温州上门回收废钼商家

　　温州上门回收废钼商家

　　我国在解放前没有钼加工工业。解放后经过长期的建设和技术改造，已形成一个完整的钼业生产体系，主要生产钼铁、氧化钼、钼酸盐等。钼铁和氧化钼等主要用于钢铁工业，年用钼量约8000t；大部分钼酸盐及金属钼制品，如钼粉、钼丝、钼条等，年用量约2700t[1]。近几年来，钼在钢铁工业中的用量增长缓慢，如钼在不锈钢中应用虽有所增加，由26%上升到31%，但在低合金钢中的应用却有所减少，由35%下降到33%。然而，在金属钼制品方面的用量却呈上升趋势。

　　我国钼铁生产在钼加工工业中占有较大的比例。钼与铁可按比例互溶，钼在钼铁中主要以FeMo和Fe3Mo的形式存在。

　　1.钼的用途

　　由于钼具有高强度、高耐磨性、高熔点、低膨胀系数、良好的导电及导热性等多种优良性能，因而在冶金、电子、电光源、宇航、机械、化工、汽车等工业部门均得到了广泛的应用，并被人们认为是目前有前途的高温结构材料。另外，大多数钼化合物是没有毒性的，因此可以利用钼取代有毒金属，如取代防腐剂中的铬、阻燃物和消烟物中的锑等。

　　钼在钢铁工业中重要的用途是冶炼合金钢，因为钼能降低钢的共晶分解温度，扩大钢的淬火温度范围，从而影响钢的淬火硬化深度。钼与铬、镍、钒等配合使用，能使钢具有均匀的结晶组织，提高钢的弹性限、耐磨性和冲击强度，防回火脆性、防碳的高温石墨化等性能。钼广泛地应用于冶炼结构、耐热钢和磁钢等系列钢种。钼还应用于合金铸铁，可使灰口铁晶粒细化，并能改变灰口铁在高温下的性能，提高耐磨性。不论是钢还是铸铁中的钼，均是以钼铁或氧化钼的形式加入，还有少理是以钼酸钙的形式加入。而用于航空材料的钛合金，钼则是以钼铝或钼钒铝中间合金的形式加入。

　　2.钼的资源状况

　　我国钼矿资源比较。截止1992年，全国已探明储量的大中小型钼矿区230[1]个，矿种以辉钼矿为主，保有储量约420.9万吨钼[2]，工业储量的40.6。全国共有储量在1万吨以上的大中型钼矿区65个，约占全国钼矿区的28%，其保有储量占部保有储量的96.5%，是亚洲量大的钼矿蕴藏，居世界第五位。

　　从九十年代开始，我国钼精矿产量不断增加，到1995年产量已达20719吨钼，相当于西方世界产量的20%[3]。我国已经成淡仅次于美国的世界上第二个大的原钼生产国，其原钼产量现有超过了智利。

　　我国钼资源遍及全国29个省（市、区）。主要分布在陕西、辽宁、河南、吉林、山东、河北及江西等省，其储量占全国总储量的77.9%[1]，其中大的原生钼矿生产企业是陕西金堆城钼业公司、河南栾川钼业公司、辽宁的杨家杖子矿务、锦西钼业公司和朝阳新华钼矿，这几家原生钼矿资源除满足国内钼铁、氧化钼、钼酸铵、钼试剂、催化剂、金属等钼制品的需要外，还可生产部分钼制品进入市场。

　　3.钼铁和氧化钼的生产

　　我国生产钼铁的厂家有几十个，生产规模较大的企业多分布在吉林、陕西、辽宁、河南等省的铁合金厂和钼业公司。它们既生产钼铁，也生产氧化钼压块产品。

　　3.1产品规格

　　我国钼铁依据国标GB3649-87组织生产。

　　根据我国的钼资源情况，为了合理利用低品位钼矿资源，八十年代冶金部钢铁研究总院、首钢铁合金厂等单位，利用低品位钼矿（钼含量45%以下）成功地冶炼出了FeMo60钼铁，为我国低品位钼矿的利用开辟了一条新路[4]。

　　国外氧化钼压块用于炼钢已是成熟的技术，早已得到推广。我国则是由钢铁研究总院会同锦州、上海铁合金厂研制成功，并在钢铁厂推广使用。氧化钼压块产品依据GB5064-87国家标准生产。

　　3.2钼精矿焙烧

　　向市场提供的钼精矿，一般以辉钼矿（MoS2）为主要成分。钢铁产品对于硫含量有一定的限制，因此用于炼钢合金化的钼铁和氧化钼的含硫量控制在一定的范围。为了经济而有效地炼制合格的钼铁和氧化钼产品，首先要对钼精矿进行氧化焙烧，以便乇底去除矿物中的硫。

　　我国用于钼精矿氧化焙烧的工艺设备有多膛焙烧炉、回转窑和反射炉等。较大的企业，如吉林铁合金厂、金堆城钼业公司等采用多膛炉，锦州铁合金厂等一些厂家则采用回转窑，而中小型企业主要采用反射炉。

　　我国采用较多的多膛炉是八层焙烧炉。它可以连续作业，但要求入炉钼精矿的成分要稳定，钼含量波动一般不得超过0.5—1.0%焙烧温度容易控制，2—4层温度控制低一些，有利于炉气畅通流动和料层呈疏松状态，便于维护炉况，操作稳定。辉钼矿中硫的烧除率达到99.5%，焙烧阶段钼的回收率（含烟尘回收）一般为98%。

　　我国回转窑焙烧钼精矿多采用重油加热。这种工艺各段温度容易控制，劳动条件和操作环境好，焙烧的钼矿砂质量可以满足冶炼钼铁S≤0.08%r 技术要求。

　　反射炉是我国早用于焙烧钼精矿的设备。这种炉子温度难于准确控制，热效率低，收尘设备不完善时回收率低，产品质量和数量不够稳定。因为它结构简单，投资少，见效快，以及便于操作，一般多为地方铁合金厂采用。但只要精心操作，产品质量同样能达到技术要求。

　　3.3钼铁冶炼

　　我国目前广泛使用的钼铁冶炼方法是炉外硅热还原法。采用的装置是镁砖砌筑炉衬的反应炉筒，将混合好的炉料装于炉筒内，由上部点火法冶炼制取。这种生产工艺用Si作为还原剂，Si以硅铁的形式加入，并添加一部分铝粒作为反应补充热源的促进剂。在炉料上部点后冶炼开始，还原反应进行，并放出大量的热量，促进反应自上而下自发进行。该方法的生产工艺设备简单，冶炼过程快，时间短，钼的回收率可达98%以上。

　　此外，八十年代以来，钢铁研究总院、吉林铁合金厂等单位[5]以氧化钼矿、焦粉为原料在直流转移弧式等离子炉内，利用等离子具有温度高、能量集中和气氛可以控制等特点，冶炼出了低碳、低硅、低铝的钼铁合金。目前，已有多家钼铁厂用此项技术，生产钼铁合金。

　　3.4氧化钼块生产

　　宣量包装氧化钼粉和氧化钼压块冶炼钢，既简化了钼添加剂的生产工艺，提高了钼的回收率，又可大量减少一些辅助材料的消耗。近几年来，国外广泛使用包装氧化钼粉和氧化钼压块用于炼钢工业，并大量使用氧化钼铁代替钼铁。早在八十年代，美国在使用氧化钼方面其消耗量已为钼铁的7倍，日本为3.6倍左右。这表明钢铁工业用钼作为添加剂，将以氧化钼取代钼铁。氧化钼产品主要采用多膛炉焙烧钼矿的方法来生产，如前苏联生产氧化钼规模大的工厂采用八层焙烧炉，氧化钼压块多采用焦油、沥青等作粘结剂压制而成。我国钼铁生产较大的铁合金厂，一般都有氧化钼压块产品。由于氧化钼的售价低于钼铁，而使用效果与钼铁相当，因此在钢铁厂颇受欢迎。

