
依次取出，立即加入碘化钾-碘液 2 滴，充分摇匀。观察颜，可看出不同 pH
值时淀粉被水解的程度，不同 pH 值对唾液淀粉酶活性的影响，并确定其适 pH。
4. 温度对酶活性的影响
(1）取三支试管按下表操作:
试剂
管号
1
2
3
1%
淀粉溶液（
ml
）
1
1
1
放置条件
沸水浴
37
℃
冰浴
稀释唾液（滴）
4
4
4
分别按上述条件继续放置 10 min。
(2) 从三支试管中取出溶液 1 滴于离心管中或反应板上，加上 1 滴碘液，观察呈
现象，记录结果并解释其原因。
五、注意事项
1. 各管反应及操作应在同一水平；
2. 每管间隔相同的时间加样和终止反应以各管反应时间相同。
附件:生化实验.pdf
苏州高价废钼回收价格多少
为了钼精矿质量，有时需要进一步分离钼精矿中所含的铜、铅、铁等重金属矿物和氧化钙以及炭质矿物，如使用硫化钠、硫氢化钠、氰化物或铁氰化物抑制铜和杂质含量。钼精矿冶炼主要采用以下几种方法:
氧化焙烧:将辉钼矿进行焙烧得到钼焙砂，然后通过升华法或湿法制得三氧化钼，用氨浸出时生成钼酸铵进入溶液，与不溶物加以分离。溶液经浓缩结晶得到钼酸铵晶体，或加酸酸化生成钼酸沉淀，从而与可溶性杂质分离。二者经煅烧后都生成纯净的三氧化钼，然后用氢还原法生产金属钼。根据焙烧设备或添加组分的不同，可将该方法分为回转窑焙烧工艺、反射炉焙烧工艺、多膛炉焙烧工艺、流化床焙烧工艺、闪速炉焙烧工艺。该方法会产生大量的烟气，污染环境，钼回收率较低，伴生的稀有元素铼几乎随着烟气跑掉，不适合处理低品位矿石和复杂矿。
硝酸浸出法:在高压釜内使MOS2氧化为可溶性钼酸盐，该方法主要是消耗廉价的氧化剂-空气或纯氧。该方法需要高温高压，对反应设备要求高，反应条件，生产技术难度大，浸出过程的工艺条件也较难控制，生产过程中也存在一定的隐患，目前国内已暂停使用该方法。
次氯酸钠浸出法:主要用于处理低品味中矿、尾矿的浸出。在氧化浸出过程中，次氯酸钠本身也会缓慢分解析出氧，其他一些金属硫化物也会被次氯酸钠氧化，这些金属的离子货氢氧化物又会与钼酸根生产钼酸盐沉淀，促进溶液的钼又返回到渣中。该方法反应条件温和，生产易于控制，对设备要求不高，但原料次氯酸钠消耗量大而造成生产成本过高。
电氧化浸出法:是由次氯酸钠法改进而来，该方法是将已经浆化的辉钼矿物料加入到装有氯化钠溶液的电解槽中，在电氧化过程中，阳产物Cl2又与水反应，生产次氯酸根，次氯酸根再氧化矿物中的硫化钼，使钼以钼酸根形态进入溶液中。该方法继承了次氯酸钠浸出率高、反应条件温和、的特点，并且能够较为方便的控制、调节反应的方向、限度、速率。
目前也出现了一些新方法，如辉钼矿精矿不经氧化焙烧，直接用氧压煮法或细菌浸出法提取纯三氧化钼。对低品位氧化矿用硫酸浸出，从溶液中用离子交换法或萃取法提取纯三氧化钼。
钼是一种银灰金属，具有的高温力学性能, 且膨胀系数低, 导电、导热系数高；
熔点为2623°C；
密度为10.2g/cm3；
真空环境或惰性气体保护环境，纯钼较高耐高温1200度，钼合金较高耐高温1700度；
钼的弱氧化从 300 °C (572 °F) 开始，它是商用金属中热膨胀系数的金属之一。
制备工艺
1、钼粉纯度大于等于99.95%。采用热压烧结工艺对钼粉末进行致密化处理，将钼粉末置于模具中；将模具放入热压烧结炉中后，将热压烧结炉抽真空；调节热压烧结炉温度至1200～1500℃，压强大于20MPa，并保温保压2～5h；形成**钼靶材坯料；
2、对**钼靶材坯料进行热轧处理，将**钼靶材坯料加热至1200～1500℃，之后进行轧制处理，形成第二钼靶材坯料；
3、热轧处理后，对第二钼靶材坯料进行退火处理，退火处理的方法为调节温度为800～1200℃，保温加热第二钼靶材坯料2～5h，形成钼靶材。
钼材料的应用
1.可以在衬底上形成薄膜，广泛应用电子元器件和电子产品；
2.钼电接触电阻很低，具有优良的物理性质和化学性质，应用于玻璃镀膜上；生长CIGS 薄膜太阳能电池通常都是用金属钼作为背电；
3.应用于耐磨材料、高温腐蚀、装饰用品等行业；
4.钼材料还应用在真空高温行业，电子、能源、冶金行业，蓝宝石热场及航空航天制造行业等。
以上就是今日小编为大家介绍的高纯金属钼材料，感谢大家耐心地阅读！