　　3.5提高钼回收率

　　钼铁生产重要的问题是确保高的钼回收率[6]

　　炉渣中钼铁颗粒的回收 对于含钼较高的炉渣，经过粉碎、磁选可使钼渣富集到钼含量为10—25%用于返回冶炼，以回收其中的钼。

　　烟尘回收 钼精矿价格约占冶炼钼铁成本的97.5%。凡是含有钼精矿粉尘的地方均应安装率的收尘设备。含Mo12—13%、Bi3—3.5%、Pb~10%、Zn~10%、Sn15—17%的大量 有金属烟尘装入电炉冶炼，可以得到含Mo12—13%、SiO217—24%、FeO14—15%的富钼渣，再将其返回钼铁炉冶炼。

　　钼铁精整屑与炉底结瘤铁则是大的回收钼的返回冶炼品。

　　4.钼铁和氧化钼产品的现状

　　4.1钼铁供求情况

　　我国含钼合金钢及含钼铸铁的生产量还处于一个较低水平阶段，钼钢比工业发达国家低，钼的消耗量相对较少[7]。但是，如前所述，近几年我国在钢铁工业上的用钼量增长缓慢，而在钼的精细化制品和金属钼制口方面钼的用量呈上升趋势。据有关方面统计，中国钼消耗量1993年为6500吨钼，1994年则达7000—7500吨钼，主要是消耗在冶金领域，约占整个钼消耗量的65%。由于我国钼资源，所以每年都有一定量的钼产品出口。1991—1994年每年出口钼分别为5.0、7.0、17.0、13.0百万磅钼，其中出口多的钼产品是钼铁，其出口量为:1991年1972吨，1992年1537吨，1993年1196.8吨。到1995年7月底，我国共出口钼铁5180吨。1998年上半年我钼出口大大减少，是钼铁的减少量为显著。

　　4.2钼铁和氧化钼价格

　　我国钼铁、氧化钼、钼制品以及钼精矿的价格通过与世界贸易接舅，钼价与市场基本同步。随着钼产品大量进入市场，致使我国含钼60%的钼铁售价在1994年高达10万元/吨。随着市场的起伏，到1995年8月钼铁价格下跌到6.45万元/吨，从1995年9月开始又有回升的趋势。

　　氧化钼的生产和销售我国报导不多。日刊报导，氧化钼市场价格在1995年1月上涨到每钼17.5美元的高点后又连续下跌，直到当年9月又开始回升，估计在1996年氧化钼的价格能保持在3—4美元/磅钼[8]。我国氧化钼价格随着市场的变化，也受到一定的影响。另外，我国受增值税及出口退税减少的影响，氧化钼原材料短缺等导致出口减少。1995年我国出口氧化钼价格为8美元/公斤钼。

　　总之，我国的用钼量仍然在不断增加，随着国内钢铁工业的发展，预计到2000年，我国的钼消耗量将增加70%。达到年消费量13000—14000吨钼[9]

　　5.结语

　　综上所述，我国钼资源，钼加工工业已具一定规模，并有一大批从事钼研究和开发的科技工作者。随着我国开放的深入和市场经济的发展，钼业市场与市场接轨，无疑将受钼市场波动的影响和冲击。因此，我国钼业界既面临发展机遇也面临严峻考验。形势要求我们面对现实，一方面严密注视国内外钼业发展现状和市场趋势，另一方面要努力提高产品质量，降低成本、拓宽钼制品用途，开发新品种。只有这样，我国钼业方能不断发展、兴旺，挤身于世界钼业行列。

　　摘要:从铜含量为0.77%～1.32%之间的铜渣中回收金属，回收金属主要为铜；然而一些渣也含有0.4%左右的钼，有可能将熔融的铜渣变为一种新原料来开发新工艺，得到新产品。从这点来讲，使用焙烧－浸出工艺处理铜渣是为了回收渣中的钼，用氧化焙烧法将氧化铁转化为不溶性赤铁矿，而铜和钼转化为可溶态溶于酸溶液。因为钼与氧化铁类晶石相结合，在浸出过程中它的还原会受四氧化三铁成分影响，使用硫酸进行渣浸出，钼的回收率超过80%。因此，使用两段工艺，即氧化焙烧后酸浸对钼进行回收，得到的结果表明这种方法的可行性。

　　0前 言

　　当前，受经济、环境及金属高消费问题的影响，迫使人们开发更经济有效、从二次资源中回收有价金属的方法得到了推广。智利每年要产出含铜量为0.77%～1.32%、含钼0.4%及大量的铁和二氧化硅的铜渣超过350万t，因而，在循环利用金属萃取工艺上，铜渣就显示出了它的经济潜力［1］。

　　从铜渣中萃取金属有许多湿法冶金方面的建议，这包括直接从硫酸或氯化铁中浸出，也有将渣与硫酸、硫酸铵、硫酸铁焙烧或在还原的条件下酸浸这方面的报道。然而，的报道都是涉及铜和钴或镍还原方面，关于通过湿法冶金工艺从铜渣中回收钼的数据少有报道［4-8］。

　　因此，有人提议焙烧低品位的钼精矿与石灰或碳酸钠，将钼转化为钼酸盐，也有人研究将废催化剂与碳酸钠焙烧，还原可溶性钼酸盐［9-12］。因此，生产钼有效的方法是将钼精矿焙烧得到三氧化钼，随后对三氧化钼进行还原得到金属钼［12］。所以，本工作的重点是研究氧化物经过焙烧后酸浸，从铜渣中回收钼的可行性。

　　1从理论上讲

　　铜渣中的矿物学成分及所呈现的相取决于加

　　工矿物的类型、炉子的类型及冷却方法等几方面的因素。缓冷导致渣的组分有相当数量的结晶，形成大量的不同矿物相，冷却的速度越慢，矿物相增长越大；缓冷速度快，有可能产生非晶体渣，因而金属在渣中分布越均匀［14］。当铜渣是晶体时，主相通常是伴有硅酸盐的硅酸铁盐及金属氧化物，铜以氧化物或硫化物或两者的混合体存在。

　　在铜的回收过程中，比较典型的铜渣分析显示，钼分散在整个氧化铁相中，钼高度氧化，并与四氧化三铁的化学结构相结合，如图1所示。

　　在冶炼前，由于钼从硫化铜矿中浮选的效率低，所以钼出现在渣中。同时，也有报道说钼与属于2FeO·MoO2-Fe3O4系列的尖晶石结合，浸出率低［15］。

　　在熔融状态下，除了带入液体的一些铜及硫化铜以外，从化学性质上讲，渣是均质的，在急速冷却条件下，它仍保持均质状态。当渣缓慢冷却时，它不会过氧化，且至少可能形成两种固体相:硅酸亚铁和部分被氧化成的四氧化三铁，铜仍为硫化物；这种条件下通常通过浮选回收铜。然而，根据以下反应，铜、硫化铜及氧化铜在高度氧化焙烧条件下，温度在600~800 ℃时，能被转化。

　　Cu+1/2O2=CuO                      (1)

　　Cu2S+2O2=2CuO+SO2                     (2)

　　Cu2O+2/3O2=2CuO               (3)

　　在这些条件下，当温度达到800～1 100 ℃之间时，硅酸铁在有氧条件下分解，具体如下:

　　2FeO·SiO2+1/2O2=Fe2O3+SiO2                  (4)

　　2FeO·SiO2+1/3O2=2/3Fe2O3+SiO2             (5)

　　根据以下反应，钼从它与氧化铁的尖晶石的组合物中分离出

　　2FeO·MoO2·Fe2O3+O2= 2Fe2O3+MoO3      (6)

　　图2实验室实验的结构图

　　因而，氧化焙烧会使铁硅酸盐分解，形成不溶于酸溶液的四氧化三铁和二氧化硅，这样在室温条件下，经过焙烧工序处理的产品就很容易通过酸浸进行处理，钼的还原效果就好，铜仍留在渣里面。

　　2实 验

　　缓冷和速冷却的系列冶炼铜渣的化学特性，如表1所示。

　　表1系列冶炼铜渣的化学性质* %

　　在一个典型的试验中，渣在实验室的管式Lindberg-Blue 炉0.5 cm厚的固定床上进行焙烧，条件如下:温度700 ℃，所用气体中混有90%的空气及10%的二氧化硫，物料粒度400目为100%，所得到的煅烧砂使用标准浸出测试法用如下条件在实验室中浸出:温度为18～20 ℃，硫酸为50 g/L，液固比为10∶1，物料粒度200目为100%，如图2所示浸出2 h。进行浸出测试以确定不经过煅烧步骤渣的溶解性，条件如下:温度为20 ℃，硫酸150 g/L，液固比为10∶1。

　　空气与二氧化硫混合是为了评估使用冶炼烟气促成四氧化三铁反应的可行性，正如以前报告中提到的计划那样，增加铜渣的商用价值［17］。

　　3结果与讨论

　　图3显示的是使用扫描电镜技术扫描到的缓冷渣的特性，微探针分析显示的是沉积的氧化物及硅酸盐的络合物，钼在这里形成了一个Fe-Mo-O的分离相，如1#、2#和4#相所示，络合物中铁的含量在52.03%~63.57%之间，钼含量在1.25%～6.35%之间。同时，这些相中二氧化硅的含量低，表明铁能在磁铁矿中呈现如FeO·MoO2-Fe3O4样的尖晶石结构，3#相显示的是玻璃状的铁硅酸盐型含钼量低的二氧化硅富集溶液。

　　图4是渣的扫描电镜分析，如图4a所示，可观察到铁分布在整个玻璃状的铁硅酸盐相中；图4b显示的是钼散布在渣中并与铁的分布路径紧邻的硅酸盐相。

　　铁的高萃取率表明铁硅酸盐的主要部分分解，这导致酸的消耗及溶液中胶态氧化硅增加，也增加了后期钼分离的难度。每吨渣所消耗的硫酸量在800～1 000 kg，溶液中的二氧化硅的富集量在10～15 g/L。

　　如图5所示，含不同成份磁铁矿的渣使用焙烧－浸出工艺，可观察到渣随着钼还原量的增加，四氧化三铁含量减少。

　　由于钼与氧化铁尖晶石结合在一起，酸浸不易分解，需要氧化成为钼的易溶态或氧化钼，这样才能在浸出过程中溶解，铁被氧化成为氧化铁，以便对钼进行选择性浸出。

　　在氧化过程中，氧化铁尖晶石转化为氧化铁，钼从铁尖晶石相中分离出，同时也被氧化成为它的高氧化态并反应生成热稳定的合成物，该合成物可以从氧化铁及硅酸盐合成物中不受限进行选择性浸出。

　　这里应当注意渣的熔点，这些合成物可以互溶，且由于氧化亚铁和四氧化三铁决定了铜渣的氧化态，可以得出钼的还原态为Mo4+。

　　因为渣中钼的浓度比较低，与以高的浓度并以Fe2+及Fe3+氧化物形态存在的氧化铁相比，很难经过分析实二氧化钼的存在。然而，有一点清楚，渣与四氧化三铁尖晶石晶化，形成二氧化钼固溶体，钼的浸出率低。

　　4结 论

　　铁和钼分布在整个玻璃状硅酸盐相，且在渣中钼的分布与铁的分布路径紧紧相邻，因此，钼主要与氧化铁尖晶石相结合。

　　由于氧化反应破坏了渣的结构，产生赤铁矿及方晶石，氧化铁及二氧化硅成为渣的主要成份，二氧化硅相中也应当有次要的氧化物成份出现，因而，在被氧化的渣中，硅酸盐及氧化铁就成为预期的两个主要的基本相。

　　人们普遍认为，渣氧化的结果是钼和铁被氧化成高氧化态，因而使用酸浸工艺就可以将钼从渣的氧化微粒中选择性浸出。

　　渣中的四氧化三铁显示，钼是嵌入在尖晶石固体相中，说明它在酸溶液中的溶解度低。然而,渣的溶解度测试结果显示，当渣中的四氧化三铁含量减少时，钼的萃取率提高，这对渣的焙烧转化同样有效。

　　废钼回收的环保意义与政策支持

　　钼矿开采伴生重金属污染和生态破坏，而废钼回收可大幅减少环境负荷。每回收1万吨废钼，相当于减少30万吨矿石开采和10万吨二氧化碳排放。全球多国通过政策鼓励回收:欧盟将钼列为关键原材料，要求成员国提高回收率；中国《“十四五”循环经济发展规划》明确支持稀有金属再生利用。企业若通过ISO 14001认证或采用清洁生产技术（如废酸循环利用），还可获得税收优惠，进一步强化环保与经济的双赢。

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　　化学元素解释:

　　钼(Molybdenum)是元素周期表第五周期WB族元素是一种化学元素，元素符号Mo，原子序数42，原子量95.94，是一种灰的过渡金属。金属呈银灰，为体心立方晶体结构，熔点2617℃，沸点4612℃，密度10.22g/cm3,电离能7.099电子伏特。钼和钨性质十分相似，具有高温强度好、硬度高、密度大、抗腐蚀能力强、热膨胀系数小、良好的导电和导热等特性。钼的纯金属是银白，坚硬。把少量钼加到钢之中，可使钢变硬。钼是对植物很重要的营养素，也在一些酶之中找得到。在常温下不受空气的侵蚀。跟盐酸或氢氟酸不起反应。化合价+2、+4和+6，稳定化合物为+6价。钼的高价氧化态化合物呈酸性，低价氧化态化合物呈碱性，+6价离子具有很强的形成配合物倾向。致密钼在常温空气中稳定，400℃轻度氧化，500℃迅速氧化。1000℃时铂能吸收大量氢形成固溶体。1500℃时钼和氮反应生成氮化钼，和碳作用生成Mo2C，和硫作用生成Mo乓，重要的钼化物有三氧化钼、仲钼酸按、铂酸钠、钼酸钙、钼酸钡、六氟化钼以及各种钼聚合物。主要矿物是辉钼矿(MoS2)。将辉钼矿煅烧成三氧化钼，再用氢或铝热法还原而制得。

　　钼的地壳丰度为1.1x10-4%。已发现钼矿约20种，具有工业价值的钼矿物主要为辉钼矿(Mo凡)，其次为钨相钙矿、铁铂矿、彩钼铅矿、铂铜矿等，已探明世界钼储量2680万吨，美国储量居世界位，其次为中国和智利。中国钼矿主要分布在陕西、辽宁、河南等省。中国从1940年开始铂矿开采和选矿，20世纪50年代相继建成了钼冶炼和相铁生产厂，目前已形成从矿山开采、冶炼到加工较完整的钼工业生产体系，能生产国内所需的各种钼制品、钼合金和钼钢，生产规模达年产钼近1.5万吨水平，其中一半用于出口。

　　钼在钢铁中的用量占总消费量的80%以上。金属钼及合金用于制造电子管、晶体管等电子器件，钼合金用于航天航空等用的各种高温部件，石油化学工业中钼主要用作制造各种催化剂、有机合成、煤液化、阻燃剂、消烟剂等。钼酸按等为重要的农业微量元素肥料。

　　元素名称:钼

　　元素符号:Mo

　　元素英文名称:Molybdenum

　　元素类型:金属元素

　　原子体积:(立方厘米/摩尔) :9.4

　　元素在太阳中的含量:(ppm):0.009

　　元素在海水中的含量:(ppm):0.01

　　地壳中含量:(ppm):1.5

　　相对原子质量:95.94

　　原子序数:42

　　质子数:42

　　中子数:54

　　所属周期:5

　　所属族数:VIB

　　电子层排布:2-8-18-13-1

　　氧化态:Main Mo+6

　　Other Mo-2, Mo0, Mo+1, Mo+2, Mo+3, Mo+4, Mo+5

　　电离能 (kJ /mol)

　　M - M+ 685

　　M+ - M2+ 1558

　　M2+ - M3+ 2621

　　M3+ - M4+ 4480

　　M4+ - M5+ 5900

　　M5+ - M6+ 6560

　　M6+ - M7+ 12230

　　M7+ - M8+ 14800

　　M8+ - M9+ 16800

　　M9+ - M10+ 19700

　　晶体结构:晶胞为体心立方晶胞，每个晶胞含有2个金属原子。

　　晶胞参数:

　　a = 314.7 pm

　　b = 314.7 pm

　　c = 314.7 pm

　　α = 90°

　　β = 90°

　　γ = 90°

　　莫氏硬度:5.5

　　声音在其中的传播速率:(m/S):5400

　　1782年，瑞典的埃尔姆，用亚麻子油调过的木炭和钼酸混合物密闭灼烧，而得到钼。

　　1953年确知钼为人体及动植物的微量元素。

　　主要矿物是辉钼矿[2](MoS2)。

　　天然辉钼矿MoS是一种软的黑矿物，外型和石墨相似。18世纪末以前，欧洲市场上两者都以“molybdenite”名称出售。1779年，舍勒指出石墨与molybdenite(辉钼矿)是两种不同的物质。他发现硝酸对石墨没有影响，而与辉钼矿反应，获得一种白垩状的白粉末，将它与碱溶液共同煮沸，结晶析出一种盐。他认为这种白粉末是一种金属氧化物，用木炭混合后强热，没有获得金属，但与硫共热后却得到原来的辉钼矿。1782年，瑞典一家矿场主埃尔摩从辉钼矿中分离出金属，命名为molybdenum，元素符号定为Mo。我们译成钼。它得到贝齐里乌斯等人的承认。

　　钼-99是钼的放射性同位素之一，他在医院里用于制备锝-99。锝-99是一种放射性同位素，病人服用后可用于内脏器官造影。用于该种用途的钼-99通常用氧化铝粉吸收后存储在相对较小的容器中。当钼-99衰变时生成锝-99，在需要时可把锝-99从容器中取出发给病人。

　　纯钼丝用于高温电炉;钼片用来制造无线电器村和X射线器材;合金钢中加钼可以提高弹性限、抗腐蚀性能以及保持永久磁性等。钼是植物生长和发育中所需七种微量营养元素中的一种，没有它，植物就无法生存。动物和鱼类与植物一样，同样需要钼。

　　纯钼丝用于高温电炉和电火花加工还有线切割加工;钼片用来制造无线电器村和X射线器材;合金钢中加钼可以提高弹性限、抗腐蚀性能以及保持永久磁性等。钼是植物生长和发育中所需七种微量营养元素中的一种，没有它，植物就无法生存。动物和鱼类与植物一样，同样需要钼。

　　钼 - 元素辅助资料:

　　天然辉钼矿MoS是一种软的黑矿物，外型和石墨相似。18世纪末以前，欧洲市场上两者都以molybadenite名称出售。1779年，舍勒指出石墨与molybadenite是两种不同的物质。他发现硝酸对石墨没有影响，而与molybadenite反应，获得一种白垩状的白粉末，将它与碱溶液共同煮沸，结晶析出一种盐。他认为这种白粉末是一种金属氧化物，用木炭混合后强热，没有获得金属，但与硫共热后却得到原来的molybadenite。1782年，瑞典一家矿场主埃尔摩从molybadenite中分离出金属，命名为molybdenum，元素符号定为Mo。我们译成钼。它得到贝齐里乌斯等人的承认。

　　辉钼矿精矿是提取钼的主要原料。也有使用钼酸铅矿、钼中矿、钼细泥。钼提取冶金过程包括钼精矿分解、铝溶液净化、钼化合物制取、钼粉制取、钼精炼等步骤。主要冶金产品为钼酸按、钼酸钠、氧化钼、钼粉、钼条等。

　　钼精矿分解

　　铝矿有硫化矿和氧化矿两类，分解方法分火法和湿法两类，火法处理硫化矿，主要为辉钼精矿氧化焙烧。辉钼矿分解主要是将钼的硫化物转化成氧化物或粗钼酸盐溶液。钼精矿分解主要采用多膛炉氧化焙烧、流态化焙烧或氧压煮等方法。

　　钼溶液净化

　　钼精矿焙烧、浸出所得钼酸钠溶液或钼酸按溶液尚含有铜、镁、铁、镍、锌、钨、锑等金属杂质和硅、砷、磷、硫等非金属杂质，需要净化除去，方可用作制取纯钼化合的原料，工业上净化方法有传统化学净化法(硫化物沉淀法、按镁盐沉淀法、酸沉淀法等)、钼溶剂萃取法、离子交换法等。当前传统化学净化法有试剂耗量大等缺点，有被溶剂萃取和离子交换取代的趋势。此外，还研究开发了膜分离净化法，该法既能除去钼溶液中的杂质，又能提高钼浓度，是一种很有前途的方法，由于钼和钨性质钼近，钼溶液净化中钨的去除( 1.9—2.1 ,说明有部分降解荧光光谱

　　链 cDNA 的合成:

　　以 RNA 为模板，反转录为 cDNA，由逆转录酶催化，该酶合成 DNA 时需要引

　　物引导，常用引物是 oligo dT、随机引物或基因特异引物（GSP）维生素 B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，

　　对热稳定。维生素 B2 溶液在 430～440 nm 蓝光的照射下，发出绿荧光，荧

　　光峰在 535 nm。维生素 B2 在 pH=6～7 的溶液中荧光强度大，在 pH=11 的碱

　　性溶液中荧光消失，所以可以用荧光光度法测维生素 B2 的含量。

　　三、试剂与仪器:

　　总 RNA 提取试剂盒（天根 RNAprep Pure Cell/Bacteriit）；链 cDNA

　　合成试剂盒（Tara PrimeScript™ RT Master Mix）；无菌，无ＲＮＡ酶离心

　　管无菌，无 RNA 酶枪头低温离心机等

　　四、实验操作:

　　1.提取总 RNA

　　1） 裂解细胞:确定细胞数量，吸除细胞培养基上清，加入 PBS 后吸除，加入

　　600ul 裂解液 RL（胍盐/ß-巯基乙醇）5min。

　　2） 将溶液转移至过滤柱 CS 上(过滤柱 CS 放在收集管中)，12,000 rpm 离

　　心 2 min，收集滤液。

　　3） 向滤液中加入 1 倍体积 70%乙醇，混匀，得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱

　　CR3 中， 12,000 rpm 离心 60 sec，倒掉收集管中的废液。

　　4） 向吸附柱 CR3 中加入 350

　　μ

　　l 去蛋白液 RW1，12,000 rpm 离心 60 sec，倒掉

　　收集管中的废液，将吸附柱 CR3 放回收集管中。

　　5） 向吸附柱 CR3 加入 80

　　μ

　　l 的 DNase I 工作液（10

　　μ

　　l DNase I 储存液

　　+70

　　μ

　　l RDD 溶液），室温放置 15 min。

　　6）向吸附柱 CR3 中加入 350

　　μ

　　l 去蛋白液 RW1，12,000 rpm 离心 60 sec，倒掉

　　收集管中的废液，将吸附柱 CR3 放回收集管中。

　　7）向吸附柱 CR3 中加入 500

　　μ

　　l 漂洗液 RW ，室温静置 2 min，12,000 rpm 离心

　　60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CR3 放回收集管中。再重复一次。

　　8）12,000 rpm 离心 2 min，倒掉废液。将吸附柱 CR3 置于室温放置 10 分钟，以

　　彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。

　　9）将吸附柱 CR3 转入一个新的 RNase-Free 离心管中，加入 30-100

　　μ

　　l

　　RNase-Free ddH2O 室温放置 2 min，12,000 rpm 离心 2 min，得到 RNA 溶液。

　　10）RNA 鉴定分析（浓度，纯度）。2. 采用 TaRa PrimeScript RT Master Mix 进行 cDNA 链合成:

　　1）按下列组分配制 RT 反应液

　　5X PrimeScrip Mix 2

　　μ

　　l

　　Total RNA (50

　　μ

　　M) -- ul

　　RNase free H2O up to 10

　　μ

　　l

　　2）反转录反应条件如下

　　37℃ 15min （反转录反应）

　　85℃ 5sec （反转录酶失活反应）

　　五、实验注意事项

　　1. 严格控制外源性 RNA 酶的污染:外源性的 RNA 酶存在于操作人员的手汗、唾

　　液等，也可存在于灰尘中，造成器械、玻璃制品、塑料制品、电泳槽、研究人

　　员的手及各种试剂的污染。

　　2. 大限度地抑制内源性的 RNA 酶:而各种组织和细胞中则含有大量内源性的

　　RNA 酶。

　　3. 戴手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致 RNase 污染。

　　4. 使用无 RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。

　　5. RNA 在裂解液 RL 中时不会被 RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不

　　含 RNase 的塑料和玻璃器皿。

　　6. 配制溶液应使用无 RNase 的水。

　　实验三 real-time PCR 测端粒酶 mRNA 表达

　　一、实验目的

　　1.掌握 RT-PCR 基因扩增的原理和过程

　　2.了解端粒酶的结构与功能

　　二、实验原理:

　　1. 实时定量 PCR 技术:

　　利用荧光信号的变化实时检测 PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，

　　通过 Ct 值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。

　　Ct 值的定义:PCR 扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数。

　　Xn = X0 × （

　　1＋En）Ct

　　lg Xt ＝lg X0 ＋ Ct lg（

　　1＋En）

　　Ct = -k lg X0 ＋ b

　　X0 :起始模板数量

　　En:扩增效率

　　Xt:荧光扩增信号达到阈值时扩增产物的量，在阈值设定以后，它是一个常数

　　Log 模板起始浓度与 Ct 值呈线性关系。

　　模板 DNA 量越多，荧光达到阈值的循环数越少，即 Ct 值越小。

　　2.常用荧光标记方法:

　　特异性荧光标记 TaqMan Probe

　　非特异性荧光标记 SYBR Green I:是一种结合于 dsDNA 双螺旋小沟区域

　　的具有绿激发波长的染料。

　　问题点:

　　SYBR Green I 与双链 DNA 进行结合后散发荧光，因此如果反应体系

　　中有非特异性扩增或引物二聚体的产生，也将同时被检测，从而可能导致检测

　　结果不准确。

　　关键点:

　　设计合适引物，非特异性扩增！

　　端粒酶:通过识别并结合富含胞嘧啶 C 的端粒末端，以自身 RNA 为模板， TER

　　催化，合成端粒的 DNA 重复序列，从而阻止随着 DNA 复制和细胞分裂所

　　造成的端粒的不断缩短， 进而稳定染体的长度，避免细胞因端粒丢失

　　所导致的凋亡。因此，端粒酶在细胞永生化和肿瘤发生中起着重要作用。

　　相对定量分析——2 -

　　∆ ∆

　　Ct 法

　　三、试剂与仪器:

　　1. LightCycler 480 SYBR Green I Master

　　2. LightCycler 8-Tube Strips (white)

　　3. 无菌，无ＲＮＡ酶离心管

　　4. 无菌，无ＲＮＡ酶枪头

　　四、实验操作:

　　1. 加样:试剂 体积

　　模板（稀释 5 倍） 2µl

　　Master mix，2×conc. 10µl

　　正向引物 1µl

　　反向引物 1µl

　　水，PCR 级别 6µl

　　总体积 20µl

　　2.PCR 程序设定:SYBR Green I 选择“SYBR Green I /HRM Dye”，反应总体积

　　20 ul。

　　3.设定每个程序中对应步骤的①温度(Target)、②信号获取模式(Acquisition

　　Mode)及 ③时间(Hold)。

　　4.设定完成后，放入样板，窗口右下方的“Start Run” 按钮将由灰变为蓝，

　　此时即可点击之，开始运行实验。

　　5.运行完毕后，点击界面左侧“Sample Editor”，对样本详细信息进行编辑。

　　6.点击界面左边的“Analysis”，进入分析界面，进行 Tm 分析 (Tm Calling) 分

　　析和相对定量 (Relative Quantification) 分析

　　五、结果分析

　　2 - △△Ct 法:假设目的基因和参照基因扩增效率都接近 100%

　　△Ct（第 n 组）＝16－17＝-1 △Ct（组）＝18－17.4=0.6

　　△△Ct=△Ct（第 n 组）－△Ct（组）＝-1－0.6＝－1.6

　　比率（癌细胞组/正常细胞组）=2－△△Ct＝2－（－1.6） = 3

　　所以 TERT 基因在癌细胞的表达水平是正常细胞的 3 倍。

　　要求实验报告分析出自己组对比组的结果

　　六、实验注意事项

　　1、能标准的使用微量移液器，使重复样本得到相同的结果。2、学会分析溶解曲线，得到循环 CT 值后学会如何分析结果。

　　实验四 蛋白分子量测定——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

　　一、实验目的

　　1.

　　学

　　SDS-PAGE

　　测定蛋白质分子量的基本原理

　　2.

　　掌握

　　SDS-PAGE

　　垂直板电泳的操作方法

　　二、实验原理

　　聚丙烯酰胺凝胶（

　　PAGE

　　）是由丙烯酰胺（

　　Acr

　　）和交联试剂

　　N,N

　　’

　　-

　　甲叉双丙

　　烯酰胺

　　(Bis)

　　在有引发剂（如过硫酸铵）和增速剂（如

　　N,N,N

　　’

　　,N

　　’

　　-

　　四甲基乙二胺，

　　TEMED

　　）的情况下聚合而成的。在一定浓度范围内，改变聚合体系中

　　Acr

　　和

　　Bis

　　的比例，可得到不同网眼大小的凝胶，由于凝胶的三维网状结构，对在凝胶中泳

　　动的不同分子量的质点有着选择和阻碍，因此具有分子筛效应，决定着聚丙烯酰

　　胺凝胶的有效分离笵围。

　　SDS-

　　聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进了十二烷基硫酸

　　钠（

　　sodium dodecyl sulfate

　　，简称

　　SDS

　　），

　　SDS

　　是一种阴离子去污剂，它能破坏

　　蛋白质分子之间以及与其他物质分子之间的非共价键，使蛋白质变性而改变原有

　　的空间构象。是在强还原剂，如巯基乙醇存在下，由于蛋白质分子内的二硫

　　键被还原剂打开，不易再氧化，这就了蛋白质分子与

　　SDS

　　充分结合，形成

　　带负电荷的

　　SDS-

　　蛋白质复合物。

　　带负电荷的蛋白质

　　-SDS

　　复合物由于结合了大量的

　　SDS

　　，使蛋白质丧失了原有的电荷状态，形成了仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除

　　了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异。

　　蛋白质

　　-SDS

　　复合物在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒。不同蛋

　　白质的

　　SDS

　　复合物的短轴长度都一样，约为

　　1.8nm

　　，而长轴则随蛋白质的分子

　　量成正比变化。这样的蛋白质

　　-SDS

　　复合物在凝胶中的迁移率，受蛋白质原

　　有电荷和形状的影响，而只是椭圆棒的长度，也就是蛋白质分子量的函数。

　　lgMw = -bRm + K

　　Mw

　　:蛋白质的分子量；

　　Rm

　　:相对迁移率

　　b

　　: 斜率

　　;

　　K

　　:截距

　　当条件一定时，

　　b

　　，

　　K

　　均为常数，即此时

　　lgMw

　　与

　　Rm

　　的关系为线性关系，

　　如以

　　lgMw

　　对

　　mR

　　作图，应得到一条直线，如上图。

　　若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量的对数作图，可获得一条标

　　准曲线。未知蛋白质的相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲

　　线上求得分子量。

　　三、实验试剂及仪器

　　1.

　　实验试剂

　　（

　　1

　　）

　　30%

　　丙烯酰胺（

　　Acr

　　）:

　　Acr/

　　甲叉双丙烯酰胺

　　(Bis)=29:1

　　（

　　2

　　）

　　10%SDS

　　（十二烷基磺酸钠）

　　（

　　3

　　）

　　10%

　　过硫酸铵

　　(AP)

　　（

　　4

　　）

　　TEMED

　　（四甲基乙二胺）

　　（

　　5

　　）

　　2

　　×上样缓冲液:

　　10%SDS

　　（

　　4ml

　　）

　　+

　　巯基乙醇（

　　1ml

　　）

　　+0.2%

　　溴酚蓝（

　　2ml +

　　甘油

　　2ml +1M pH6.8Tris-HCl

　　（

　　1ml

　　）

　　（

　　6

　　） 浓缩胶缓冲液（

　　1M Tris-Cl

　　缓冲液

　　pH6.8

　　）

　　（

　　7

　　） 分离胶缓冲液（

　　1.5M Tris-Cl

　　缓冲液

　　pH8.8

　　）

　　（

　　8

　　） 电泳缓冲液

　　: (SDS 20g

　　，

　　Tris 60g,

　　甘氨酸

　　282.2g, pH8.3

　　）加蒸馏水使其溶

　　解后定容至

　　2L

　　。

　　（

　　9

　　） 固定液:乙醇

　　500ml

　　，冰乙酸

　　100ml

　　混匀，

　　（

　　10

　　） 染液:考马斯亮蓝

　　R250 1.25g

　　，甲醇

　　225ml

　　，冰乙酸

　　50ml

　　，蒸馏水定

　　溶至

　　1L

　　。

　　（

　　11

　　） 脱液:冰乙酸

　　80ml

　　，乙醇

　　250ml

　　，加蒸馏水定容至

　　1L

　　。

　　2.

　　实验仪器

　　（

　　1

　　）垂直板电泳装置、电泳仪、制胶架

　　（

　　2

　　）移液枪、移液管

　　（

　　3

　　） 烧杯、培养皿

　　（

　　4

　　） 离心机

　　四、实验步骤

　　1.

　　装板

　　将垂直板型电泳装置内的板状凝胶模子取出，将玻璃片洗净、凉干、嵌入

　　凹槽中，形成一个“夹心”凝胶腔，

　　把装好的凝胶腔置于仰放的电上槽。将电泳槽、凝胶模子串成一体的垂

　　直板型电泳装置，垂直放置在水平台面上，灌注胶液。

　　2.

　　分离胶的配制（

　　12%

　　）

　　试剂

　　体积

　　H2O

　　3.35

　　（

　　ml

　　）

　　凝胶贮备液

　　2.5

　　（

　　ml

　　）

　　分离胶缓冲液

　　(pH8.8)

　　2.5

　　（

　　ml

　　）

　　10% SDS

　　0.1

　　（

　　ml

　　）

　　TEMED

　　5

　　（

　　ul

　　）

　　10%

　　过硫酸铵

　　50

　　（

　　ul

　　）

　　总体积

　　10

　　（

　　ml

　　）

　　3.

　　分离胶的灌注和聚合

　　用移液管将所配制的分离胶缓冲液沿着凝胶腔的长玻璃板的内面缓缓注

　　入，留出梳齿的齿高加

　　1cm

　　的空间以便灌注浓缩胶，然后加满蒸馏水。待分离胶凝固后，倒出蒸馏水，用滤纸吸干。

　　4.

　　浓缩胶的配制（

　　5%

　　）

　　试剂

　　体积

　　H2O

　　2.92

　　（

　　ml

　　）

　　凝胶贮备液

　　0.8

　　（

　　ml

　　）

　　分离胶缓冲液

　　(pH6.8)

　　1.25

　　（

　　ml

　　）

　　10% SDS

　　0.05

　　（

　　ml

　　）

　　TEMED

　　5

　　（

　　ul

　　）

　　10%

　　过硫酸铵

　　25

　　（

　　ul

　　）

　　总体积

　　5.05

　　（

　　ml

　　）

　　5.

　　浓缩胶的灌注和聚合

　　用移液管将所配制的浓缩胶缓冲液沿着凝胶腔的长玻璃板的内面缓缓

　　加入，将梳子插入胶液顶部，放置室温下待其聚合。

　　6.

　　样品的准备

　　在低分子量标准蛋白质和待测样品中分别加入适量还原缓冲液，放入沸水

　　中加热

　　3-5min

　　，取出冷至室温。

　　7.

　　加样

　　加入电缓冲液，小心拔出梳齿，用微量注射器向凝胶梳孔内加样。同时加

　　入

　　Marker

　　。

　　8.

　　电泳

　　上槽接负，下槽接正，打开直流电源，刚开始时，电压控制在不高于

　　100V

　　，

　　电流恒定在

　　10mA

　　；样品进入分离胶后，电压控制在不高于

　　140V

　　，电流恒定在

　　20mA

　　。待指示剂染料（溴酚蓝）迁移至凝胶下沿

　　1.0cm

　　处停止电泳。

　　9.

　　染和脱

　　电泳结束后，撬开玻璃板， 小心将胶取出，放入一大培养皿中。

　　染:加入染液，置于摇床上染

　　2h

　　。

　　脱:染完毕，倒出染液，加入脱液，置于摇床上脱，数小时更换

　　一次脱液，直至背景清晰，拍照。

　　10.

　　相对分子质量的计算

　　量出分离胶顶端距溴酚蓝间的距离

　　(cm)

　　以及各蛋白质样品区带中心与分离

　　胶顶端的距离

　　(cm)

　　，按下式计算相对迁移率

　　:

　　蛋白质样品距分离胶顶端迁移距离

　　(cm)

　　Rm =

　　溴酚蓝区带中心距分离胶顶端距离

　　(cm)

　　以标准蛋白质分子量的对数对相对迁移率作图，得到标准曲线，根据待测样

　　品相对迁移率，从标准曲线上计算出其分子量。

　　五

　　、

　　实验结果与分析

　　1.

　　根据凝胶结果，依据标准蛋白条带，判断各个蛋白质样品区带大概分子量。

　　2.

　　测量样品中各种蛋白质分子的相对迁移率

　　Rm

　　值，然后根据标准曲线计算

　　出各自分子量

　　3.

　　对实验操作及结果中不足之处进行分析。

　　六、实验注意事项

　　1

　　．丙烯酰胺和双丙烯酰胺具有很强的神经毒性并容易吸附于皮肤，操作时应免

　　避沾在脸、手等皮肤上。好戴一次性塑料手套操作。

　　2

　　．

　　10%

　　过硫酸铵现用现配，

　　4

　　℃冰箱贮存不超过

　　48

　　小时。

　　3

　　．灌制凝胶时，应避免产生汽泡，因为汽泡会影响电泳分离效果。

　　4.

　　蛋白加样量要合适。加样量太少，条带不清晰

　　;

　　加样量太多则泳道超载，条带

　　过宽而重叠，甚至覆盖至相邻泳道。

　　5

　　．刚灌注分离胶混合溶液后，应在分离胶液面上加

　　1-2cm

　　高的水层，以阻隔空

　　气。胶液面上加水层时要小心，缓缓叠加，以免冲坏凝胶的胶面。

　　七、思考题

　　1.

　　在不连续体系

　　SDS-PAGE

　　中，当分离胶加完后，需在其上加一层水，为什么

　　?

　　2.

　　电缓冲液中甘氨酸的作用

　　?

　　3.

　　在不连续体系

　　SDS-PAGE

　　中，分离胶与浓缩胶中均含有

　　TEMED

　　和

　　AP

　　，试述

　　其作用

　　?

　　4.

　　样品液为何在加样前需在沸水中加热几分钟

　　?

　　实验五 糖酵解中间产物的鉴定

　　一、实验目的

　　1

　　．掌握糖酵解中间产物的鉴定方法和原理。

　　2

　　．熟悉通过酶的抑制作用调节代谢途径。

　　3

　　．了解使中间产物堆积的方法在研究中间代谢中的意义。

　　二、 实验原理

　　在细胞质中，一分子葡萄糖通过一系列反应转化为两分子丙酮酸，并伴随着

　　ATP

　　生成的一系列反应是有机体获得化学能的原始的途径，也是原核生物和真

　　核生物糖类物质分解代谢的共同途径。利用碘乙酸对糖酵解过程中的

　　3-

　　磷酸甘油

　　醛脱氢酶特异地且不可逆地抑制作用，使

　　3-

　　磷酸甘油醛向前变化而积累。硫

　　酸肼作为稳定剂，用来保护

　　3-

　　磷酸苷油醛使其不自发分解。然后用

　　2,4-

　　二硝基苯

　　肼与

　　3-

　　磷酸甘油醛在碱性条件下形成

　　2,4-

　　二硝基苯肼

　　-

　　丙糖的棕复合物，其棕

　　程度与

　　3-

　　磷酸甘油醛含量成正比。从而明糖的分解代谢过程中，含有

　　3-

　　磷

　　酸甘油醛的中间产物。

　　三、实验试剂及器材

　　1.实验材料

　　新鲜酵母

　　2. 仪器:

　　离心管、移液枪；恒温水浴；离心机

　　3.试剂:

　　1

　　）

　　2,4-

　　二硝基苯肼

　　: 0.1 g 2,4-

　　二硝基苯肼溶于水

　　100 ml 2 mol/L

　　盐酸溶液中，储

　　于棕瓶中备用。

　　2

　　）

　　0.56 mol/L

　　硫酸肼溶液

　　:

　　称取

　　7.28 g

　　硫酸肼溶于

　　50 ml

　　水中，这时不会溶

　　解，当加入

　　NaOH

　　使

　　pH

　　值达

　　7.4

　　时则溶解。

　　3

　　）

　　5%

　　葡萄糖溶液。

　　4

　　）

　　10%

　　三氯乙酸溶液。

　　5

　　）

　　75 mol/L NaOH

　　溶液。

　　6

　　）

　　0.002 mol/L

　　碘乙酸溶液。

　　四、实验步骤

　　1．取小烧杯 3 支，编号，分别加入新鲜酵母 0.3 g，并按表 1 分别加入各试剂，

　　混匀。

　　2．将各杯混合物分别放入 37℃水浴中保温 1.0 小时，观察发酵管产生气泡的量

　　有何不同。

　　3．在 2 号和 3 号杯中按表 2 补加各试剂，摇匀后放 5-10 分钟

　　4. 将三支离心管中的上清液分别进行离心或者过滤，3000rpm, 3min。

　　5．取 3 支试管，分别加入上述滤液 0.5 ml，并按表 3 加入试剂和处理。

　　（取上清液 0.5 ml，加入 0.75 mol/L NaOH 0.5 ml，混匀后在 37℃水浴保温

　　10 分钟，然后分别向上述试管中加入 0.5 ml 2,4-二硝基苯肼，混匀后在 37℃

　　水浴保温 10 分钟，然后加入 0.75 mol/L NaOH 3.5 ml，观察实验结果。）

　　表 1 糖酵解中间产物的鉴定——发酵产生气泡观察

　　编号

　　5%

　　葡萄糖溶

　　液 （

　　ml

　　）

　　10%

　　三氯乙

　　酸（

　　ml

　　）

　　碘乙酸

　　（

　　ml

　　）

　　硫酸肼

　　（

　　ml

　　）

　　发泡量

　　1

　　10

　　（

　　ml

　　）

　　2

　　1

　　1

　　2

　　10

　　（

　　ml

　　）

　　0

　　1

　　1

　　3

　　10

　　（

　　ml

　　）

　　0

　　0

　　0

　　表 2

　　补加试剂

　　编号

　　10%

　　三氯乙酸

　　（

　　ml

　　）

　　碘乙酸

　　（

　　ml

　　）

　　硫酸肼

　　（

　　ml

　　）

　　发泡量

　　2

　　2

　　0

　　0

　　3

　　2

　　1

　　1

　　表 3 糖酵解中间产物的鉴定——二硝基苯肼反应

　　五、结果与分析

　　实验中哪一发酵管生成的气泡多?哪一管生成的颜深? 为什么?

　　描述观察到得实验现象并对实验结果加以分析。包括保温后的气泡量及的

　　显效果。

　　六、注意事项

　　1. 本实验虽为定性鉴定，但量取体积等人要求相对准确 ；

　　2. 注意试剂的添加顺序，编号不要弄混 ；

　　3. 每步反应前注意要充分混匀 。

　　七、思考与讨论

　　1. 实验鉴定的是哪种中间产物？

　　2. 实验中三氯乙酸、碘乙酸、硫酸肼三种试剂分别起什么作用？

　　3. 实验中的气泡是什么气体? 如何产生的？

　　编号

　　滤液

　　（ml）

　　0.75 mol/L

　　NaOH（ml）

　　摇

　　匀

　　，

　　室

　　温

　　放

　　置

　　5

　　分

　　钟

　　2，4-二硝基

　　苯肼 （ml）

　　摇

　　匀

　　，

　　室

　　温

　　放

　　置

　　5

　　分

　　钟

　　0.75 mol/L

　　NaOH（ml）

　　1

　　0.5

　　0.5

　　0.5

　　3.5

　　2

　　0.5

　　0.5

　　0.5

　　3.5

　　3

　　0.5

　　0.5

　　0.5

　　3.5

　　实验六 荧光分光光度法测定维生素 B2 的含量

　　一、实验目的

　　1．学荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素 B2 的分析原理；

　　2．掌握荧光分光光度计的使用方法；

　　3．了解分子荧光产生的机理.

　　二、 实验原理

　　维生素 B2 易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光

　　照易分解，对热稳定。 维生素 B2 在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为

　　光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测 VB2 的荧光时溶液要控制在

　　酸性范围内，且在避光条件下进行。

　　核黄素

　　(V

　　B2

　　)

　　光黄素

　　多维葡萄糖中含有维生素 B1、B2、C、D2 及葡萄糖，其中维生素 C 和葡萄糖

　　在水溶液中不发荧光，维生素 B1 本身无荧光，在碱性溶液中用铁氰化钾氧化后

　　才产生荧光，维生素 D2 用二氯乙酸处理后才有荧光，他们都不干扰维生素 B2

　　的测定。

　　维生素 B2 溶液在 430～440 nm 蓝光的照射下，发出绿荧光，其峰值波长为

　　545 nm。VB2 的荧光在 pH=6～7 时强，在 pH=11 时消失。

　　三、实验试剂及器材

　　1. 试剂:

　　100

　　μ

　　g/mlVB2 标准溶液（4%冰醋酸配制，置阴暗处保存）；冰乙酸；

　　多维葡萄糖粉试样

　　2. 器材:

　　岛津 RF5301PC 荧光分光光度计 ；微量移液器 ；容量瓶；石英比皿

　　四、实验步骤

　　1、打开氙灯，再打开主机，然后打开计算机启动工作站并初始化仪器。

　　2、仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目

　　设置适当的仪器参数:激发波长 Ex= 435 nm，发射波长 Em=545nm。

　　3、标准曲线测定，样品测定。

　　4、制作标准曲线，由标准曲线计算样品中维生素 B2 的含量。

　　5、 退出主程序，关闭计算机，先关主机，关氙灯。

　　五、结果与分析

　　1、 原始数据:标准曲线以及样本的荧光值。

　　测量 1-6 号标准曲线荧光值:VB2 的含量:0.0ug/ml、0.1ug/ml、0.2ug/ml、

　　0.3ug/ml、0.4ug/ml、0.5ug/ml。

　　测量 7 号样品荧光值

　　2、绘制出标准曲线:要求规范作图

　　铅笔作图；

　　横、纵坐标名称及单位；

　　日期、作者 、曲线名称；

　　曲线上体现出待测样品的荧光值及浓度值。

　　3、计算:样品中维生素 B2 的量。

　　要求: 写出公式、代入数据、写出结果。

　　实验八 pH 值和温度对酶促反应速度的影响

　　一、实验目的

　　1

　　．了解不同

　　pH

　　和温度对淀粉水解和唾液淀粉酶活性的影响。

　　2

　　．学会测定酶适

　　pH

　　和温度的方法。

　　二、实验原理

　　酶都是蛋白质，它的活性受环境 pH 的影响为显著。通常各种酶只有在一

　　定的 pH 范围内才表现它的活性，一种酶表现其高活性时 pH 的值，称为该酶的适 pH。本实验以唾液淀粉酶在不同的温度和 pH 下对淀粉的作用为例观察温度

　　和 pH 对酶活性的影响，淀粉的水解程度用其与碘液的呈反应加以区别。

　　三、实验试剂及器材

　　1. 试剂:

　　淀粉；碘；碘化钾；磷酸氢二钠；柠檬酸

　　2. 器材:

　　试管 吸量管 试管架 吸耳球

　　四、实验步骤

　　1. 溶液配制:

　　0.5%淀粉溶液（含 0.3%氯化钠）（新鲜配置），碘-碘化钾溶液（4 g 碘及碘化

　　钾 6 g 溶于 100 ml 蒸馏水中，于棕瓶中保存），0.2 mol/L 磷酸氢二钠溶液，

　　0.1 mol/L 柠檬酸溶液。

　　2. 样品收集

　　每人取一个干净的小烧杯，先用自来水漱口，将口腔内的食物残渣清除干净，

　　然后去蒸馏水约 20ml 含入口中，做咀嚼动作 3-4min,以分泌较多的唾液。将

　　口腔中的蒸馏水吐入干净的小烧杯中，此即为稀释的唾液淀粉酶液。

　　3. pH 对酶活性的影响

　　（

　　1）缓冲液的配制

　　编号

　　0.2mol/L

　　磷酸氢二纳（

　　ml

　　）

　　0.1mol/L

　　柠檬酸（

　　ml

　　）

　　缓冲液（

　　ml

　　）

　　1

　　5.15

　　4.85

　　5.0

　　2

　　6.16

　　3.39

　　6.2

　　3

　　7.72

　　2.28

　　6.8

　　4

　　9.08

　　0.92

　　7.4

　　5

　　9.72

　　0.28

　　8.0

　　（

　　2）底物的准备

　　6 支干燥的试管编号，依次加入不同 pH 的缓冲液各 3 ml，第 6 号试管与第

　　3 号相同。再向每个试管中添加 0.5%淀粉溶液 2 ml，摇匀。

　　（

　　3）酶促反应时间测定

　　向第 6 号试管加入稀释 100 倍的唾液 2 ml，摇匀后放入 37 ℃恒温水浴中保

　　温。每分钟取 1 滴混合液于离心管中或反应板上，加 1 滴碘化钾-碘溶液，呈橙

　　黄时取出试管，记录时间。

　　（

　　4）适 pH 测定

　　以 1 min 的间隔，依次向 1～5 号试管中加入稀释 200 倍的唾液 2 ml，摇匀，

　　同样以 1 min 间隔，将 5 只试管放入 37 ℃恒温水浴中保温，反应至所需时间。

　　依次取出，立即加入碘化钾-碘液 2 滴，充分摇匀。观察颜，可看出不同 pH

　　值时淀粉被水解的程度，不同 pH 值对唾液淀粉酶活性的影响，并确定其适 pH。

　　4. 温度对酶活性的影响

　　(1）取三支试管按下表操作:

　　试剂

　　管号

　　1

　　2

　　3

　　1%

　　淀粉溶液（

　　ml

　　）

　　1

　　1

　　1

　　放置条件

　　沸水浴

　　37

　　℃

　　冰浴

　　稀释唾液（滴）

　　4

　　4

　　4

　　分别按上述条件继续放置 10 min。

　　(2) 从三支试管中取出溶液 1 滴于离心管中或反应板上，加上 1 滴碘液，观察呈

　　现象，记录结果并解释其原因。

　　五、注意事项

　　1. 各管反应及操作应在同一水平；

　　2. 每管间隔相同的时间加样和终止反应以各管反应时间相同。

　　附件:生化实验.pdf